【摘要】： 第一部分重組人角質(zhì)細胞生長因子2對大鼠機械通氣所致肺損傷的保護作用 目的本實驗通過建立大鼠機械通氣肺損傷模型,旨在研究重組人角質(zhì)細胞生長因子-2對機械通氣所致肺損傷的保護作用。方法實驗選用SPF級雄性SD大鼠40只,隨機分成四組：Control組為正常對照組：大鼠僅行氣管插管,不行機械通氣；LV組為小潮氣量機械通氣組(參數(shù)設(shè)置：潮氣量=6ml/kg,RR=70次／分,PEEP=3cmH20,Fi02=21％)；VILI組為大潮氣量機械通氣即機械通氣肺損傷組(參數(shù)設(shè)置：潮氣量=20ml/kg,RR=70次／分,PEEP=0cmH2O,Fi02=21％)；rhKGF-2+VILI組為機械通氣肺損傷+rhKGF-2預先給藥治療組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時后再行大潮氣量機械通氣,參數(shù)同VILI組)。所有動物在機械通氣4小時后放血處死,收集標本,行動脈血氣分析,并檢測肺濕干比(W/D),行支氣管肺泡灌洗,檢測支氣管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白濃度,BALF中有核細胞總數(shù)及中性粒細胞計數(shù),觀察光鏡(HE染色)及電鏡下肺組織病理改變并行肺損傷評分。結(jié)果機械通氣4小時后VILI組Pa02(mmHg)與Control組及LV組相比均明顯降低(p0.05),而rhKGF-2+VILI組Pa02較VILI組明顯升高(p0.05),LV組PaO2與Control組相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。VILI組肺W/D、肺損傷評分、BALF中有核細胞總數(shù)及中性粒細胞計數(shù)(×105/m1)及BALF中蛋白濃度(ug/ml)與Control組及LV組相比均明顯升高(p0.05),rhKGF-2+VILI組上述指標均較VILI組明顯降低(p0.05),LV組上述指標與Control組相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。VILI組光鏡下可見肺泡間隔增厚,有較多炎癥細胞浸潤,肺泡腔內(nèi)可見大量水腫液并有紅細胞和中性粒細胞滲出；電鏡下可見肺上皮細胞嚴重破壞、基底膜破損間斷、肺泡-毛細血管屏障斷裂不連續(xù)。而rhKGF-2+VILI組肺組織損傷程度較VILI組明顯減輕。LV組肺組織病理變化與Control組無明顯差別。結(jié)論1.健康大鼠接受20ml/kg潮氣量通氣4h可出現(xiàn)機械通氣肺損傷。2.機械通氣前72小時給予5mg/kg重組人角質(zhì)細胞生長因子-2氣道內(nèi)滴注給藥可以有效減輕機械通氣對肺組織的損傷程度,起到較好的保護作用。 第二部分重組人角質(zhì)細胞生長因子2對大鼠機械通氣所致肺損傷的保護機制研究 目的本實驗通過研究rhKGF-2對VILI大鼠肺組織MPO活性、BALF中炎癥因子、肺泡Ⅱ型上皮細胞數(shù)目及表面活性物質(zhì)蛋白的影響,旨在探討rhKGF-2對大鼠機械通氣所致肺損傷可能的保護機制。方法實驗選用SPF級雄性SD大鼠40只,隨機分成四組：Control組為正常對照組(大鼠僅行氣管插管,不行機械通氣),rhKGF-2組為單純rhKGF-2給藥組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時后行氣管插管,不行機械通氣),VILI組為機械通氣肺損傷組(參數(shù)設(shè)置：Fi02=21%,VT=20ml/kg,PEEP=0cmH2O,RR=70次／分),rhKGF-2+VILI組為機械通氣肺損傷+rhKGF-2預先給藥治療組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時后再行大潮氣量機械通氣,參數(shù)同VILI組)。所有動物在機械通氣4小時后經(jīng)頸動脈放血處死,檢測肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性,ELISA法測定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α及MIP-2的含量,Realtime PCR檢測肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,Western blot法測定肺組織中表面活性蛋白C(SP-C)水平,SP-C免疫組化染色檢測肺泡Ⅱ型上皮細胞增殖情況。結(jié)果VILI組肺組織MPO活性、BALF中TNF-α及MIP-2的含量均較Control組明顯增高(p0.05),而rhKGF-2+VILI組MPO活性、BALF中TNF-α及MIP-2的含量均較VILI組明顯降低(p0.05),rhKGF-2組上述指標與Control組相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)；VILI組肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,表面活性蛋白C(SP-C)水平及肺泡上皮細胞SP-C標記指數(shù)均較Control組明顯降低(p0.05),而rhKGF-2+VILI組肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,SP-C蛋白水平及肺泡上皮細胞SPC標記指數(shù)均較VILI組明顯升高(p0.05),rhKGF-2組上述指標與Control組相比也明顯升高(p0.05)。結(jié)論重組人角質(zhì)細胞生長因子-2可能是通過抑制炎癥因子的表達,減輕中性粒細胞在肺部的浸潤和活化,通過促進肺泡Ⅱ型上皮細胞增殖及肺泡表面活性物質(zhì)蛋白的表達從而減輕機械通氣所致肺損傷。
【圖文】：

二.實驗方法1.實驗分組動物被隨機分為4個實驗組(圖1一1):6只/組，實驗中呼吸機參數(shù)及給藥方案根據(jù)文獻及預實驗結(jié)果。具體分組情況如下:(1)正常對照組(Control):大鼠經(jīng)麻醉后行氣管插管，讓其自主呼吸，，不行機械通氣，在氣管插管4h后處死動物。于麻醉前72h用無創(chuàng)直視法肺內(nèi)滴注 2.5ml/kg1XPBS。(2)小潮氣量機械通氣組(LV):大鼠經(jīng)麻醉后行氣管插管，接動物呼吸機，參數(shù)設(shè)置:吸入氧濃度=21%，潮氣量=6ml/kg， PEEP=3cmHZO，RR二70次/分

一rhKGF一2對機械通氣所致肺損傷大鼠氧分壓的影響在吸入空氣(即氧濃度為21%)條件下，實驗前各組動物的動脈血Pa02(mlnllg)差異無顯著性(p)0.05)(圖1一3)。機械通氣4h后，VILI組動脈血Pa02(71.64士5.6)較正常對照組(99.83士 1.72)和小潮氣量機械通氣組(98.50士1.64)明顯降低(p(0.05)，rhKG卜2治療組動脈血Pao:(91.50士3.83)雖較正常對照組有所下降，但仍能維持在較高的水平，與vILI組相比有顯著差異 (p<0.05);小潮氣量機械通氣組動脈血Pa02與正常對照組相比均無顯著差異 (P>0.05)(圖1一4)。命國息日20目aContmlVILI比KGFF-2+VILI圖1一3實驗開始前各組動物動脈血Pa02恤nHg)基礎(chǔ)值的比較。實驗前各組動物的動脈血PaOZ(咖Hg)差異無顯著性(p>0.腸)。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)士SD表示(n=6)。一 一一 {{{】】一 一 一 一 一 lllllllll息命國日20.山ContmlVILI比KGF‘2+VILI圖1一機械通氣4小時后各組動物動脈血Pa02(mmHg)的比較。大潮氣量機械通
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R563

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 張新日,徐永健;機械通氣所致肺損傷的概念和發(fā)生機制[J];國外醫(yī)學.呼吸系統(tǒng)分冊;2004年03期

2 劉琳,李永平,黃樹其,林健賢,張文忻;KGF-2治療兔角膜中央堿燒傷的實驗研究[J];眼外傷職業(yè)眼病雜志.附眼科手術(shù);2004年06期

3 張新日;杜永成;姜宏英;許建英;徐永健;;肺泡巨噬細胞活化在大鼠呼吸機相關(guān)肺損傷中的作用[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2006年07期

4 李詠梅,夏求明;外源性肺泡表面活性物質(zhì)對大鼠呼吸機相關(guān)性肺損傷的保護作用[J];中國胸心血管外科臨床雜志;2005年02期

本文編號：2615419