【摘要】：目的：最近研究表明法舒地爾在哮喘中起著重要的作用，但目前機(jī)制仍不十分清楚，因此本實(shí)驗(yàn)研究Rho激酶（Rho-kinase, ROCK）-1抑制劑法舒地爾在支氣管哮喘（簡(jiǎn)稱哮喘）中抗炎和抗氧化應(yīng)激的作用，探討ROCK-1抑制劑在哮喘中的作用。方法：本實(shí)驗(yàn)分三部分：1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：5～6周健康BALB/C雌性小鼠24只，隨機(jī)分為對(duì)照組、哮喘組和法舒地爾組，每組8只。哮喘組和法舒地爾組用卵清蛋白（Ovalbumin, OVA）溶液腹腔注射與鼻腔滴入致敏和激發(fā)，法舒地爾組在滴鼻前用法舒地爾干預(yù)，對(duì)照組給予同等劑量生理鹽水。激發(fā)后各組均測(cè)定氣道反應(yīng)性，行肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）細(xì)胞計(jì)數(shù)，肺組織蘇木精—伊紅（Hematoxylin-eosin staining,HE）染色和高碘酸—希夫(Periodic Acid-Schiff, PAS)染色，免疫印記（Western Blot）法檢測(cè)NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1，免疫熒光測(cè)定MUC5AC的表達(dá)水平，ROS熒光探針-DHE檢測(cè)肺組織內(nèi)活性氧族物質(zhì)（Reactive Oxygen Species, ROS）的表達(dá)情況。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：分為對(duì)照組、屋塵螨組和法舒地爾組，法舒地爾組先予法舒地爾（濃度為45umol/l）干預(yù)1h后，屋塵螨組和法舒地爾組同時(shí)予屋塵螨（濃度為20ug/ml）干預(yù)24h后，用WesternBlot法檢測(cè)NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1，免疫熒光測(cè)定MUC5AC及ROS熒光探針-DHE檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)情況。3.臨床實(shí)驗(yàn)：收集哮喘發(fā)作期患者16例，隨機(jī)分為常規(guī)治療組和常規(guī)+法舒地爾（靜脈輸入，30mg/天）治療組，每組8例，每組治療療程為1周，收集治療前后血清標(biāo)本各一份，采用ELISA法檢測(cè)血清中IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α的濃度。結(jié)果：1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：（1）氣道的增強(qiáng)呼氣間歇（Enhancedpause, Penh）值變化：法舒地爾組與哮喘組相比Penh值降低，氣道反應(yīng)性降低（P0.05）。（2）BALF中細(xì)胞學(xué)變化：法舒地爾組與哮喘組相比白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞比例和嗜酸性粒細(xì)胞（Eosinophils, EOS）的比例降低（P0.05）。（3）各組小鼠肺組織鏡下病理改變：哮喘組見大量炎癥細(xì)胞浸潤于支氣管及周圍肺組織，其中以中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞最多，支氣管及肺泡腔內(nèi)有滲出物，部分氣管黏膜上皮壞死脫落，伴杯狀細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞增生。法舒地爾組與哮喘組相比氣道炎癥明顯減輕，MUC5AC熒光強(qiáng)度減弱（P0.05），氣道內(nèi)黏液分泌減少（P0.05）。（4）法舒地爾組與哮喘組相比，，肺組織內(nèi)ROS的表達(dá)濃度降低（P0.05）。（5）法舒地爾組與哮喘組相比NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1表達(dá)水平明顯降低（P0.05）。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：（1）法舒地爾組與屋塵螨組相比，肺組織內(nèi)ROS的表達(dá)量降低（P0.05）。（2）法舒地爾組與屋塵螨組相比MUC5AC熒光值明顯減弱（P0.05）。（3）法舒地爾組與屋塵螨組相比NF-κB、PNF-κB、STAT6、PSTAT6、TNF-α和Rho激酶-1表達(dá)水平明顯降低（P0.05）。3.臨床實(shí)驗(yàn)：常規(guī)治療組和常規(guī)+法舒地爾治療組在治療前后血清IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），治療后較治療前下降，但常規(guī)+法舒地爾治療組前后治療的血清IL-3、IL-4、IL-17和TNF-α濃度差值明顯高于比常規(guī)哮喘組，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。結(jié)論：1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：哮喘小鼠通過上調(diào)哮喘相關(guān)因子和蛋白表達(dá)而誘發(fā)小鼠氣道高反應(yīng)性、肺組織的炎癥和氧化應(yīng)激，從而引發(fā)一系列哮喘臨床癥狀。給予法舒地爾提前干預(yù)能在一定程度上減輕這一作用。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：屋塵螨可誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞（16human bronchialepithelial cells,16HBE）的氧化應(yīng)激，上調(diào)相關(guān)炎癥因子和蛋白表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。法舒地爾提前干預(yù)可減輕上述作用。也證明法舒地爾有抗炎癥和抗氧化應(yīng)激的作用。3.臨床實(shí)驗(yàn)：法舒地爾能夠減輕哮喘患者血清中的哮喘相關(guān)炎癥因子的濃度，再次證明法舒地爾能減輕哮喘患者炎癥反應(yīng)。4.綜上說明Rho激酶-1可能參與過敏原誘導(dǎo)的哮喘氣道炎癥過程，Rho激酶-1抑制劑法舒地爾能夠明顯減輕哮喘氣道高反應(yīng)性、抗炎和抗氧化應(yīng)激作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R562.25

【共引文獻(xiàn)】

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2 江金W

本文編號(hào)：2426254