【摘要】：[背景]特發(fā)性肺纖維化(IPF)是一類原因未明的慢性進展性間質(zhì)性肺疾病,以成纖維細胞的異常增殖和分化以及細胞外基質(zhì)的堆積為特點,目前缺乏有效的治療手段。近年來逐漸發(fā)現(xiàn)IPF與肺癌無論是在臨床還是發(fā)病機制方面均存在許多相關性,有學者提出從腫瘤學的角度出發(fā)研究IPF,可能會對IPF有更全面認識。表觀遺傳學尤其是DNA甲基化引起的抑癌基因失活參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,DNA甲基化在IPF中的研究正逐步展開。肌成纖維母細胞是IPF發(fā)病中重要的效應細胞,肺泡上皮間充質(zhì)轉化是形成肌成纖維母細胞的一個重要來源。已知CDHl以及RUNX3缺失促進上皮間充質(zhì)轉化過程,同時CDH1及RUNX3也是重要的腫瘤抑制基因,多種腫瘤中存在CDHl及RUNX3甲基化現(xiàn)象。但是IPF中CDH1及RUNX3是否也存在甲基化現(xiàn)象目前尚無相關報道。 [目的]本研究擬檢測IPF組織學標本中CDHl及RUNX3甲基化狀態(tài),并分析與臨床指標相關性。 [方法]本實驗應用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR, MSP)方法檢測10株細胞系、16例IPF患者和17對肺癌及切緣正常組織中CDH1及RUNX3啟動子的甲基化狀態(tài)。利用real-time qPCR技術檢測10株細胞系中CDH1及RUNX3mRNA表達水平。利用Western Blot方法檢測10株細胞系中CDH1蛋白(E-cadherin)表達并利用免疫組織化學方法檢測17對肺癌及切緣正常組織以及16例IPF組織E-cadherin表達。回顧16例IPF患者臨床資料,分析CDH1及RUNX3甲基化狀態(tài)與其臨床指標相關性；分析17例肺癌患者E-cadherin表達與CDH1甲基化相關性。 [結果] 1、發(fā)生CDH1甲基化細胞系(293T, BGC823, RKO, MGC803, Hela, MKN45)比未發(fā)生甲基化細胞系(MKN74, MCF7, HCT116, AGS)其mRNA表達水平明顯降低。 2、發(fā)生CDH1完全甲基化細胞系(RKO, Hela, MGC803)無CDH1蛋白(E-cadherin)表達。 3、發(fā)生RUNX3甲基化細胞系(RKO,293T, MCF7, MKN74, AGS, MGC803, Hela)比未發(fā)生甲基化細胞系(BGC823, HCT116, MKN45)其mRNA表達水平明顯降低。 4、11例(68.75%)IPF組織有CDHl啟動子甲基化,7例(41.18%)肺癌組織中有CDHl啟動子甲基化,切緣正常組織無CDHl甲基化。IPF中CDHl啟動子甲基化與病人年齡、性別、吸煙、病程無關。 5、9例(52.94%)肺癌組織E-cadherin表達異常,CDHl甲基化患者中E-cadherin異常表達的比例(71.4%)比正常表達比例(28.6%)高。2例CDHl甲基化的IPF患者,其成纖維細胞灶表面被覆的上皮細胞中E-cadherin表達減弱或缺失。 6、7例(43.75%)IPF組織中有RUNX3啟動子甲基化,9例(52.94%)肺癌組織中有RUNX3啟動子甲基化,3例(17.65%)切緣正常組織有RUNX3啟動子甲基化。IPF中RUNX3啟動子甲基化與病人年齡、性別、吸煙、病程無關。 [結論] 1、細胞系試驗表明CDHl及RUNX3啟動子區(qū)域高甲基化在轉錄水平上抑制目的基因表達。 2、IPF同肺癌一樣,存在CDH1及RUNX3啟動子區(qū)域甲基化現(xiàn)象,其中CDHl甲基化發(fā)生率顯著高于切緣正常組織。IPF發(fā)生抑癌基因甲基化可能是IPF容易合并肺癌的原因之一。 3、IPF組織成纖維細胞灶表面被覆的肺泡上皮細胞E-cadherin表達缺失或減弱可能與CDHl甲基化有關。CDHl甲基化引起蛋白表達缺失,促進EMT進程,參與IPF發(fā)病。
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【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R563

【參考文獻】

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本文編號：2340962