發(fā)布時間：2019-01-03 07:40

【摘要】：第一部分小鼠脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷自我消退模型的建立及內(nèi)源性脂氧素表達(dá)的研究 目的：研究脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)氣管內(nèi)滴注誘導(dǎo)急性肺損傷的變化規(guī)律以及脂氧素A4及其合成途徑中5-脂加氧酶的表達(dá),以探討脂氧素A4在急性肺損傷期間的作用,以及5-脂加氧酶的變化規(guī)律。 方法：雄性BALB/c小鼠6-8周,體重20-25g,隨機(jī)將將動物分成3組：(1)零點組(Zero point, O group):得到小鼠后即刻處理；(2)對照組(Control group, C):采用生理鹽水氣管內(nèi)滴注,按照1.5μl/g給藥；(3)急性肺損傷組(Acute lung injury group,ALI)：氣管內(nèi)滴注脂多糖,按照3μg/g劑量滴注。C組和ALI組在給藥后6小時,12小時,1天,2天,4天,7天處理小鼠。光鏡檢測小鼠肺HE染色切片,并進(jìn)行評分；BCA法檢測肺泡灌洗液中蛋白溶度；ELISA法檢測肺泡灌洗液中白介素-1β(interleukin-1beta, IL-1β),腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)和脂氧素A4(LXA4)的濃度; real-time PCR法檢測肺組織中5-脂加氧酶(5-lipoxygenase,5-LO)基因水平的表達(dá)。 結(jié)果：氣管內(nèi)滴注3μg/g脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷發(fā)生后：①零點組合對照組肺組織結(jié)構(gòu)沒有明顯變化,急性肺損傷組則出現(xiàn)肺泡毛細(xì)血管充血,肺泡腔內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤、肺泡間隔增粗等現(xiàn)象,但隨著時間推移,這些現(xiàn)象逐漸減輕,在7天時部分恢復(fù)正常狀態(tài)；急性肺損傷評分在一天組中達(dá)到高峰,進(jìn)而下降；②與零點組和對照組比較,急性肺損傷組肺組織濕干重比在各個時間點升高明顯；③與零點組和對照組比較,急性肺損傷組中細(xì)胞總數(shù)在1天時達(dá)到頂點,隨后下降：④與零點組與對照組比較,急性肺損傷組BALF中蛋白含量6小時到1天組呈上升趨勢,從1天組到7天組呈下降趨勢；⑤與零點組和對照組比較,急性肺損傷組中BALF中TNF-α在1天時達(dá)到頂點,隨后下降；IL-1p在12小時達(dá)到高峰期,隨后下降；⑥與零點組和對照組比較,急性肺損傷組中BALF中的脂氧素合成在1天和7天時達(dá)到高峰期,6小時組到1天組呈上升趨勢,1天組后下降,隨后4天組到7天組呈上升趨勢；⑦與零點組和對照組比較,急性肺損傷組肺組織5-LO mRNA6小時到1天組呈上升趨勢,隨后下降；4天組到7天組中呈上升趨勢。 結(jié)論：氣管內(nèi)滴注脂多糖能成功誘導(dǎo)急性肺損傷的發(fā)生,且5-脂加氧酶在脂氧素合成途徑中起到重要作用。由實驗結(jié)果推斷此模型急性肺損傷在24小時左右達(dá)到高峰期,針對此時期進(jìn)行干預(yù)可能對急性肺損傷的預(yù)后有一定的作用。 第二部分過氧化物酶增殖物激活受體γ激動劑羅格列酮預(yù)處理對急性肺損傷時脂氧素生成的調(diào)控 目的：研究過氧化物酶增殖物激活受體γ (PPARγ)激動劑羅格列酮對脂多糖(LPS)氣管內(nèi)滴注誘導(dǎo)急性肺損傷的保護(hù)作用,和對內(nèi)源性脂氧素(LXA4)合成以及對脂氧素合成途徑中5-脂加氧酶的表達(dá)變化的影響,以探討過氧化物酶增殖物激活受體γ激動劑羅格列酮與脂氧素A4以及5-脂加氧酶的內(nèi)在聯(lián)系。 方法：以脂多糖氣管內(nèi)滴注制作急性肺損傷模型,根據(jù)給藥將動物分成7組：(1)對照組(Control group, C):采用生理鹽水氣管內(nèi)滴注,按照1.5ml/kg給藥；(2)急性肺損傷組(Acute lung injury group, ALI):氣管內(nèi)滴注脂多糖,按照3mg/kg劑量滴注。(3)羅格列酮溶劑組(LPS+DMSO (1:10)):DMSO溶液(DMSO:NS=1:10,體積比)灌胃三天后,氣管內(nèi)滴注脂多糖3mg/kg;(4) GW9662溶劑組(LPS+DMSO (1:100)):DMSO溶液(DMSO:NS=1:100,體積比),腹腔內(nèi)注射1.5小時后,給予LPS氣管內(nèi)3mg/kg滴注；(5)羅格列酮預(yù)處理組(ROS+LPS):羅格列酮10mg/kg灌胃給藥3天后,氣管內(nèi)給予LPS3mg/kg滴注；(6)GW9662組(GW9662+LPS):小鼠腹腔內(nèi)給予GW9662lmg/kg,1.5小時后LPS3mg/kg氣管內(nèi)滴注；(7)羅格列酮+GW9662組(ROS+GW9662+LPS):羅格列酮預(yù)處理3天后,GW9662腹腔內(nèi)注射給藥,1.5小時后給予LPS氣管內(nèi)滴注刺激。各組在給予LPS24小時后處理小鼠。光鏡檢測小鼠肺HE染色切片,并進(jìn)行急性肺損傷評分；BCA法檢測肺泡灌洗液中蛋白溶度；ELISA法檢測肺泡灌洗液中白介素-1β (IL-1β),腫瘤壞死因子-α (TNF-α)和脂氧素A4(LXA4)的濃度；Western blotting檢測肺組織中5-脂加氧酶的蛋白表達(dá)。 結(jié)果：羅格列酮預(yù)處理減輕了脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷病理學(xué)改變和降低了急性肺損傷評分；羅格列酮預(yù)處理減少了小鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù),降低了BALF中蛋白濃度。羅格列酮預(yù)處理還降低了小鼠BALF中TNF-α和IL-1β的濃度,檢測lipoxin A4濃度升高。同時發(fā)現(xiàn)預(yù)處理后小鼠肺組織中5-LO的表達(dá)增加。 結(jié)論：過氧化物酶增殖物激活受體丫激動劑羅格列酮預(yù)處理對肺損傷有一定的保護(hù)作用；PPARy能促進(jìn)肺組織中脂氧素的合成,同時促進(jìn)5-LO的表達(dá)。 第三部分阿司匹林誘生型脂氧素后處理對急性肺損傷時期過氧化物酶增殖物受體Y的影響 目的：證實外源性給予阿司匹林誘生型脂氧素(Aspirin-triggered lipoxinA4, ATL)對由內(nèi)毒素引起的小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用,以及對急性肺損傷時期小鼠體內(nèi)過氧化物酶增殖物受體γ (Peroxisome Proliferated-Activated Receptor Gamma, PPARy)活性的影響。以探討脂氧素A4與過氧化物酶增殖物受體γ的相互聯(lián)系。 方法：以脂多糖氣管內(nèi)滴注制作急性肺損傷模型,根據(jù)給藥將動物分成7組：(1)對照組(Control group, C):采用生理鹽水氣管內(nèi)滴注,按照1.5ml/kg給藥；(2)急性肺損傷組(Acute lung injury group, ALI):氣管內(nèi)滴注脂多糖,按照3mg/kg劑量滴注。(3)GW9662溶劑組(LPS+DMSO):DMSO溶液(DMSO:NS=1:100,體積比),腹腔內(nèi)注射1.5小時后,給予LPS氣管內(nèi)3mg/kg滴注；(4)ATL溶劑組(LPS+NS):氣管內(nèi)給予脂多糖3mg/kg滴注,1小時后尾靜脈注射100μ1生理鹽水；(5)ATL后處理組(LPS+ATL):LPS3mg/kg氣管內(nèi)滴注,1小時后尾靜脈按ATL7μg/g注射；(6)GW9662+ATL組(GW9662+LPS+ATL):腹腔內(nèi)注射GW96621.5小時后氣管內(nèi)給予脂多糖3mgkg滴注,1小時后尾靜脈按ATL7μg/g注射；各組在給予LPS24小時后處理小鼠。光鏡檢測小鼠肺組織HE染色切片,并行急性肺損傷評分；BCA法檢測小鼠肺泡灌洗液中蛋白溶度；ELISA法檢測肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子-a(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白介素-Iβ (interleukin-1beta, IL-1β)和脂氧素A4(lipoxinA4)的濃度；Western blotting檢測肺組織核蛋白中PPARy的蛋白表達(dá)。 結(jié)果：ATL減輕了由LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型的病理學(xué)改變,降低了肺損傷評分；ATL減少了模型BALF中的細(xì)胞總數(shù),降低了濕干重比值；ATL減少了模型BLAF中蛋白含量；ATL減少了細(xì)胞因子TNF-α和IL-1p的濃度；在WB檢測中,ATL增加了肺組織中PPARγ的表達(dá)。 結(jié)論：ATL能減輕小鼠急性肺損傷模型的損傷狀態(tài),對肺損傷起到一定的保護(hù)作用；這些作用是通過增加PPARγ表達(dá)來實現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563

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本文編號：2399074