【摘要】： 第一部分重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子2對(duì)大鼠機(jī)械通氣所致肺損傷的保護(hù)作用 目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠機(jī)械通氣肺損傷模型,旨在研究重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2對(duì)機(jī)械通氣所致肺損傷的保護(hù)作用。方法實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)雄性SD大鼠40只,隨機(jī)分成四組：Control組為正常對(duì)照組：大鼠僅行氣管插管,不行機(jī)械通氣；LV組為小潮氣量機(jī)械通氣組(參數(shù)設(shè)置：潮氣量=6ml/kg,RR=70次／分,PEEP=3cmH20,Fi02=21％)；VILI組為大潮氣量機(jī)械通氣即機(jī)械通氣肺損傷組(參數(shù)設(shè)置：潮氣量=20ml/kg,RR=70次／分,PEEP=0cmH2O,Fi02=21％)；rhKGF-2+VILI組為機(jī)械通氣肺損傷+rhKGF-2預(yù)先給藥治療組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時(shí)后再行大潮氣量機(jī)械通氣,參數(shù)同VILI組)。所有動(dòng)物在機(jī)械通氣4小時(shí)后放血處死,收集標(biāo)本,行動(dòng)脈血?dú)夥治?并檢測(cè)肺濕干比(W/D),行支氣管肺泡灌洗,檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白濃度,BALF中有核細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),觀察光鏡(HE染色)及電鏡下肺組織病理改變并行肺損傷評(píng)分。結(jié)果機(jī)械通氣4小時(shí)后VILI組Pa02(mmHg)與Control組及LV組相比均明顯降低(p0.05),而rhKGF-2+VILI組Pa02較VILI組明顯升高(p0.05),LV組PaO2與Control組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。VILI組肺W/D、肺損傷評(píng)分、BALF中有核細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(×105/m1)及BALF中蛋白濃度(ug/ml)與Control組及LV組相比均明顯升高(p0.05),rhKGF-2+VILI組上述指標(biāo)均較VILI組明顯降低(p0.05),LV組上述指標(biāo)與Control組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。VILI組光鏡下可見(jiàn)肺泡間隔增厚,有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)大量水腫液并有紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞滲出；電鏡下可見(jiàn)肺上皮細(xì)胞嚴(yán)重破壞、基底膜破損間斷、肺泡-毛細(xì)血管屏障斷裂不連續(xù)。而rhKGF-2+VILI組肺組織損傷程度較VILI組明顯減輕。LV組肺組織病理變化與Control組無(wú)明顯差別。結(jié)論1.健康大鼠接受20ml/kg潮氣量通氣4h可出現(xiàn)機(jī)械通氣肺損傷。2.機(jī)械通氣前72小時(shí)給予5mg/kg重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2氣道內(nèi)滴注給藥可以有效減輕機(jī)械通氣對(duì)肺組織的損傷程度,起到較好的保護(hù)作用。 第二部分重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子2對(duì)大鼠機(jī)械通氣所致肺損傷的保護(hù)機(jī)制研究 目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究rhKGF-2對(duì)VILI大鼠肺組織MPO活性、BALF中炎癥因子、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞數(shù)目及表面活性物質(zhì)蛋白的影響,旨在探討rhKGF-2對(duì)大鼠機(jī)械通氣所致肺損傷可能的保護(hù)機(jī)制。方法實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)雄性SD大鼠40只,隨機(jī)分成四組：Control組為正常對(duì)照組(大鼠僅行氣管插管,不行機(jī)械通氣),rhKGF-2組為單純r(jià)hKGF-2給藥組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時(shí)后行氣管插管,不行機(jī)械通氣),VILI組為機(jī)械通氣肺損傷組(參數(shù)設(shè)置：Fi02=21%,VT=20ml/kg,PEEP=0cmH2O,RR=70次／分),rhKGF-2+VILI組為機(jī)械通氣肺損傷+rhKGF-2預(yù)先給藥治療組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時(shí)后再行大潮氣量機(jī)械通氣,參數(shù)同VILI組)。所有動(dòng)物在機(jī)械通氣4小時(shí)后經(jīng)頸動(dòng)脈放血處死,檢測(cè)肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性,ELISA法測(cè)定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α及MIP-2的含量,Realtime PCR檢測(cè)肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,Western blot法測(cè)定肺組織中表面活性蛋白C(SP-C)水平,SP-C免疫組化染色檢測(cè)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增殖情況。結(jié)果VILI組肺組織MPO活性、BALF中TNF-α及MIP-2的含量均較Control組明顯增高(p0.05),而rhKGF-2+VILI組MPO活性、BALF中TNF-α及MIP-2的含量均較VILI組明顯降低(p0.05),rhKGF-2組上述指標(biāo)與Control組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；VILI組肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,表面活性蛋白C(SP-C)水平及肺泡上皮細(xì)胞SP-C標(biāo)記指數(shù)均較Control組明顯降低(p0.05),而rhKGF-2+VILI組肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,SP-C蛋白水平及肺泡上皮細(xì)胞SPC標(biāo)記指數(shù)均較VILI組明顯升高(p0.05),rhKGF-2組上述指標(biāo)與Control組相比也明顯升高(p0.05)。結(jié)論重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2可能是通過(guò)抑制炎癥因子的表達(dá),減輕中性粒細(xì)胞在肺部的浸潤(rùn)和活化,通過(guò)促進(jìn)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增殖及肺泡表面活性物質(zhì)蛋白的表達(dá)從而減輕機(jī)械通氣所致肺損傷。
【圖文】：

二.實(shí)驗(yàn)方法1.實(shí)驗(yàn)分組動(dòng)物被隨機(jī)分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組(圖1一1):6只/組，實(shí)驗(yàn)中呼吸機(jī)參數(shù)及給藥方案根據(jù)文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。具體分組情況如下:(1)正常對(duì)照組(Control):大鼠經(jīng)麻醉后行氣管插管，讓其自主呼吸，，不行機(jī)械通氣，在氣管插管4h后處死動(dòng)物。于麻醉前72h用無(wú)創(chuàng)直視法肺內(nèi)滴注 2.5ml/kg1XPBS。(2)小潮氣量機(jī)械通氣組(LV):大鼠經(jīng)麻醉后行氣管插管，接動(dòng)物呼吸機(jī)，參數(shù)設(shè)置:吸入氧濃度=21%，潮氣量=6ml/kg， PEEP=3cmHZO，RR二70次/分

一rhKGF一2對(duì)機(jī)械通氣所致肺損傷大鼠氧分壓的影響在吸入空氣(即氧濃度為21%)條件下，實(shí)驗(yàn)前各組動(dòng)物的動(dòng)脈血Pa02(mlnllg)差異無(wú)顯著性(p)0.05)(圖1一3)。機(jī)械通氣4h后，VILI組動(dòng)脈血Pa02(71.64士5.6)較正常對(duì)照組(99.83士 1.72)和小潮氣量機(jī)械通氣組(98.50士1.64)明顯降低(p(0.05)，rhKG卜2治療組動(dòng)脈血Pao:(91.50士3.83)雖較正常對(duì)照組有所下降，但仍能維持在較高的水平，與vILI組相比有顯著差異 (p<0.05);小潮氣量機(jī)械通氣組動(dòng)脈血Pa02與正常對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異 (P>0.05)(圖1一4)。命國(guó)息日20目aContmlVILI比KGFF-2+VILI圖1一3實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前各組動(dòng)物動(dòng)脈血Pa02恤nHg)基礎(chǔ)值的比較。實(shí)驗(yàn)前各組動(dòng)物的動(dòng)脈血PaOZ(咖Hg)差異無(wú)顯著性(p>0.腸)。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)士SD表示(n=6)。一 一一 {{{】】一 一 一 一 一 lllllllll息命國(guó)日20.山ContmlVILI比KGF‘2+VILI圖1一機(jī)械通氣4小時(shí)后各組動(dòng)物動(dòng)脈血Pa02(mmHg)的比較。大潮氣量機(jī)械通
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R563

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 張新日,徐永健;機(jī)械通氣所致肺損傷的概念和發(fā)生機(jī)制[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊(cè);2004年03期

2 劉琳,李永平,黃樹(shù)其,林健賢,張文忻;KGF-2治療兔角膜中央堿燒傷的實(shí)驗(yàn)研究[J];眼外傷職業(yè)眼病雜志.附眼科手術(shù);2004年06期

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本文編號(hào)：2615419