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抑制消減雜交技術(shù)在篩選矽肺大鼠差異表達(dá)基因中的應(yīng)用

發(fā)布時(shí)間:2020-02-09 00:00
【摘要】:目的對(duì)正常大鼠肺組織與矽肺大鼠肺組織之間基因表達(dá)差異進(jìn)行比較,篩選與矽肺相關(guān)的差異表達(dá)基因片段。方法 30只SD大鼠隨機(jī)分為2個(gè)組,對(duì)照組6只,實(shí)驗(yàn)組24只。實(shí)驗(yàn)組大鼠采用非氣管暴露法染塵制作矽肺大鼠模型,對(duì)照組灌注生理鹽水,利用HE切片確定建立模型成功;抑制消減雜交技術(shù)構(gòu)建cDNA雙向消減文庫(kù);菌液RCR技術(shù)初步篩選cDNA消減文庫(kù),將獲得的陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序、同源性比對(duì)及生物信息學(xué)分析。結(jié)果擴(kuò)增消減cDNA文庫(kù)獲得400多個(gè)白色陽(yáng)性克隆,隨機(jī)挑取252個(gè)白色克隆用PCR進(jìn)行擴(kuò)增,95%的克隆中均有100~1 500bp的插入片段,經(jīng)測(cè)序,得到具有差異表達(dá)的基因175個(gè)。經(jīng)生物信息學(xué)分析表明,篩選出的已知差異表達(dá)基因與眾多生物學(xué)過(guò)程和分子功能相關(guān),包括物質(zhì)代謝、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞黏附、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等,其中許多差異表達(dá)基因與矽肺的關(guān)系尚未被報(bào)道。結(jié)論利用抑制消減雜交技術(shù)可以建立高質(zhì)量的矽肺正、反向差異消減cDNA文庫(kù),篩選與矽肺相關(guān)的已知和未知基因,為尋找矽肺診斷和預(yù)后的檢查指標(biāo)和篩選治療靶點(diǎn)提供有用的信息。

【參考文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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