【摘要】：目的 1.建立卵清蛋白致敏/激發(fā)肺部變應(yīng)性炎癥小鼠模型,為進一步實驗打下基礎(chǔ)。 2.探討卵清蛋白致敏/激發(fā)哮喘小鼠肺臟病理及肺泡灌洗液(BALF)的細胞形態(tài) 和分子生物學(xué)改變,初步分析哮喘變應(yīng)性炎癥的發(fā)病機制。 方法 20只4-6周齡雌性BALB/c小鼠隨機分為兩組,每組10只,實驗組應(yīng)用卵清蛋白于第0、14天致敏,第24-26天激發(fā)小鼠,對照組用生理鹽水。末次激發(fā)結(jié)束后48小時處死小鼠,留取血清、肺臟病理、肺泡灌洗液、肺臟冰凍組織等標本,比較兩組肺臟病理變化,及肺泡灌洗液內(nèi)細胞計數(shù)和細胞分類計數(shù)。 結(jié)果 1.致敏/激發(fā)組小鼠肺臟病理組織學(xué)改變符合變應(yīng)性炎癥表現(xiàn)。 2.與正常對照組小鼠相比,致敏/激發(fā)組小鼠的BALF中細胞總數(shù)顯著增多,細胞分類計數(shù)結(jié)果表明嗜酸性粒細胞、淋巴細胞比例明顯增多。 3.致敏/激發(fā)組小鼠BALF和血漿中IL-4水平明顯升高,而IFN-Y水平顯著下降。 結(jié)論 1.采用卵清蛋白致敏/激發(fā)小鼠,成功建立了小鼠哮喘模型。 2.通過對血清及肺泡灌洗液中各種細胞因子的測定,證實哮喘免疫紊亂類型是Thl/Th2比例失衡,Th2細胞增多及其分泌的各種細胞因子在哮喘的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。 目的 1.分離、培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs),為進一步的實驗提供實驗材料。 2.觀察骨髓間充質(zhì)干細胞的形態(tài)變化,流式細胞術(shù)鑒定細胞表面標志物,初步了解骨髓間充質(zhì)干細胞的特性。 方法 無菌狀態(tài)下完整分離小鼠下肢股骨和脛骨,提取骨髓腔內(nèi)細胞,紅細胞裂解液裂解無核的紅細胞,將骨髓有核細胞至于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。通過反復(fù)換液去除懸浮細胞,通過多次傳代可以除去貼壁的巨噬細胞和成纖維細胞,達到骨髓間充質(zhì)干細胞的純化。取P2代細胞行流式細胞儀檢測細胞表面標記CD29、CD34、CD44的表達。 結(jié)果 1.顯微鏡下,骨髓間充質(zhì)干細胞呈貼壁生長,多為長梭形,在細胞生長旺盛期,形態(tài)均一,生長速度快,呈典型的旋渦狀克隆樣生長。 2.細胞儀分析結(jié)果表明P2代細胞中CD29(+)、CD44(+)、CD34(-)細胞純度95%。 結(jié)論 通過反復(fù)試驗,我們成功分離和純化了骨髓間充質(zhì)干細胞,通過反復(fù)傳代擴增細胞數(shù)量,為進一步的實驗提供細胞來源。 目的 研究腹腔注射骨髓間充質(zhì)干細胞是否可以減輕哮喘小鼠肺部的炎癥反應(yīng),發(fā)揮治療效果,初步探索其可能的作用機制。 方法 實驗分為五組： 1.對照組；生理鹽水腹腔注射及霧化吸入。 2.哮喘對照組；OVA致敏/激發(fā)(方法同第一部分)。 3.哮喘+BMSCs治療組；每次激發(fā)前2小時腹腔注射2ml含1×107個BMSCs的培養(yǎng)液。 4.哮喘+BMSCs培養(yǎng)液治療組；每次激發(fā)前2小時腹腔注射2mlBMSCs的培養(yǎng)液。 5.哮喘+BMSCs裂解液治療組；每次激發(fā)前2小時腹腔注射含2ml含1×107個BMSCs的細胞裂解液。 連續(xù)激發(fā)三次,木次激發(fā)后48小時處死小鼠,收集肺臟病理、肺泡灌洗液、肺冰凍組織等進行分析。 結(jié)果 1.與正常對照組相比,哮喘對照組表現(xiàn)出明顯的變應(yīng)性炎癥表現(xiàn)。 2.與哮喘對照組相比,BMSCs治療組顯示出明顯的治療作用：肺部變應(yīng)性炎癥反應(yīng)明顯減輕,肺泡及血清中的炎癥因子明顯下降。 3.與哮喘對照組相比,BMSCs培養(yǎng)液治療組及BMSCs裂解液治療組也顯示出一定的治療作用。 4.與BMSCs治療組相比,BMSCs培養(yǎng)液治療組及MSC裂解液治療組治療作用相對較弱。 5. BMSCs培養(yǎng)液治療組及BMSCs裂解液治療組治療作用基本相似。 6.實驗中未觀察到明顯BMSCs治療的不良反應(yīng)。 結(jié)論 1.注射BMSCs對急性哮喘炎癥有治療作用,且無明顯不良反應(yīng)。 2. BMSCs培養(yǎng)液及BMSCs裂解液對急性哮喘也有治療作用,但是該作用與直接注射BMSCs的治療作用相比較弱。 目的 通過觀察與BMSCs共培養(yǎng)后的T淋巴細胞的功能狀態(tài),進一步闡述BMSCs治療哮喘的作用機制。 方法 分離脾臟T淋巴細胞,BMSCs與T淋巴細胞體外共培養(yǎng),共培養(yǎng)72小時后收集懸浮T細胞及培養(yǎng)液,離心后,上清液測IL-4、IL-17、IFN-γ水平。沉淀后的T細胞提取細胞蛋白,應(yīng)用Western blot測定蛋白中Lck含量。實驗共分為六組： 1.哮喘小鼠T淋巴細胞單獨培養(yǎng)； 2.正常小鼠T淋巴細胞單獨培養(yǎng)； 3.正常小鼠T淋巴細胞與正常小鼠BMSC在DMEM培養(yǎng)液中共培養(yǎng)； 4.哮喘小鼠T淋巴細胞與哮喘小鼠BMSC在DMEM培養(yǎng)液中共培養(yǎng)； 5.哮喘小鼠T淋巴細胞與正常小鼠BMSC在DMEM培養(yǎng)液中共培養(yǎng)； 6.哮喘小鼠T淋巴細胞與正常小鼠BMSC在哮喘小鼠肺組織勻漿中共培養(yǎng)。 結(jié)果 1.各組培養(yǎng)液中IL-4、IL-17、IFN-γ水平無明顯差異。 2.第一組哮喘小鼠和第四組與哮喘小鼠BMSCs共培養(yǎng)的哮喘小鼠T淋巴細胞Lck蛋白的表達增多,其他組T淋巴細胞Lck蛋白表達無明顯差別。 結(jié)論 1. BMSCs通過抑制T淋巴細胞內(nèi)Lck蛋白的表達抑制其活化,阻斷其功能。 2.哮喘小鼠BMSCs功能受損,不能發(fā)揮免疫抑制功能。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R562.25

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 黃丹琳;易著文;;干細胞移植在腎臟疾病中的應(yīng)用[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2012年02期

2 陳海英;高連如;張寧坤;韓明哲;;臍帶Wharton’s jelly源間充質(zhì)干細胞——細胞治療理想選擇[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2012年01期

3 吳景文;賈丹兵;曲超法;趙博;呂作宏;李建;胡祥;章翔;;干細胞移植治療小兒腦癱的臨床療效:40例報告[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2011年05期

4 齊凱;董麗媛;陳顯久;趙婕;薛國芳;陳彥;牛勃;;人臍帶來源間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年23期

5 曹慧玲;許文榮;張春兵;;間質(zhì)干細胞在腎臟疾病治療中的應(yīng)用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年15期

6 沈俐;高碩;錢暉;史云燕;朱偉;顧建美;許文榮;;人臍帶間質(zhì)干細胞來源的外切體對大鼠腎小管上皮細胞缺氧損傷的干預(yù)作用[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年03期

7 徐會濤;周穎;王冰瑩;毛飛;徐會娟;許文榮;朱偉;錢暉;;人臍帶間質(zhì)干細胞的CM-Dil標記及其移植在急性腎損傷大鼠體內(nèi)的示蹤研究[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 楊大志;BMP-2/膠原/摻鍶羥基磷灰石成骨活性材料的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

2 黃丹琳;人臍帶間充質(zhì)干細胞移植治療大鼠梗阻性腎間質(zhì)纖維化的實驗研究[D];中南大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 齊凱;人臍帶來源間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化初探[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 劉翔飛;人脂肪間充質(zhì)干細胞治療糖尿病腎病大鼠的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

，

本文編號：2586450