【摘要】：目的:構(gòu)建攜帶人SP-B蛋白+1580 SNP不同等位基因的轉(zhuǎn)基因小鼠并進(jìn)行細(xì)菌性肺炎模型的造模。方法:利用受精卵原核注射技術(shù)將hSP-B基因整合至小鼠染色體上獲得F0代小鼠,將其與mSP-B基因敲除鼠進(jìn)行交配,逐步去除轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)m SP-B基因。利用PCR技術(shù)鑒定小鼠基因型,通過測序確定+1580位點(diǎn)的等位基因。將銅綠假單胞菌經(jīng)支氣管灌注接種至小鼠肺內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌性肺炎造模,對照組注射等量滅菌生理鹽水。結(jié)果:F2代小鼠只表達(dá)人SP-B蛋白而不表達(dá)鼠SP-B蛋白,蛋白表達(dá)量與人肺內(nèi)含量相近,即為構(gòu)建成功的轉(zhuǎn)基因小鼠。3個小鼠家系+1580位點(diǎn)等位基因?yàn)門,1個家系為C。細(xì)菌接種(1×10~6CFU/mouse)后24小時,小鼠肺泡內(nèi)炎癥滲出明顯,大量中性粒細(xì)胞浸潤,SP-B蛋白含量明顯降低,但不同等位基因間在此條件下無明顯差異。結(jié)果:成功構(gòu)建只表達(dá)人SP-B蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠模型,細(xì)菌性肺炎模型造模成功,為今后進(jìn)一步研究人SP-B蛋白的生理功能及+1580基因多態(tài)性與肺疾病的關(guān)系提供了有力的工具。
[Abstract]:Aim: to construct transgenic mice carrying different alleles of human SP-B protein 1580 SNP and model the bacterial pneumonia model. Methods: the hSP-B gene was integrated into the chromosomes of mice by prokaryotic injection of fertilized eggs to obtain F0 generation mice. The mice were mated with mSP-B knockout mice, and the m SP-B gene was gradually removed in transgenic mice. The genotypes of mice were identified by PCR and the alleles at locus 1580 were determined by sequencing. Pseudomonas aeruginosa was infused into the lungs of mice to model bacterial pneumonia, and the control group was injected with the same amount of sterilized saline. Results: F2 mice expressed only human SP-B protein but not mouse SP-B protein. The expression of the protein was similar to that of human lung tissue, that is to say, the transgenic mice were constructed successfully. The allele of 1580 locus was T in three families of mice and one family was C. 24 hours after inoculation (1 脳 10~6CFU/mouse), the alveolar inflammation exudated obviously, a large number of neutrophils infiltrated, and the content of SP-B protein decreased significantly in mice, but there was no significant difference between different alleles under this condition. Results: the transgenic mouse model expressing only human SP-B protein was successfully constructed, and the bacterial pneumonia model was successfully established. It provides a powerful tool to further study the physiological function of human SP-B protein and the relationship between 1580 gene polymorphism and lung diseases.
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院內(nèi)分泌研究所衛(wèi)生部激素與發(fā)育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室天津市代謝性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;美國紐約州立大學(xué)上州醫(yī)科大學(xué);
【基金】：NIH基金HL096007 邁克爾·康諾利捐贈基金 亨德瑞基金 天津醫(yī)科大學(xué)科學(xué)基金2013KY04資助完成
【分類號】：R-332;R563.1

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本文編號：2407776