【摘要】：一.研究背景 支氣管哮喘是一種由多種細(xì)胞、炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子所介導(dǎo)的具有復(fù)雜免疫機(jī)制的氣道慢性炎癥性疾病。同時(shí),也是一種復(fù)雜的多基因疾病,具有明顯的遺傳傾向,呈家族聚集性,它的發(fā)生、發(fā)展由患者遺傳易感性和環(huán)境暴露相互作用所決定。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)哮喘已經(jīng)進(jìn)行了大量的研究,越來(lái)越多的研究者致力于該疾病的遺傳病因?qū)W,到目前為止已有大量研究試圖探查哮喘人群的易感基因,希望通過(guò)對(duì)哮喘易感基因的確定幫助人們更好的了解哮喘的病理生理發(fā)生,同時(shí)也為尋找有效的哮喘治療方案提供幫助。 甲殼質(zhì)(Chitin)是自然界含量第二的多糖類(lèi),它廣泛存在于細(xì)菌、真菌、甲殼動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物等低等生物的細(xì)胞壁。甲殼質(zhì)能被一些特殊的酶降解,所以這些酶被稱(chēng)為甲殼酶,它是一種在進(jìn)化上高度保守的水解酶家族。最近的研究發(fā)現(xiàn)功能性的甲殼酶基因和一些甲殼酶類(lèi)似基因,后一種基因編碼的蛋白與甲殼質(zhì)結(jié)合,但是不催化甲殼質(zhì)。動(dòng)物和人類(lèi)的研究表明,甲殼酶和甲殼酶類(lèi)似蛋白都是天然免疫反應(yīng)的潛在正負(fù)調(diào)節(jié)因子。 CHI3L1基因就是一種甲殼酶類(lèi)似基因,位于染色體1q32.1,它所編碼的YKL-40或人類(lèi)軟骨糖蛋白39(HCgp-39)是一個(gè)40-kD的哺乳動(dòng)物糖蛋白。雖然YKL-40缺少酶的特性,但它可以結(jié)合廣泛表達(dá)的甲殼糖,從而參與到炎癥和組織重塑。大量表達(dá)的YKL-40與某些疾病的組織炎癥和重塑以及細(xì)胞生長(zhǎng)異常的病理特點(diǎn)有關(guān),如動(dòng)脈粥樣硬化、精神分裂癥、肝纖維化和一些惡性腫瘤。最近的研究表明,在哮喘患者中,血清YKL-40的水平是升高的,循環(huán)中YKL-40的水平與哮喘的嚴(yán)重程度、上皮下基底膜的厚度及肺功能相關(guān)。 CHI3L1基因包括10個(gè)外顯子,在CHI3L1基因的啟動(dòng)子區(qū)域,有-131C/G(rs4950928),-247C/T(rs10399805),和-329G/A(rs10399931)三個(gè)單核苷酸多態(tài)性與血清YKL-40有關(guān)。rs4950928G等位基因?qū)χ袊?guó)人來(lái)說(shuō)是精神分裂癥的危險(xiǎn)因子,對(duì)歐洲及歐美人群來(lái)說(shuō),它則是哮喘、氣道高反應(yīng)性以及肺功能減低的保護(hù)因子(不影響過(guò)敏風(fēng)險(xiǎn)),在歐洲人中,還增加丙肝的嚴(yán)重性,從而誘導(dǎo)肝纖維化。但這種與哮喘的關(guān)系并未推廣到韓國(guó)兒童或歐美兒童。rs10399805T等位基因與韓國(guó)兒童中升高的IgE及過(guò)敏(并非哮喘)相關(guān),在一項(xiàng)有關(guān)歐洲人及歐美人的研究中,雖然單核苷酸的多態(tài)性與YKL-40的水平是溫和的,但與過(guò)敏的關(guān)系并沒(méi)有得到重復(fù)。 最近的一項(xiàng)橫斷面的研究表明,CHI3L1基因的單核苷酸突變通過(guò)改變血清YKL-40的量來(lái)影響哮喘的發(fā)生、發(fā)展。但至今為止,中國(guó)還沒(méi)有關(guān)于CHI3L1的遺傳變異與哮喘及氣道高反應(yīng)性的報(bào)道。 二.研究目的 研究CH3L1的基因變異與中國(guó)哮喘患者之間的相關(guān)性,檢測(cè)哮喘患者血漿中的YKL-40水平是否升高,同時(shí)評(píng)估升高的血漿YKL-40與外周血中嗜酸性粒細(xì)胞和肺功能之間的關(guān)系。 三.材料和方法 收集南方醫(yī)院治療的支氣管哮喘患者260例,診斷均符合GINA2008制定的哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn),其中男135例,女125例；年齡16-77歲,平均(39.5±14.9)歲。隨機(jī)選擇272例健康體檢者作為對(duì)照組,這些人胸片正常,無(wú)咳嗽、咳痰等呼吸道癥狀,否認(rèn)慢性呼吸道疾病史及其他呼吸道疾病。無(wú)過(guò)敏性鼻炎、哮喘等用藥史,也未參加任何藥物試驗(yàn)；其中男139例,女133例；年齡18-81歲,平均(38.87±10.03)歲。 所有研究對(duì)象均知情同意,抽取4ml外周血備用,其中2ml用于檢測(cè)血常規(guī),2ml用于提取基因組DNA和檢測(cè)血漿YKL-40水平。兩組研究對(duì)象均為中國(guó)漢族人群,經(jīng)比較兩組對(duì)象年齡、性別、體重指數(shù)均無(wú)顯著性差異。哮喘組患者均進(jìn)行肺功能測(cè)定,對(duì)其進(jìn)行疾病認(rèn)識(shí)和預(yù)防發(fā)作的教育,并按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)哮喘診治指南,規(guī)范用藥(90±15)天后復(fù)診,再次測(cè)定肺功能、并抽取2ml外周血用于檢測(cè)血漿YKL-40。用試劑盒提取外周血白細(xì)胞基因組DNA, PCR擴(kuò)增CHI3L1基因的四個(gè)SNP位點(diǎn)(rs2153101,rs4950928,rs4950929,rs946263),用時(shí)間飛行質(zhì)譜方法檢測(cè)他們的單核苷酸多態(tài)性。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0和SAS軟件,基本資料的比較采用t檢驗(yàn)和X2檢驗(yàn),遺傳Hardy-Weinberg平衡定律檢驗(yàn)根據(jù)遺傳公式計(jì)算,組間等位基因型或等位基因的比較采用Armitage趨勢(shì)分析。YKL-40的水平不滿足正態(tài)分布,用中位數(shù)和四分位間距來(lái)表達(dá),評(píng)估遺傳變異與YKL-40的關(guān)系時(shí)先對(duì)其進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換,轉(zhuǎn)換后的對(duì)數(shù)值,使用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)其正態(tài)分布,然后再用于統(tǒng)計(jì)比較。兩組之間的YKL-40的比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。相關(guān)關(guān)系采用Spearman相關(guān),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 四.結(jié)果 1、哮喘組和正常組年齡之間的比較采用t檢驗(yàn),t年齡=-0.763,P=0.446。 2、哮喘組和正常組性別之間的比較采用X2檢驗(yàn),X2=0.036,P=0.850。 3、哮喘組和正常組體重指數(shù)的比較采用t檢驗(yàn),tBMI=-1.599,P=0.120。 4、哮喘組和正常組血中嗜酸性粒細(xì)胞百分比(B-EOS%)的比較采用t檢驗(yàn),t=-0.858,P=0.392。 5、哮喘患者血漿YKL-40的水平高于正常對(duì)照組(中位數(shù)(四分位間距)53.50(32.37-82.36)ng/ml vs34.27(25.62-46.53)ng/ml;Z=-3.911, P=0.000)。 6、不同嚴(yán)重程度的哮喘患者血漿YKL-40水平存在差異(X2=26.703,P=0.000)。輕度組：34.22(24.03-55.48)ng/ml;中度組：46.87(33.31-71.91 ng/ml:重度組：76.87(57.41-128.16)ng/ml。 7、治療前的血漿YKL-40與FEV1%(r=-0.511,p=0.000)、FEV1/FVC(r=-0.365,p=0.000)、FVC%(r=-0.420,p=0.000)、B-EOS%(r=0.293, p=0.001)存在相關(guān)關(guān)系。 8、治療后血漿YKL-40的水平較治療前下降(53.50(32.37-82.36)ng/ml vs43.90(34.53 to63.28)ng/ml)(Z=-2.171,P=0.030)。 9、治療后的血漿YKL-40仍與FEV1%(r=-0.298,P=0.003)、FEV1/FVC(r=-0.244,P=0.017)、FVC%(r=-0.219,P=0.032)存在相關(guān)關(guān)系 10、CHI3L1基因中的rs4950928 G等位基因與哮喘的發(fā)生有關(guān)(OR,1.41,95% CI,1.01-1.98,X2=4.03 P=0.045)。 11、CHI3L1基因中的rs2153101,rs4950929,rs946263位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)與哮喘的發(fā)生有關(guān)。 12、在rs4950928變異中,攜帶GG或CG基因型的患者血漿YKL-40的水平高于CC基因型(F=13.585,P=0.000)。 13、rs4950928 G等位基因可使哮喘患者FEV1%(F=3.373,P=0.037),FEV1:FVC (F=10.708,P=0.000),但并不減少FVC%(F=1.647,P=0.196)。 五.結(jié)論 1、CHI3L1基因的rs4950928位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(SNP)與我國(guó)哮喘的易感性顯著相關(guān),C等位基因可能是哮喘的保護(hù)基因,G等位基因可能是哮喘的易感基因。 2、哮喘患者血漿YKL-40水平顯著升高,與疾病的嚴(yán)重程度正相關(guān),且在治療癥狀好轉(zhuǎn)后下降。提示YKL-40可以作為哮喘嚴(yán)重程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)。 3、哮喘患者CHI3L1的基因變異影響血漿YKL-40,肺功能的水平,rs4950928位點(diǎn)的G等位基因可使哮喘患者FEV1%,FEV1/FVC下降,但并不減少FVC%,攜帶GG或CG基因型的患者血漿YKL-40的水平高于CC基因型。
【圖文】：

血槳YKL-40ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 程敏,聞良珍,凌霞珍,趙捷;人巨細(xì)胞病毒感染對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子和核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年07期

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本文編號(hào)：2616240