發(fā)布時間：2019-09-18 12:11

【摘要】：目的:IL-17主要由CD4+T細胞分泌的細胞因子,在宿主抗感染、抗腫瘤及自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用,是僑聯(lián)固有免疫和適應性免疫的橋梁。本研究利用IL-17基因敲除小鼠首先探討IL-17在胞內寄生菌沙眼衣原體呼吸道感染中的免疫保護作用。固有免疫應答是宿主抗感染的第一道防線,我們進一步探討IL-17在沙眼衣原體呼吸道感染中對固有免疫應答細胞--中性粒細胞、NK細胞及γδT細胞增殖、活化及功能的影響,為IL-17在沙眼衣原體呼吸道感染中的保護作用機制增添新的內容。方法:WT(C57BL/6)和IL-17-/-小鼠經(jīng)鼻腔吸入1×103 IFU沙眼衣原體小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm)建立沙眼衣原體小鼠肺炎模型。通過監(jiān)測WT和IL-17-/-小鼠感染后的體重變化,肺組織衣原體生長和病理學改變,確定IL-17在Cm呼吸道感染中的作用。為了探討IL-17對宿主抗衣原體固有免疫應答的影響,取感染不同時間點小鼠支氣管灌洗液以及肺組織和脾臟單個核細胞懸液,利用流式細胞術檢測WT和IL-17-/-小鼠肺組織CD11b+Gr-1+中性粒細胞、CD3-NK1.1+NK細胞和CD3+TCRγδ+T細胞百分率及絕對細胞數(shù),探討IL-17對固有免疫細胞增殖的影響;用抗鼠CD69抗體染色NK細胞,探討IL-17對NK細胞活化的影響;利用細胞內細胞因子染色技術檢測WT和IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟NK細胞和γδT細胞分泌IFNγ水平,探討IL-17對NK及γδT細胞分泌細胞因子的影響;采用RT-PCR技術檢測兩種小鼠肺組織中性粒細胞趨化因子IL-6、MIP-2和KC mRNA的表達,確定IL-17是否通過誘導趨化因子的產生促進中性粒細胞向感染部位的募集。結果:一定劑量的Cm經(jīng)呼吸道感染誘導小鼠衣原體肺炎,WT小鼠和IL-17-/-小鼠從感染后第3天開始體重明顯下降,WT小鼠在感染后第7天體重降至最低水平,之后逐漸開始回升,而IL-17-/-小鼠體重持續(xù)下降,從感染的第7天開始與WT鼠比較有顯著差異;且IL-17-/-小鼠在感染的第7天及第14天肺組織衣原體繁殖及病理損傷均比WT小鼠嚴重。以上結果提示,IL-17在Cm呼吸道感染中具有免疫保護作用。進一步我們利用IL-17基因敲除小鼠對IL-17抗衣原體感染免疫保護作用機制,尤其IL-17對機體固有免疫應答的細胞-中性粒細胞、NK細胞及γδT細胞的影響進行探討。1.中性粒細胞:與WT小鼠相比,感染后第3天和第7天,IL-17-/-小鼠支氣管灌洗液、肺組織和脾臟中CD11b+Gr-1+中性粒細胞百分率和細胞總數(shù)均顯著降低(P0.001,P0.01,P0.05);進一步發(fā)現(xiàn)感染后第7天,IL-17-/-小鼠肺組織中性粒細胞趨化因子IL-6、MIP-2和KC mRNA水平較WT鼠顯著降低(P0.05,P0.001,P0.001),提示IL-17可能通過誘導中性粒細胞趨化因子(IL-6、MIP-2、KC)的表達促進中性粒細胞募集到炎癥部位。2.NK細胞:在感染后第3天和第7天,IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟中CD3-NK1.1+NK細胞增殖、活化分子CD69表達以及分泌IFNγ水平均顯著低于WT小鼠,這提示IL-17在宿主抗衣原體NK細胞的增殖、活化以及細胞因子的產生中發(fā)揮作用。3.γδT細胞:Cm呼吸道感染后第3天和第7天,IL-17-/-小鼠肺組織及脾臟中CD3+TCRγδ+T細胞增殖水平及肺組織CD3+TCRγδ+T分泌的IFNγ水平與WT小鼠比較沒有顯著差異。結論:Cm呼吸道感染誘導小鼠衣原體肺炎。IL-17在胞內寄生菌衣原體呼吸道感染中發(fā)揮免疫保護作用。IL-17通過調節(jié)抗衣原體宿主固有免疫應答發(fā)揮作用。IL-17通過誘導Cm感染部位中性粒細胞趨化性細胞因子IL-6、MIP-2和KC的表達,促進中性粒細胞在感染肺組織的聚集。IL-17可促進Cm感染部位NK細胞的增殖和活化,以及促進活化的NK細胞分泌IFNγ。而IL-17對感染肺組織γδT細胞的增殖及γδT細胞IFNγ的產生沒有影響。
【圖文】：

.2.2 Cm 感染后 WT 小鼠和 IL-17-/-小鼠肺組織中衣原體的生長變化1.2.2 Chlamydia growth (IFU) following Cm lung infection in WT mice and IL-17-/-mice.The results were presented as mean±SD. **p＜0.01, ***p＜0.001..3 Cm 感染 IL-17-/-小鼠肺組織炎癥較重制備 Cm 感染后第 7 天和第 14 天 WT 小鼠與 IL-17-/-小鼠肺組織，病理切H&E 染色后顯微鏡下觀察。圖 1.2.3 顯示，與 WT 小鼠比較，感染第 7 天，7-/-小鼠肺組織出現(xiàn)大量的炎癥細胞浸潤和炎癥漿液滲出，肺組織實變嚴重。第 14 天，WT 小鼠肺組織炎癥減輕， 而 IL-17-/-小鼠肺組織仍顯示較嚴重的織病理改變。

.2.3 Cm 呼吸道感染后 WT 小鼠和 IL-17-/-小鼠肺組織病理改變1.2.3 Histopathologcal changes in the lung of WT mice and IL-17-/-mice followiintranasal infection with Cm. Sections were photographed low(x200)magnification. a and c, WT mice ,day 7 and 14 postinfection; b aIL-17-/-mice, day 7 and 14 postinfection衣原體己超過淋球菌成為泌尿生殖道感染性疾病最常見的致病菌，染引起的性傳播疾病最常見臨床表現(xiàn)是男性尿道炎和女性子宮、輸卵管炎、盆腔炎最終可引起輸卵管性不孕、流產、宮外孕等早期的無癥狀感染常常導致治療的延誤，因此采取有效的預防措的衣原體疫苗對控制衣原體感染具有重要意義。對宿主抵抗沙眼制的進一步研究有助于加快衣原體疫苗的研發(fā)。 作為炎癥介質，，與炎癥反應、自身免疫性疾病及移植排斥反應的發(fā)
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R56

【相似文獻】

相關期刊論文 前6條

1 胡志東;徐建青;;線粒體與固有免疫應答[J];病毒學報;2011年04期

2 趙國軍;唐朝克;;固有免疫應答與動脈粥樣硬化關系的研究進展[J];生物化學與生物物理進展;2013年05期

3 謝廣成;段招軍;;抗病毒感染固有免疫應答的信號轉導[J];病毒學報;2012年03期

4 周曉娜;;RIG-I信號轉導途徑在機體抗病毒中的作用[J];生命的化學;2007年05期

5 劉海波;陳濤涌;;AIM2炎性復合體識別細胞內DNA啟動機體固有免疫應答[J];中國腫瘤生物治療雜志;2009年02期

6 ;[J];;年期

相關會議論文 前2條

1 高永輝;陳淑萍;王俊英;喬麗娜;韓焱晶;吉長福;徐秋玲;劉俊嶺;;電針慢性壓迫性損傷大鼠誘導的固有免疫應答初步研究[A];中國針灸學會經(jīng)絡分會第十二屆全國針灸經(jīng)絡學術研討會論文集[C];2012年

2 李曉菲;王靜;瞿滌;;人工合成香菇六糖(β-glu6)促進小鼠腹腔巨噬細胞固有免疫應答信號通路的研究[A];2012全國臨床微生物與感染免疫學術研討會論文集[C];2012年

相關博士學位論文 前2條

1 張云;STA-2介導的秀麗隱桿線蟲表皮細胞結構破壞引發(fā)的固有免疫應答[D];蘇州大學;2016年

2 王鵬;孕期乙醇暴露對大鼠腦內TLR4介導的固有免疫應答的影響[D];第四軍醫(yī)大學;2014年

相關碩士學位論文 前2條

1 劉騰麗;白細胞介素17（IL-17）在衣原體呼吸道感染中的免疫保護作用及對固有免疫應答的影響[D];天津醫(yī)科大學;2016年

2 叢秋霞;鞭毛蛋白在重組減毒鼠傷寒沙門菌誘導固有免疫應答中的作用研究[D];揚州大學;2011年

本文編號：2537495