【摘要】：目的:本研究主要應(yīng)用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等手段,探討在特發(fā)性肺纖維化中,肺祖細(xì)胞增殖功能的調(diào)控。方法:1.制備β-肌動(dòng)蛋白-綠色熒光蛋白(β-actin-green fluorescent protein,β-actin-GFP)小鼠肺組織單細(xì)胞懸液。2.利用流式細(xì)胞術(shù)分選得到肺祖細(xì)胞,分別和正常人及特發(fā)性肺纖維化患者來(lái)源的肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng),觀察肺祖細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。3.應(yīng)用TGF-β的受體抑制劑SB431542處理小鼠的肺成纖維細(xì)胞,測(cè)定其所分泌的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(fibroblast growth factor 1,FGFl)和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2(fibroblast growth factor2,FGF2)的變化。4.將小鼠肺祖細(xì)胞分別與小鼠肺成纖維細(xì)胞分泌的FGF1、FGF2、FGFl/FGF2混合液共培養(yǎng),應(yīng)用倒置顯微鏡觀察FGFl、FGF2及FGFl/2混合液對(duì)肺祖細(xì)胞生長(zhǎng)的影響作用。結(jié)果:1.利用流式細(xì)胞術(shù)分選得到的肺祖細(xì)胞和正常人來(lái)源的肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng),8d后肺祖細(xì)胞克隆形成率為(3.5±1.1)%;而肺祖細(xì)胞和特發(fā)性肺纖維化患者來(lái)源的肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),肺祖細(xì)胞的克隆量明顯減少,克隆形成率僅為(0.04±0.04)%,兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.應(yīng)用TGF-β的受體抑制劑SB431542處理小鼠的肺成纖維細(xì)胞24小時(shí)后,在熒光顯微鏡下可以觀察到SB431542可上調(diào)肺成纖維細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子FGF1和FGF2的基因表達(dá)量,FGFlm RNA的表達(dá)量由對(duì)照組的0.0002上調(diào)到實(shí)驗(yàn)組的0.0055,FGF2 m RNA的表達(dá)量由對(duì)照組的0.0008上調(diào)到實(shí)驗(yàn)組的0.0015,兩組數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而小鼠肺成纖維細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有明顯變化。3.分別應(yīng)用FGFl、FGF2及FGFl/2混合液?jiǎn)为?dú)培養(yǎng)小鼠肺祖細(xì)胞,8d后觀察到小鼠肺祖細(xì)胞成功出現(xiàn)克隆,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:在特發(fā)性肺纖維化發(fā)展過(guò)程中,成纖維細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子FGFl、FGF2可調(diào)控肺祖細(xì)胞的增殖功能。
【圖文】：

圖 1 流式細(xì)胞術(shù)分選小鼠肺祖細(xì)胞注：圖 1.1 篩選出活細(xì)胞群圖 1.2 在活細(xì)胞群中 CD31/34/45 APC-CY7 陰性、EpCAM-PE細(xì)胞是上皮細(xì)胞圖 1.3 上皮細(xì)胞中 Sca-lAPC-A 及 GFP-FITC 雙陽(yáng)性的細(xì)胞是肺

圖 2 肺祖細(xì)胞的增殖情況（共培養(yǎng)第 8 天）注：圖 2.4-2.6 肺祖細(xì)胞和正常人肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng) 8d，應(yīng)用倒置熒光顯微鏡下觀察肺祖細(xì)胞的克隆形成(NHF 組)圖 2.7-2.9 肺祖細(xì)胞和 IPF 患者肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng) 8d 后，，應(yīng)用倒置熒光顯微鏡下觀察肺祖細(xì)胞的克隆形成(IPF 組)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R563

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 尹薈菁;鄧炯;;肺干細(xì)胞和肺癌干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國(guó)肺癌雜志;2015年10期

2 馬彩云;李向臣;關(guān)偉軍;馬月輝;;肺干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年19期

3 徐喜媛;楊敬平;那仁格日勒;烏日娜;田紅軍;宋慧芳;王慧;;內(nèi)皮祖細(xì)胞移植對(duì)膿毒癥大鼠的治療作用[J];中華危重病急救醫(yī)學(xué);2015年06期

4 紀(jì)孝偉;王興臣;吳春玲;;成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2014年03期

5 王紅陽(yáng);劉晨;王雁;戈艷蕾;劉信榮;劉和亮;;人臍帶血干細(xì)胞抑制大鼠肺纖維化及肺巨噬細(xì)胞TGF-β1的表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年01期

6 黃坤;吳曉梅;王欣燕;康小文;肖金玲;李兆國(guó);陸鵬;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠肺纖維化的影響[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2012年09期

7 田吉來(lái);唐琴琴;趙應(yīng)征;李校X;孫昌正;;成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子給藥技術(shù)研究進(jìn)展[J];中國(guó)生化藥物雜志;2010年05期

8 高建;劉干;李俊;;肺成纖維細(xì)胞在肺纖維化進(jìn)程中的作用[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2010年09期

9 魏麗;董麗;靳占峰;付志軍;;成纖維細(xì)胞激活蛋白在小鼠肺纖維化模型中的表達(dá)[J];中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志;2010年03期

10 黃鶯;葉燕青;施娟娟;馬紅艷;;肺纖維化形成過(guò)程中大鼠成纖維細(xì)胞對(duì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的影響[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年04期

本文編號(hào)：2526685