【摘要】：目的:IL-17主要由CD4+T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,在宿主抗感染、抗腫瘤及自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用,是僑聯(lián)固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。本研究利用IL-17基因敲除小鼠首先探討IL-17在胞內(nèi)寄生菌沙眼衣原體呼吸道感染中的免疫保護(hù)作用。固有免疫應(yīng)答是宿主抗感染的第一道防線,我們進(jìn)一步探討IL-17在沙眼衣原體呼吸道感染中對固有免疫應(yīng)答細(xì)胞--中性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞及γδT細(xì)胞增殖、活化及功能的影響,為IL-17在沙眼衣原體呼吸道感染中的保護(hù)作用機(jī)制增添新的內(nèi)容。方法:WT(C57BL/6)和IL-17-/-小鼠經(jīng)鼻腔吸入1×103 IFU沙眼衣原體小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm)建立沙眼衣原體小鼠肺炎模型。通過監(jiān)測WT和IL-17-/-小鼠感染后的體重變化,肺組織衣原體生長和病理學(xué)改變,確定IL-17在Cm呼吸道感染中的作用。為了探討IL-17對宿主抗衣原體固有免疫應(yīng)答的影響,取感染不同時(shí)間點(diǎn)小鼠支氣管灌洗液以及肺組織和脾臟單個(gè)核細(xì)胞懸液,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測WT和IL-17-/-小鼠肺組織CD11b+Gr-1+中性粒細(xì)胞、CD3-NK1.1+NK細(xì)胞和CD3+TCRγδ+T細(xì)胞百分率及絕對細(xì)胞數(shù),探討IL-17對固有免疫細(xì)胞增殖的影響;用抗鼠CD69抗體染色NK細(xì)胞,探討IL-17對NK細(xì)胞活化的影響;利用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色技術(shù)檢測WT和IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟NK細(xì)胞和γδT細(xì)胞分泌IFNγ水平,探討IL-17對NK及γδT細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響;采用RT-PCR技術(shù)檢測兩種小鼠肺組織中性粒細(xì)胞趨化因子IL-6、MIP-2和KC mRNA的表達(dá),確定IL-17是否通過誘導(dǎo)趨化因子的產(chǎn)生促進(jìn)中性粒細(xì)胞向感染部位的募集。結(jié)果:一定劑量的Cm經(jīng)呼吸道感染誘導(dǎo)小鼠衣原體肺炎,WT小鼠和IL-17-/-小鼠從感染后第3天開始體重明顯下降,WT小鼠在感染后第7天體重降至最低水平,之后逐漸開始回升,而IL-17-/-小鼠體重持續(xù)下降,從感染的第7天開始與WT鼠比較有顯著差異;且IL-17-/-小鼠在感染的第7天及第14天肺組織衣原體繁殖及病理損傷均比WT小鼠嚴(yán)重。以上結(jié)果提示,IL-17在Cm呼吸道感染中具有免疫保護(hù)作用。進(jìn)一步我們利用IL-17基因敲除小鼠對IL-17抗衣原體感染免疫保護(hù)作用機(jī)制,尤其IL-17對機(jī)體固有免疫應(yīng)答的細(xì)胞-中性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞及γδT細(xì)胞的影響進(jìn)行探討。1.中性粒細(xì)胞:與WT小鼠相比,感染后第3天和第7天,IL-17-/-小鼠支氣管灌洗液、肺組織和脾臟中CD11b+Gr-1+中性粒細(xì)胞百分率和細(xì)胞總數(shù)均顯著降低(P0.001,P0.01,P0.05);進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)感染后第7天,IL-17-/-小鼠肺組織中性粒細(xì)胞趨化因子IL-6、MIP-2和KC mRNA水平較WT鼠顯著降低(P0.05,P0.001,P0.001),提示IL-17可能通過誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞趨化因子(IL-6、MIP-2、KC)的表達(dá)促進(jìn)中性粒細(xì)胞募集到炎癥部位。2.NK細(xì)胞:在感染后第3天和第7天,IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟中CD3-NK1.1+NK細(xì)胞增殖、活化分子CD69表達(dá)以及分泌IFNγ水平均顯著低于WT小鼠,這提示IL-17在宿主抗衣原體NK細(xì)胞的增殖、活化以及細(xì)胞因子的產(chǎn)生中發(fā)揮作用。3.γδT細(xì)胞:Cm呼吸道感染后第3天和第7天,IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟中CD3+TCRγδ+T細(xì)胞增殖水平及肺組織CD3+TCRγδ+T分泌的IFNγ水平與WT小鼠比較沒有顯著差異。結(jié)論:Cm呼吸道感染誘導(dǎo)小鼠衣原體肺炎。IL-17在胞內(nèi)寄生菌衣原體呼吸道感染中發(fā)揮免疫保護(hù)作用。IL-17通過調(diào)節(jié)抗衣原體宿主固有免疫應(yīng)答發(fā)揮作用。IL-17通過誘導(dǎo)Cm感染部位中性粒細(xì)胞趨化性細(xì)胞因子IL-6、MIP-2和KC的表達(dá),促進(jìn)中性粒細(xì)胞在感染肺組織的聚集。IL-17可促進(jìn)Cm感染部位NK細(xì)胞的增殖和活化,以及促進(jìn)活化的NK細(xì)胞分泌IFNγ。而IL-17對感染肺組織γδT細(xì)胞的增殖及γδT細(xì)胞IFNγ的產(chǎn)生沒有影響。
【圖文】：

.2.2 Cm 感染后 WT 小鼠和 IL-17-/-小鼠肺組織中衣原體的生長變化1.2.2 Chlamydia growth (IFU) following Cm lung infection in WT mice and IL-17-/-mice.The results were presented as mean±SD. **p＜0.01, ***p＜0.001..3 Cm 感染 IL-17-/-小鼠肺組織炎癥較重制備 Cm 感染后第 7 天和第 14 天 WT 小鼠與 IL-17-/-小鼠肺組織，病理切H&E 染色后顯微鏡下觀察。圖 1.2.3 顯示，與 WT 小鼠比較，感染第 7 天，7-/-小鼠肺組織出現(xiàn)大量的炎癥細(xì)胞浸潤和炎癥漿液滲出，肺組織實(shí)變嚴(yán)重。第 14 天，WT 小鼠肺組織炎癥減輕， 而 IL-17-/-小鼠肺組織仍顯示較嚴(yán)重的織病理改變。

.2.3 Cm 呼吸道感染后 WT 小鼠和 IL-17-/-小鼠肺組織病理改變1.2.3 Histopathologcal changes in the lung of WT mice and IL-17-/-mice followiintranasal infection with Cm. Sections were photographed low(x200)magnification. a and c, WT mice ,day 7 and 14 postinfection; b aIL-17-/-mice, day 7 and 14 postinfection衣原體己超過淋球菌成為泌尿生殖道感染性疾病最常見的致病菌，染引起的性傳播疾病最常見臨床表現(xiàn)是男性尿道炎和女性子宮、輸卵管炎、盆腔炎最終可引起輸卵管性不孕、流產(chǎn)、宮外孕等早期的無癥狀感染常常導(dǎo)致治療的延誤，因此采取有效的預(yù)防措的衣原體疫苗對控制衣原體感染具有重要意義。對宿主抵抗沙眼制的進(jìn)一步研究有助于加快衣原體疫苗的研發(fā)。 作為炎癥介質(zhì)，，與炎癥反應(yīng)、自身免疫性疾病及移植排斥反應(yīng)的發(fā)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R56

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本文編號：2537495