發(fā)布時間：2020-04-06 07:56

【摘要】：一.研究背景 支氣管哮喘是一種由多種細(xì)胞、炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子所介導(dǎo)的具有復(fù)雜免疫機制的氣道慢性炎癥性疾病。同時,也是一種復(fù)雜的多基因疾病,具有明顯的遺傳傾向,呈家族聚集性,它的發(fā)生、發(fā)展由患者遺傳易感性和環(huán)境暴露相互作用所決定。目前國內(nèi)外對哮喘已經(jīng)進行了大量的研究,越來越多的研究者致力于該疾病的遺傳病因?qū)W,到目前為止已有大量研究試圖探查哮喘人群的易感基因,希望通過對哮喘易感基因的確定幫助人們更好的了解哮喘的病理生理發(fā)生,同時也為尋找有效的哮喘治療方案提供幫助。 甲殼質(zhì)(Chitin)是自然界含量第二的多糖類,它廣泛存在于細(xì)菌、真菌、甲殼動物、節(jié)肢動物等低等生物的細(xì)胞壁。甲殼質(zhì)能被一些特殊的酶降解,所以這些酶被稱為甲殼酶,它是一種在進化上高度保守的水解酶家族。最近的研究發(fā)現(xiàn)功能性的甲殼酶基因和一些甲殼酶類似基因,后一種基因編碼的蛋白與甲殼質(zhì)結(jié)合,但是不催化甲殼質(zhì)。動物和人類的研究表明,甲殼酶和甲殼酶類似蛋白都是天然免疫反應(yīng)的潛在正負(fù)調(diào)節(jié)因子。 CHI3L1基因就是一種甲殼酶類似基因,位于染色體1q32.1,它所編碼的YKL-40或人類軟骨糖蛋白39(HCgp-39)是一個40-kD的哺乳動物糖蛋白。雖然YKL-40缺少酶的特性,但它可以結(jié)合廣泛表達的甲殼糖,從而參與到炎癥和組織重塑。大量表達的YKL-40與某些疾病的組織炎癥和重塑以及細(xì)胞生長異常的病理特點有關(guān),如動脈粥樣硬化、精神分裂癥、肝纖維化和一些惡性腫瘤。最近的研究表明,在哮喘患者中,血清YKL-40的水平是升高的,循環(huán)中YKL-40的水平與哮喘的嚴(yán)重程度、上皮下基底膜的厚度及肺功能相關(guān)。 CHI3L1基因包括10個外顯子,在CHI3L1基因的啟動子區(qū)域,有-131C/G(rs4950928),-247C/T(rs10399805),和-329G/A(rs10399931)三個單核苷酸多態(tài)性與血清YKL-40有關(guān)。rs4950928G等位基因?qū)χ袊藖碚f是精神分裂癥的危險因子,對歐洲及歐美人群來說,它則是哮喘、氣道高反應(yīng)性以及肺功能減低的保護因子(不影響過敏風(fēng)險),在歐洲人中,還增加丙肝的嚴(yán)重性,從而誘導(dǎo)肝纖維化。但這種與哮喘的關(guān)系并未推廣到韓國兒童或歐美兒童。rs10399805T等位基因與韓國兒童中升高的IgE及過敏(并非哮喘)相關(guān),在一項有關(guān)歐洲人及歐美人的研究中,雖然單核苷酸的多態(tài)性與YKL-40的水平是溫和的,但與過敏的關(guān)系并沒有得到重復(fù)。 最近的一項橫斷面的研究表明,CHI3L1基因的單核苷酸突變通過改變血清YKL-40的量來影響哮喘的發(fā)生、發(fā)展。但至今為止,中國還沒有關(guān)于CHI3L1的遺傳變異與哮喘及氣道高反應(yīng)性的報道。 二.研究目的 研究CH3L1的基因變異與中國哮喘患者之間的相關(guān)性,檢測哮喘患者血漿中的YKL-40水平是否升高,同時評估升高的血漿YKL-40與外周血中嗜酸性粒細(xì)胞和肺功能之間的關(guān)系。 三.材料和方法 收集南方醫(yī)院治療的支氣管哮喘患者260例,診斷均符合GINA2008制定的哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn),其中男135例,女125例；年齡16-77歲,平均(39.5±14.9)歲。隨機選擇272例健康體檢者作為對照組,這些人胸片正常,無咳嗽、咳痰等呼吸道癥狀,否認(rèn)慢性呼吸道疾病史及其他呼吸道疾病。無過敏性鼻炎、哮喘等用藥史,也未參加任何藥物試驗；其中男139例,女133例；年齡18-81歲,平均(38.87±10.03)歲。 所有研究對象均知情同意,抽取4ml外周血備用,其中2ml用于檢測血常規(guī),2ml用于提取基因組DNA和檢測血漿YKL-40水平。兩組研究對象均為中國漢族人群,經(jīng)比較兩組對象年齡、性別、體重指數(shù)均無顯著性差異。哮喘組患者均進行肺功能測定,對其進行疾病認(rèn)識和預(yù)防發(fā)作的教育,并按照中華醫(yī)學(xué)會哮喘診治指南,規(guī)范用藥(90±15)天后復(fù)診,再次測定肺功能、并抽取2ml外周血用于檢測血漿YKL-40。用試劑盒提取外周血白細(xì)胞基因組DNA, PCR擴增CHI3L1基因的四個SNP位點(rs2153101,rs4950928,rs4950929,rs946263),用時間飛行質(zhì)譜方法檢測他們的單核苷酸多態(tài)性。 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS13.0和SAS軟件,基本資料的比較采用t檢驗和X2檢驗,遺傳Hardy-Weinberg平衡定律檢驗根據(jù)遺傳公式計算,組間等位基因型或等位基因的比較采用Armitage趨勢分析。YKL-40的水平不滿足正態(tài)分布,用中位數(shù)和四分位間距來表達,評估遺傳變異與YKL-40的關(guān)系時先對其進行對數(shù)轉(zhuǎn)換,轉(zhuǎn)換后的對數(shù)值,使用Kolmogorov-Smirnov檢驗其正態(tài)分布,然后再用于統(tǒng)計比較。兩組之間的YKL-40的比較采用非參數(shù)檢驗。相關(guān)關(guān)系采用Spearman相關(guān),以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 四.結(jié)果 1、哮喘組和正常組年齡之間的比較采用t檢驗,t年齡=-0.763,P=0.446。 2、哮喘組和正常組性別之間的比較采用X2檢驗,X2=0.036,P=0.850。 3、哮喘組和正常組體重指數(shù)的比較采用t檢驗,tBMI=-1.599,P=0.120。 4、哮喘組和正常組血中嗜酸性粒細(xì)胞百分比(B-EOS%)的比較采用t檢驗,t=-0.858,P=0.392。 5、哮喘患者血漿YKL-40的水平高于正常對照組(中位數(shù)(四分位間距)53.50(32.37-82.36)ng/ml vs34.27(25.62-46.53)ng/ml;Z=-3.911, P=0.000)。 6、不同嚴(yán)重程度的哮喘患者血漿YKL-40水平存在差異(X2=26.703,P=0.000)。輕度組：34.22(24.03-55.48)ng/ml;中度組：46.87(33.31-71.91 ng/ml:重度組：76.87(57.41-128.16)ng/ml。 7、治療前的血漿YKL-40與FEV1%(r=-0.511,p=0.000)、FEV1/FVC(r=-0.365,p=0.000)、FVC%(r=-0.420,p=0.000)、B-EOS%(r=0.293, p=0.001)存在相關(guān)關(guān)系。 8、治療后血漿YKL-40的水平較治療前下降(53.50(32.37-82.36)ng/ml vs43.90(34.53 to63.28)ng/ml)(Z=-2.171,P=0.030)。 9、治療后的血漿YKL-40仍與FEV1%(r=-0.298,P=0.003)、FEV1/FVC(r=-0.244,P=0.017)、FVC%(r=-0.219,P=0.032)存在相關(guān)關(guān)系 10、CHI3L1基因中的rs4950928 G等位基因與哮喘的發(fā)生有關(guān)(OR,1.41,95% CI,1.01-1.98,X2=4.03 P=0.045)。 11、CHI3L1基因中的rs2153101,rs4950929,rs946263位點未發(fā)現(xiàn)與哮喘的發(fā)生有關(guān)。 12、在rs4950928變異中,攜帶GG或CG基因型的患者血漿YKL-40的水平高于CC基因型(F=13.585,P=0.000)。 13、rs4950928 G等位基因可使哮喘患者FEV1%(F=3.373,P=0.037),FEV1:FVC (F=10.708,P=0.000),但并不減少FVC%(F=1.647,P=0.196)。 五.結(jié)論 1、CHI3L1基因的rs4950928位點單核苷酸多態(tài)性(SNP)與我國哮喘的易感性顯著相關(guān),C等位基因可能是哮喘的保護基因,G等位基因可能是哮喘的易感基因。 2、哮喘患者血漿YKL-40水平顯著升高,與疾病的嚴(yán)重程度正相關(guān),且在治療癥狀好轉(zhuǎn)后下降。提示YKL-40可以作為哮喘嚴(yán)重程度的評價指標(biāo)。 3、哮喘患者CHI3L1的基因變異影響血漿YKL-40,肺功能的水平,rs4950928位點的G等位基因可使哮喘患者FEV1%,FEV1/FVC下降,但并不減少FVC%,攜帶GG或CG基因型的患者血漿YKL-40的水平高于CC基因型。
【圖文】：

血槳YKL-40ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R562.25

【參考文獻】

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1 程敏,聞良珍,凌霞珍,趙捷;人巨細(xì)胞病毒感染對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子和核轉(zhuǎn)錄因子表達的影響[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年07期

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本文編號：2616240