【摘要】： 目的:觀察天然抗菌多肽Elafin重組氣道上皮細(xì)胞與銅綠假單胞菌生物膜的相互作用以及對細(xì)菌生物膜作用的異質(zhì)性。 方法:(1)體外細(xì)胞培養(yǎng)氣道上皮A549細(xì)胞,將已構(gòu)建好的含有綠色熒光蛋白標(biāo)記的pEGFP-N1-elafin表達(dá)載體通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染系統(tǒng)(LipofectamineTM 2000)進(jìn)行A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染重組,倒置熒光顯微鏡觀察其重組效率。(2)體外平板法制備銅綠假單胞菌生物膜(BF)模型7天后,用銀染法以及掃描電鏡鑒定BF的形成。(3)設(shè)轉(zhuǎn)染未含Elafin基因空載體的A549細(xì)胞作為對照組、重組后的A549細(xì)胞(轉(zhuǎn)染未誘導(dǎo)組)、豬胰彈力蛋白酶誘導(dǎo)(NE組)、銅綠假單胞菌上清誘導(dǎo)(Pa組,實(shí)驗(yàn)組),各孵育48h后,分別采用ELISA技術(shù)和Western Blot檢測各組上清液中Elafin的分泌水平和細(xì)胞內(nèi)Elafin的含量;將銅綠假單胞菌BF載體放入四組細(xì)胞中繼續(xù)孵育8小時后取出:①于4、8、12、24小時等4個時相點(diǎn)觀察細(xì)胞形態(tài)的破壞率,②于8小時用MTT法測定細(xì)胞上清液中細(xì)菌存活數(shù),③同時四組載體經(jīng)銀染后用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行BF的形態(tài)測量、后三組載體采用掃描電鏡觀察各組BF的形態(tài)改變情況,以觀察重組氣道上皮細(xì)胞與銅
【圖文】：

2.2 Elafin 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的表達(dá)情況通過 LipofectamineTM 2000 將 Elafin 克隆載體重組到 A549 細(xì)胞中，，在熒光倒置顯微鏡下觀察到部分細(xì)胞出現(xiàn)綠色熒光計數(shù)顯示轉(zhuǎn)染效率約為 35%（圖 1-2），空載體質(zhì)粒對照組則沒有什么熒光 (圖 1-3) 。圖 1-1 轉(zhuǎn)染前的 A549 細(xì)胞(×200)Fig 1-1 A549 cell before transfected(×200）

2.2 Elafin 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的表達(dá)情況通過 LipofectamineTM 2000 將 Elafin 克隆載體重組到 A549 細(xì)胞中，在熒光倒置顯微鏡下觀察到部分細(xì)胞出現(xiàn)綠色熒光計數(shù)顯示轉(zhuǎn)染效率約為 35%（圖 1-2），空載體質(zhì)粒對照組則沒有什么熒光 (圖 1-3) 。圖 1-1 轉(zhuǎn)染前的 A549 細(xì)胞(×200)Fig 1-1 A549 cell before transfected(×200）
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R56

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2623468