【摘要】：目的：觀察IL-17A拮抗劑對成纖維細(xì)胞增殖、羥脯氨酸分泌及細(xì)胞因子表達的影響，探討IL-17A拮抗劑干預(yù)肺纖維化的分子機制，為臨床選用IL-17A拮抗劑治療IPF提供理論和實驗依據(jù)。方法：取10只清潔級雌性Wistar大鼠，采用隨機數(shù)字表法分為生理鹽水（normal saline，NS）組和博來霉素（bleomycin，BLM），每組各5只。NS組、BLM組大鼠分別于氣管內(nèi)灌注生理鹽水和博萊霉素，并于氣管內(nèi)灌注后第7天心臟采血處死，行右肺灌洗，并分離、純化肺泡巨噬細(xì)胞（alveolar macrophage，，AM）并培養(yǎng)24小時后分別取兩組AM培養(yǎng)上清，取左肺行病理切片及HE染色。將大鼠成纖維細(xì)胞（208F細(xì)胞）分為對照組、模型組、抗體組（抗A組、抗B組、抗C組）培養(yǎng),各組培養(yǎng)基分別為：NS組AM培養(yǎng)上清、BLM組AM培養(yǎng)上清、BLM組AM培養(yǎng)上清+不同濃度IL-17A抗體（0.5μg/L、1μg/L、2μg/L）。分別于第24小時、48小時和72小時用CCK-8檢測208F細(xì)胞培養(yǎng)增殖。于第24小時應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析（enzyme-linkedimmunosorbnent assay，ELISA）檢測208F培養(yǎng)上清中的羥脯氨酸含量，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測208F窖蛋白-1的表達，實時熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)（realtime Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）檢測208F中Ⅰ型膠原和窖蛋白-1mRNA的表達。結(jié)果：（1）病理切片HE染色顯示：NS組大鼠肺組織:肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡間隔無水腫及炎性細(xì)胞浸潤，肺泡腔亦無炎性細(xì)胞滲出；BLM組肺泡間隔增寬增厚、充血水腫明顯、炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重，肺泡腔可見較大炎性細(xì)胞。（2）CCK-8結(jié)果顯示：與對照組相比，模型組208F細(xì)胞增殖水平在各個時間點均明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），抗體組中各組208F細(xì)胞增殖水平在各個時間點也增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，各個抗體組中208F細(xì)胞增殖水平在各個時間點均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抗體組中，抗A組208F細(xì)胞增殖水平在各個時間點均高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而抗B組和抗C組208F細(xì)胞增殖水平在各個時間點均無明顯差異（P＞0.05）。（3）ELISA結(jié)果提示：與對照組相比，模型組和各個抗體組208F細(xì)胞培養(yǎng)上清中羥脯氨酸水平明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，各個抗體組中培養(yǎng)上清中羥脯氨酸水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抗體組中，抗A組208F細(xì)胞培養(yǎng)上清中羥脯氨酸均水平高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而抗B組和抗C組208F細(xì)胞培養(yǎng)上清中羥脯氨酸水平無明顯差異（P＞0.05）。（4）免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果提示：與對照組相比，模型組和各個抗體組208F細(xì)胞窖蛋白-1水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，各個抗體組208F細(xì)胞窖蛋白-1水平均增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抗體組中，抗A組208F細(xì)胞窖蛋白-1水平低于其他兩組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而抗B組和抗C組208F細(xì)胞窖蛋白-1水平無明顯差異（P＞0.05）。（5）RT-PCR結(jié)果顯示：各組208F細(xì)胞窖蛋白-1mRNA比較，與對照組相比，模型組和各個抗體組208F細(xì)胞窖蛋白-1mRNA水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，各個抗體組208F細(xì)胞窖蛋白-1mRNA水平均增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抗體組中，抗A組208F細(xì)胞窖蛋白-1mRNA水平低于其他兩組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而抗B組和抗C組208F細(xì)胞窖蛋白-1mRNA水平無明顯差異（P＞0.05）。各組208F細(xì)胞Ⅰ型膠原mRNA比較，與對照組相比，模型組和抗A組208F細(xì)胞Ⅰ型膠原mRNA水平增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），抗B組和抗C組208F細(xì)胞Ⅰ型膠原mRNA無明顯差異（P＞0.05）；與模型組相比，各個抗體組208F細(xì)胞Ⅰ型膠原mRNA均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抗體組中，抗A組208F細(xì)胞Ⅰ型膠原mRNA水平高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而抗B組和抗C組208FⅠ型膠原mRNA水平無明顯差異（P＞0.05）。結(jié)論：IL-17A拮抗劑在體外可抑制肺纖維化大鼠肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對成纖維細(xì)胞的增殖和Ⅰ型膠原表達的促進作用；也可以改善肺纖維化大鼠肺泡巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對成纖維細(xì)胞窖蛋白-1表達的抑制。
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【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563.9

【參考文獻】

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本文編號：2371191