【摘要】：目的: 研究NCI-H292細(xì)胞在多聚左旋精氨酸（Poly-L-arginine）聯(lián)合脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用于下白介素-6（interleukin-6,IL-6）、IL-8、IL-13、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（Eotaxin）的表達(dá)水平，以及肝素和L-單甲基-精氨酸（L-NG-monomethyl-arginine,L-NMMA）對(duì)其細(xì)胞因子表達(dá)的影響。 方法: 1.細(xì)胞培養(yǎng)及哮喘微環(huán)境模型的建立 將NCI-H292細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的常規(guī)培養(yǎng)基中，每周傳代兩次；選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞以3×105/500μl密度接種于24孔培養(yǎng)板中，用LPS預(yù)先將氣道上皮細(xì)胞激活，模擬哮喘氣道上皮細(xì)胞模型。 2.細(xì)胞因子水平的測(cè)定 按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為空白對(duì)照組(培養(yǎng)液)、LPS組(5μg/ml)、多聚左旋精氨酸組(Max=40μg/ml)、LPS+poly-L-arginine組、LPS+poly-L-arginine+肝素(100u/L)組、LPS+poly-L-arginine+L-NMMA(Max=0.8mM)組，并依照分組要求加入不同濃度的多聚左旋精氨酸、LPS、肝素、L-NMMA；共培養(yǎng)20小時(shí)，，收集細(xì)胞上清液。按照試劑盒說明采用ELISA法檢測(cè)各組IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的表達(dá)水平，并比較各組間的差異。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件分析，數(shù)據(jù)以x±s表示。多組間比較采用單因素方差分析（one-wayANOVA）；兩兩比較時(shí)方差齊時(shí)采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用Dunnett’s T3檢驗(yàn)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1.在多聚左旋精氨酸作用下，IL-6、IL-8、Eotaxin的表達(dá)水平明顯增高，且在多聚左旋精氨酸為5μg/ml時(shí)，IL-6、IL8的表達(dá)水平最高；在多聚左旋精氨酸為20μg/ml時(shí)，Eotaxin的表達(dá)水平最高；但各濃度之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而單獨(dú)LPS組、多聚左旋精氨酸組與對(duì)照組比較，IL-6、IL-8、Eotaxin的水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.在多聚左旋精氨酸作用下，IL-13的表達(dá)未見明顯改變；各組IL-13的水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.將多聚左旋精氨酸、LPS及肝素共同作用NCI-H292細(xì)胞時(shí)，IL-6、IL-8、Eotaxin的表達(dá)水平明顯低于LPS+poly-L-arginine組(P0.05)。 4.將多聚左旋精氨酸、LPS及L-NMMA共同作用NCI-H292細(xì)胞時(shí)，L-NMMA對(duì)各組IL-6、IL-8的表達(dá)無影響(P0.05)。 結(jié)論: 1.多聚左旋精氨酸能夠促進(jìn)LPS誘導(dǎo)的NCI-H292細(xì)胞IL-6、IL-8、Eotaxin的表達(dá)水平，但對(duì)IL-13的表達(dá)水平?jīng)]有影響。 2.肝素能夠抑制多聚左旋精氨酸聯(lián)合LPS誘導(dǎo)的NCI-H292細(xì)胞IL-6、IL-8的表達(dá)水平，而L-NMMA對(duì)IL-6、IL-8的表達(dá)水平?jīng)]有影響。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2550565