發(fā)布時(shí)間：2020-03-26 12:56

【摘要】：目的： 觀察L-精氨酸(L-Arginine，L-Arg)對哮喘氣道重塑大鼠氣道平滑肌細(xì)胞(airway smooth musele cell，ASMC)的細(xì)胞周期分布及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白(cell cycle regulatory protein，CCRP)表達(dá)水平的影響，探討L-Arg體內(nèi)干預(yù)對哮喘大鼠ASMC增殖的可能干預(yù)機(jī)制。 方法： 選用SPF級健康大鼠60只，隨機(jī)分成三組：對照組(正常對照)、哮喘組(哮喘模型)、干預(yù)組(L-Arg干預(yù))，每組20只。利用卵白蛋白(OVA)加免疫佐劑(氫氧化鋁)致敏和OVA激發(fā)的方法建立大鼠哮喘氣道重塑模型，采用硝酸還原酶法檢測血清NO_2~-/NO_3~-含量；各組大鼠支氣管—肺組織行HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察支氣管管壁的病理變化，圖像分析技術(shù)測定支氣管內(nèi)管壁及肺內(nèi)支氣管平滑肌厚度；流式細(xì)胞儀檢測ASMC的細(xì)胞周期分布；免疫組化染色法測定ASMC內(nèi)CCRP cyclin E、cyclin A、cyclin B、P27~(kip1)的表達(dá)。 結(jié)果： (1)哮喘組大鼠支氣管粘膜增厚，皺襞增多，部分上皮細(xì)胞脫落，肺泡隔增厚，支氣管內(nèi)管壁、平滑肌層的厚度、ASMC數(shù)目顯著大于對照組；干預(yù)組大鼠支氣管內(nèi)管壁的厚度、平滑肌層的厚度、ASMC數(shù)目顯著小于哮喘組，但大于對照組。(2)哮喘組血清一氧化氮(nitricoxide，NO)水平明顯低于對照組，而干預(yù)組則顯著高于哮喘組。(3)哮喘組大鼠處于相對靜止?fàn)顟B(tài)的G_0/G_1期ASMC比例及負(fù)性CCRP P27~(kipl)表達(dá)水平顯著低于對照組；處于增殖狀態(tài)的S期、G_2/M期ASMC比例及正性CCRP cyclinE、cyclinA、cyclinB表達(dá)水平顯著高于對照組。(4)干預(yù)組G_0/G_1期ASMC比例及負(fù)性CCRP P27~(kipl)表達(dá)水平顯著高于哮喘組；S期ASMC比例及正性CCRP cyclinE、cyclinA表達(dá)水平顯著低于哮喘組。 結(jié)論： (1) ASMC在哮喘病理狀態(tài)下處于異常增殖狀態(tài)。(2) NO可抑制哮喘大鼠ASMC的增殖，其機(jī)制可能系通過下調(diào)哮喘ASMC內(nèi)正性CCRP的表達(dá)水平、上調(diào)負(fù)性CCRP的表達(dá)水
【圖文】：

暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文1.2.4氣道平滑肌細(xì)胞增殖機(jī)制研究表明〔跳‘氏“」，cyclinD(Dl、D2或D3)是外界各種因素刺激ASMC進(jìn)入GIA期的主要調(diào)控蛋白，cyclinD與細(xì)胞周期依賴性激酶CDK4或CDK6形成復(fù)合物可促使cyclinE表達(dá)，cyclinE是調(diào)控ASMC進(jìn)入G:后期的周期蛋白，而cyclinE與CDK4結(jié)合形成復(fù)合物，通過促使Rb蛋白磷酸化并使其釋放核轉(zhuǎn)錄因子EZF從而活化DNA聚合酶，促進(jìn)ASMC通過G，/S限制點(diǎn)，進(jìn)入自主分裂程序，因此cyclinE是調(diào)控ASMC增殖的重要細(xì)胞周期蛋白。在G，期至s期轉(zhuǎn)換的每個(gè)時(shí)期〔62，63〕，均存在CKI對CDK或cyclin一CDK活性的抑制，使PRb保持去磷酸化且結(jié)合EZF及其他蛋白的狀態(tài)，，從而抑制細(xì)胞周期的進(jìn)展。

圖3[.1]氣道橫切面形態(tài)學(xué)側(cè)t示意圖.4氣道平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞周期分布測定1)氣道平滑肌細(xì)胞的獲取、分離各組大鼠于激發(fā)結(jié)束4一6小時(shí)后腹腔注射10%水合氯醛(3Omg無菌分離兩肺(除右肺中葉)葉支氣管及其分支，PBS沖洗后至于D手術(shù)顯微鏡下仔細(xì)剔除支氣管周圍的結(jié)締組織、血管等，均勻剪碎成1皿xIllllnxllnln大小的組織塊，置于用D一hanks配制的O.1%W型膠3~4小時(shí)，中間吹打兩次，分別用100目和300目不銹鋼濾網(wǎng)過濾除1000r/min離心smin，棄上清，再用PBS洗兩次，制成細(xì)胞懸液，調(diào)整(2)a一ACtin抗體標(biāo)記氣道平滑肌細(xì)胞l)試管中加入4%的多聚甲醛室溫固定40正n，I000r/min離心smin，洗一次，棄上清2)用0.25%TritonX一100液冰上作用smin，1000r/min離心smin，
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2601470