本文關(guān)鍵詞：基于MAPK和NF-κB信號通路的姬松茸多糖抑制哮喘氣道炎癥的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過OVA誘導(dǎo)建立支氣管哮喘小鼠模型,并給予姬松茸多糖進(jìn)行治療,研究姬松茸多糖對支氣管哮喘氣道炎癥的影響及其可能的作用機(jī)制。方法取正常雌性BALB/c小鼠40只,體重18±5g,隨機(jī)分為5組,每組8只,正常對照組、哮喘模型組、姬松茸多糖低劑量治療組、姬松茸多糖高劑量治療組、地塞米松陽性對照組。除正常對照組外,其余3組于第1天、第14天分2次腹腔注射抗原液1ml(含卵蛋白100mg,氫氧化鋁干粉100mg)致敏,正常對照組用等量的生理鹽水進(jìn)行致敏。第22天開始將小鼠放入自制的不完全封閉的箱內(nèi),給予1%卵蛋白(OVA)溶液用霧化器吸入激發(fā),每天1次,每次20分鐘,連續(xù)4天。正常對照組用等量的生理鹽水進(jìn)行激發(fā)。每次霧化吸入激發(fā)前1小時給予姬松茸多糖干預(yù),姬松茸多糖低劑量組給予200 mg/Kg灌胃、姬松茸多糖高劑量組給予400mg/Kg灌胃,正常對照組和哮喘模型組灌胃等量的生理鹽水,每天1次,共10天。第25天,末次激發(fā)結(jié)束后24小時內(nèi),各組小鼠均以乙醚麻醉后,按要求取標(biāo)本。采末次致敏加強(qiáng)24h乙醚麻醉后處死小鼠,剪開頸部皮膚,并于氣管正中處剪一小口,插入氣管套管。以磷酸鹽緩沖液4mL行支氣管肺泡灌洗,來回沖洗3次,收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)和肺組織標(biāo)本等。通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測支氣管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IL-13含量,用Diff-Quick染色觀察BALF中炎癥細(xì)胞分類和數(shù)目變化。通過HE染色法、PAS染色法觀察小鼠肺組織炎性細(xì)胞浸潤等病理變化；免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠肺組織內(nèi)NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況；免疫印跡法檢測各組小鼠肺組織內(nèi)p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 (1)與正常對照組相比較,哮喘模型組小鼠BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計數(shù)較明顯升高,差異顯著(P0.05)；姬松茸多糖低、高劑量組小鼠BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計數(shù)較哮喘模型組明顯降低,差異顯著(P0.05),與正常組比較,哮喘模型組小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平升高,差異顯著(P0.05)；姬松茸多糖低、高劑量組小鼠BALF中細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平降低,與哮喘模型組比較,差異顯著(P0.05)(2)通過觀察肺組織HE、PAS染色可見,哮喘模型組小鼠支氣管痙攣,管腔狹窄,上皮細(xì)胞腫脹、脫落,支氣管及血管周圍有大量炎癥浸潤,以嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞為主,黏膜及黏膜下層水腫明顯。姬松茸多糖低、高劑量組小鼠肺組織病理學(xué)改變較哮喘模型組顯著減輕。正常組小鼠肺組織無明顯病理改變。姬松茸多糖低、高劑量組之間比較,無顯著差異(P0.05)。(3)通過觀察免疫組化染色：NF-κBp65的陽性表達(dá)在哮喘模型組中水平明顯增高；而在姬松茸多糖提取物的兩組陽性蛋白表達(dá)水平明顯降低。(4)免疫印跡法檢測結(jié)果顯示：p-ERK、p-p38MAPK、p-JNK的表達(dá)在哮喘模型組明顯高于對照組(P0.05)；而在姬松茸多糖兩組的表達(dá)明顯低于哮喘模型組(P0.05)。結(jié)論：姬松茸多糖可能通過抑制哮喘小鼠肺組織內(nèi)p-p38MAPK、p-ERK、p-JNK及NF-κBp65蛋白的表達(dá),下調(diào)Th2類炎癥細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平,有效抑制哮喘小鼠氣道炎癥細(xì)胞浸潤,從而減輕氣道炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：支氣管哮喘 姬松茸多糖 MAPK NF-κB 炎性細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 中英文縮略詞10-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 材料與方法16-32
• 2.1 實驗材料16-18
• 2.1.1 實驗動物16
• 2.1.2 藥物16
• 2.1.3 主要試劑16-17
• 2.1.4 主要儀器17-18
• 2.1.5 器械與其他用品18
• 2.2 實驗方法18-30
• 2.2.1 分組18
• 2.2.2 動物模型建立18-19
• 2.2.3 取材方法19
• 2.2.4 BALF中的各炎癥細(xì)胞分類及計數(shù)19-20
• 2.2.5 BALF中IL-4、IL-5、IL-13的含量檢測20-24
• 2.2.6 肺組織病理學(xué)檢查24-26
• 2.2.7 免疫組織化學(xué)染色法檢測NF-κB p65的表達(dá)26-27
• 2.2.8 肺組織內(nèi)p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK的表達(dá)檢測27-30
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)處理30-32
• 第三章 結(jié)果32-39
• 3.1 各實驗組小鼠BALF中的炎癥細(xì)胞分類及計數(shù)32
• 3.2 各實驗組小鼠BALF中炎性細(xì)胞的變化32
• 3.3 各實驗組小鼠BALF中炎癥細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13的含量變化32-34
• 3.4 組織染色34-36
• 3.4.1 HE染色34-35
• 3.4.2 PAS染色35-36
• 3.4.3 NF-κB p65免疫組織化學(xué)染色36
• 3.5 Western blotting檢測各組小鼠肺組織中p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK的表達(dá)情況36-39
• 3.5.1 p-ERK的表達(dá)36-37
• 3.5.2 p-JNK的表達(dá)37-38
• 3.5.3 P-P38MAPK 的表達(dá)38-39
• 第四章 討論39-44
• 第五章 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 綜述50-56
• 參考文獻(xiàn)54-56

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：基于MAPK和NF-κB信號通路的姬松茸多糖抑制哮喘氣道炎癥的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：259429