【摘要】：目的通過降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)處理血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)和頸動(dòng)脈損傷大鼠模型,探討NF-κB在CGRP調(diào)節(jié)VSMCs表型改變和動(dòng)脈損傷后新生內(nèi)膜增殖中的作用。方法建立頸動(dòng)脈損傷大鼠模型,并分為對照組和CGRP組(n=24),通過HE染色觀察新生內(nèi)膜形成情況,并Western blot檢測兩組動(dòng)物損傷動(dòng)脈中NF-κB p65蛋白表達(dá)情況。以組織塊貼壁培養(yǎng)法獲得VSMCs,并分為對照組、IL-1β組(給予IL-1β處理)、CGRP組(給予IL-1β+CGRP處理)和CGRP8-37組(在IL-1β+CGRP基礎(chǔ)上,加CGRP8-37)(n=24),Western blot法檢測細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65蛋白和細(xì)胞表型標(biāo)志蛋白表達(dá)變化,MTT法檢測細(xì)胞增殖能力。結(jié)果①對照組大鼠的頸動(dòng)脈損傷后7 d時(shí)新生內(nèi)膜明顯增加,至28 d時(shí)基本穩(wěn)定,而CGRP組7 d和28 d時(shí)新生內(nèi)膜面積較對照組同時(shí)間點(diǎn)顯著降低[7d:(2.09±0.26)vs(3.76±0.33);14 d:(3.52±0.41)vs(6.38±0.61),P0.05];且與對照組比較,CGRP組1周時(shí)NF-κB p65蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.05),而28 d時(shí)兩組NF-κB p65表達(dá)水平無差異(P0.05)。②在體外培養(yǎng)VSMCs中,IL-1β處理顯著激活細(xì)胞NF-κB p65蛋白表達(dá)(P0.05),伴隨著VSMCs收縮表現(xiàn)標(biāo)志蛋白SMα-actin表達(dá)減少和OPN表達(dá)增加(P0.05);同時(shí)再給予CGRP處理后,則顯著減弱IL-1β誘導(dǎo)的NF-κB p65蛋白表達(dá)(P0.05),且使VSMCs合成表現(xiàn)標(biāo)志蛋白OPN表達(dá)減少。RT-PCR分析獲得相一致的結(jié)果。同時(shí),CGRP顯著抑制IL-1β引起的VSMCs增殖。③CGRP受體阻斷劑CGRP8-37可以阻斷CGRP減弱IL-1β誘導(dǎo)的NF-κB p65蛋白表達(dá)作用,并抑制CGRP對VSMC表達(dá)蛋白調(diào)節(jié)作用。結(jié)論 CGRP與受體結(jié)合后抑制NF-κB激活,促進(jìn)VSMCs分化標(biāo)志基因表達(dá),從而抑制細(xì)胞增殖,降低動(dòng)脈損傷后新生內(nèi)膜增殖,這對于防治動(dòng)脈粥樣硬化和血管成形術(shù)后再狹窄可能具有重要應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:Objective to treat the rat model of vascular smooth muscle cell (vascular smooth muscle cells,VSMCs) and carotid artery injury by calcitonin gene-related peptide (calcitonin gene related peptide,CGRP). To investigate the role of NF- 魏 B in the regulation of VSMCs phenotypic changes by CGRP and neointimal proliferation after arterial injury. Methods A rat model of carotid artery injury was established and divided into control group and CGRP group (n = 24). Neointimal formation was observed by HE staining, and expression of NF- kappa B p65 protein in injured arteries of two groups was detected by Western blot. VSMCs, was obtained by tissue adherent culture and divided into control group, IL-1 尾 group (IL-1 尾 treated), CGRP group (treated with IL-1 尾 CGRP) and CGRP8- 37 group (IL-1 尾 CGRP plus CGRP8-37) (n = 24), and IL-1 尾 treated), CGRP group (treated with IL-1 尾 CGRP) and CGRP8- 37 group (on the basis of IL-1 尾 CGRP) (n = 24). The expression of NF- 魏 B p65 protein and phenotypic marker protein in cells was detected by Western blot assay, and the proliferation ability of cells was detected by MTT assay. Results 1 the neointima of the control group increased significantly at 7 days after carotid artery injury, and was basically stable at 28 days after carotid artery injury. The neointimal area in CGRP group was significantly lower than that in control group on the 7th and 28th day [(2.09 鹵0.26) vs (3.76 鹵0.33); 14 d: (3.52 鹵0.41) vs (6.38 鹵0.61), P 0.05]; Compared with the control group, the expression level of NF- kappa B p65 protein in CGRP group was significantly lower than that in control group at 1 week (P0.05), but there was no difference in NF- kappa B p65 expression level between the two groups on the 28th day (P0.05). IL-1 尾 treatment significantly activated the expression of NF- kappa B p65 protein (P0.05), accompanied by a decrease in the expression of SM 偽-actin and an increase in OPN expression in VSMCs (P0.05). When treated with CGRP, the expression of NF- kappa B p65 protein induced by IL-1 尾 was significantly decreased (P0.05), and the expression of OPN, a marker of VSMCs synthesis, was decreased. The results of RT-PCR analysis were consistent. At the same time, CGRP significantly inhibited the proliferation of VSMCs induced by IL-1 尾. 3CGRP receptor blocker CGRP8-37 could block the effect of CGRP on IL-1 尾-induced NF- kappa B p65 protein expression and the regulation of CGRP on VSMC expression protein. Conclusion CGRP can inhibit the activation of NF- 魏 B, promote the expression of VSMCs differentiation marker gene, inhibit cell proliferation and decrease neointimal proliferation after arterial injury. This may have important application value in the prevention and treatment of atherosclerosis and restenosis after angioplasty.
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30860100) 貴州省國際合作項(xiàng)目(黔科合外G字[2010]0732)~~
【分類號】：R563.8

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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