【摘要】：目的研究IL-1β對健康人支氣管上皮細(xì)胞(HBE)高遷移率族蛋白1(HMGB1)表達(dá)和釋放的影響。方法培養(yǎng)HBE135-E6E7,四唑鹽(MTT)法檢測不同濃度IL-1β對支氣管上皮細(xì)胞活力的影響,熒光定量PCR檢測IL-1β刺激HBE后HMGB1mRNA表達(dá),雙抗體夾心ELISA法檢測細(xì)胞上清液中HMGB1水平,蛋白免疫印跡方法檢測IL-1β刺激HBE總蛋白、胞核、胞質(zhì)HMGB1表達(dá)。免疫熒光觀察IL-1β刺激后對HBE HMGB1的移位的影響。結(jié)果 0.1、1.0、10.0ng/mL IL-1β刺激HBE 24h對其活力無影響。IL-1β以濃度和時間依賴性方式刺激HBE的HMGB1mRNA水平升高,IL-1β增加HBE的HMGB1蛋白表達(dá)水平。在濃度依賴性實(shí)驗(yàn),與對照組比較,1.0、10.0ng/mL IL-1β刺激HBE 24h后培養(yǎng)上清液HMGB1水平顯著增加;在時間依賴性實(shí)驗(yàn)中,與對照組比較,10.0ng/mL IL-1β刺激HBE 12h、24h后細(xì)胞上清液中的HMGB1顯著升高(P0.05);10.0ng/mL IL-1β刺激HBE 24h后,HBE胞質(zhì)蛋白明顯增加,胞核蛋白減少。免疫熒光檢測顯示,HMGB1主要表達(dá)正常HBE的細(xì)胞核內(nèi),少量分布于細(xì)胞質(zhì),IL-1β(10.0ng/mL)刺激HBE 24h,HMGB1明顯從HBE胞核向胞質(zhì)轉(zhuǎn)位。結(jié)論 IL-1β可以顯著誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞HMGB1的表達(dá)和主動釋放,提示HMGB1可能參與了IL-1β介導(dǎo)慢性氣道炎癥過程。
[Abstract]:Objective to study the effect of IL-1 尾 on the expression and release of (HBE) high mobility group protein 1 (HMGB1) in human bronchial epithelial cells. Methods HBE135-E6E7, tetrazolium (MTT) assay was used to detect the effect of different concentrations of IL-1 尾 on the viability of bronchial epithelial cells. The expression of HMGB1mRNA in HBE stimulated by IL-1 尾 was detected by fluorescence quantitative PCR, and the level of HMGB1 in supernatant of cells was detected by double antibody ELISA method. The expression of total protein, nucleus and cytoplasm HMGB1 of HBE stimulated by IL-1 尾 was detected by Western blot. The effects of IL-1 尾 stimulation on HBE HMGB1 translocation were observed by immunofluorescence. Results 0.1 mg / mL IL-1 尾 had no effect on the activity of HBE. IL-1 尾 increased the HMGB1mRNA level of HBE in a concentration-and time-dependent manner, and IL-1 尾 increased the HMGB1 protein expression of HBE. In the concentration-dependent experiment, compared with the control group, the level of HMGB1 in the supernatant of HBE stimulated by 1.0 渭 g / mL IL-1 尾 for 24 h was significantly increased. In the time-dependent experiment, compared with the control group, the HMGB1 in the supernatant of 10.0ng/mL IL-1 尾 increased significantly after HBE was stimulated for 12 h or 24 h (P0.05). After 10.0ng/mL IL-1 尾 stimulated HBE for 24 h, HBE cytoplasmic protein increased significantly and nuclear protein decreased. Immunofluorescence assay showed that HMGB1 mainly expressed normal HBE in the nucleus and a small amount was distributed in the cytoplasm. IL-1 尾 (10.0ng/mL) stimulated HMGB1 translocation from HBE nucleus to cytoplasm for 24 h. Conclusion IL-1 尾 can significantly induce the expression and active release of HMGB1 in bronchial epithelial cells, suggesting that HMGB1 may be involved in the process of chronic airway inflammation mediated by IL-1 尾.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院西院呼吸內(nèi)科;
【基金】：廣西醫(yī)科大學(xué)青年基金資助項(xiàng)目(GXMUSF201206)
【分類號】：R562.25

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本文編號：2409336