【摘要】：目的:研究色素上皮衍生因子(PEDF)對(duì)低氧狀態(tài)下人支氣管上皮細(xì)胞(HBE)分泌血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的影響,并探討該作用與缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)的相關(guān)性。方法:體外培養(yǎng)的HBE細(xì)胞取第3~7代用于實(shí)驗(yàn),氯化鈷(CoCl2)100μmol/L模擬缺氧狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)分為4組:正常對(duì)照組(A組)、氯化鈷干預(yù)組(B組)、氯化鈷+PEDF 50 ng/ml干預(yù)組(C組)及氯化鈷+PEDF 200 ng/ml干預(yù)組(D組)。RT-PCR法檢測各組細(xì)胞HIF-1α及VEGF在mRNA水平上的表達(dá)差異;ELISA及Western blot法檢測各組細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)水平;細(xì)胞免疫熒光染色法(IF)檢測各組細(xì)胞HIF-1α蛋白在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的表達(dá)情況。結(jié)果:①B組VEGF的mRNA水平較A組顯著升高[為A組的(8.56±0.67)倍,P0.01],C組與D組的VEGF mRNA水平較B組明顯下降(P0.01);B組HIF-1αmRNA的表達(dá)水平較A組明顯升高(P0.01),B、C、D 3組間HIF-1αmRNA無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;②細(xì)胞培養(yǎng)基上清中B組VEGF表達(dá)量[(1 370.10±42.98)pg/ml]較A組[(670.00±23.35)pg/ml]明顯升高(P0.01),且B組與C組[(816.19±37.05)pg/ml]及D組[(646.47±22.70)pg/ml]比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。③Western blot結(jié)果顯示B組VEGF的蛋白表達(dá)量為A組的(3.99±0.37)倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);C組與D組VEGF的蛋白表達(dá)水平較B組明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。④IF結(jié)果顯示,B組HIF-1α的表達(dá)水平及核內(nèi)轉(zhuǎn)移較A組和D組明顯升高。結(jié)論:PEDF對(duì)低氧狀態(tài)下HBE細(xì)胞高表達(dá)的VEGF具有一定抑制作用,且該抑制作用可能與PEDF調(diào)控HIF-1α有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to study the effect of pigment epithelium derived factor (PEDF) on the secretion of vascular endothelial growth factor (VEGF) (VEGF) by human bronchial epithelial cells (HBE) in hypoxic condition, and to explore the correlation between the effect and hypoxia inducible factor 1 偽 (HIF-1 偽). Methods: the third to seventh passages of HBE cells were cultured in vitro. Cobalt chloride (CoCl2) 100 渭 mol / L was used to simulate hypoxia. The experiment was divided into four groups: normal control group (group A), cobalt chloride intervention group (group B). The expression of HIF-1 偽 and VEGF in the cells of the cobalt chloride PEDF 50 ng/ml intervention group (group C) and cobalt chloride PEDF 200 ng/ml intervention group (group D) were detected by RT-PCR method. The expression of HIF-1 偽 and VEGF in the cells of each group were measured at the level of mRNA. The expression of VEGF protein was detected by ELISA and Western blot, and the expression of HIF-1 偽 protein in cytoplasm and nucleus was detected by immunofluorescence staining (IF). Results: the mRNA level of VEGF in group 1B was significantly higher than that in group A [(8.56 鹵0.67) times than that in group A, P0.01], and the level of VEGF mRNA in groups C and D was significantly lower than that in group B (P0.01). The expression of HIF- 1 偽 mRNA in group B was significantly higher than that in group A (P0.01). There was no significant difference in HIF-1 偽 mRNA between B, C and D groups. 2 the expression of VEGF in group B [(1 370.10 鹵42.98) pg/ml] was significantly higher than that in group A [(670.00 鹵23.35) pg/ml] (P0.01). The expression of VEGF protein in group B was significantly higher than that in group C [(816.19 鹵37.05) pg/ml] and group D [(646.47 鹵22.70) pg/ml] (P0.01). The results of 3Western blot showed that the expression of VEGF in group B was higher than that in group A. 3.99 鹵0.37 times, The difference was statistically significant (P0.01); The expression level of VEGF protein in group C and group D was significantly lower than that in group B (P0.05) .4if results showed that the expression level of HIF-1 偽 and nuclear metastasis in group B were significantly higher than those in group A and group D. Conclusion: PEDF can inhibit the high expression of VEGF in HBE cells under hypoxia, which may be related to the regulation of HIF-1 偽 by PEDF.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R562.25

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2453355