【摘要】：[背景]特發(fā)性肺纖維化(IPF)是一類原因未明的慢性進(jìn)展性間質(zhì)性肺疾病,以成纖維細(xì)胞的異常增殖和分化以及細(xì)胞外基質(zhì)的堆積為特點(diǎn),目前缺乏有效的治療手段。近年來逐漸發(fā)現(xiàn)IPF與肺癌無論是在臨床還是發(fā)病機(jī)制方面均存在許多相關(guān)性,有學(xué)者提出從腫瘤學(xué)的角度出發(fā)研究IPF,可能會(huì)對(duì)IPF有更全面認(rèn)識(shí)。表觀遺傳學(xué)尤其是DNA甲基化引起的抑癌基因失活參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,DNA甲基化在IPF中的研究正逐步展開。肌成纖維母細(xì)胞是IPF發(fā)病中重要的效應(yīng)細(xì)胞,肺泡上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化是形成肌成纖維母細(xì)胞的一個(gè)重要來源。已知CDHl以及RUNX3缺失促進(jìn)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程,同時(shí)CDH1及RUNX3也是重要的腫瘤抑制基因,多種腫瘤中存在CDHl及RUNX3甲基化現(xiàn)象。但是IPF中CDH1及RUNX3是否也存在甲基化現(xiàn)象目前尚無相關(guān)報(bào)道。 [目的]本研究擬檢測(cè)IPF組織學(xué)標(biāo)本中CDHl及RUNX3甲基化狀態(tài),并分析與臨床指標(biāo)相關(guān)性。 [方法]本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR, MSP)方法檢測(cè)10株細(xì)胞系、16例IPF患者和17對(duì)肺癌及切緣正常組織中CDH1及RUNX3啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)。利用real-time qPCR技術(shù)檢測(cè)10株細(xì)胞系中CDH1及RUNX3mRNA表達(dá)水平。利用Western Blot方法檢測(cè)10株細(xì)胞系中CDH1蛋白(E-cadherin)表達(dá)并利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)17對(duì)肺癌及切緣正常組織以及16例IPF組織E-cadherin表達(dá)。回顧16例IPF患者臨床資料,分析CDH1及RUNX3甲基化狀態(tài)與其臨床指標(biāo)相關(guān)性；分析17例肺癌患者E-cadherin表達(dá)與CDH1甲基化相關(guān)性。 [結(jié)果] 1、發(fā)生CDH1甲基化細(xì)胞系(293T, BGC823, RKO, MGC803, Hela, MKN45)比未發(fā)生甲基化細(xì)胞系(MKN74, MCF7, HCT116, AGS)其mRNA表達(dá)水平明顯降低。 2、發(fā)生CDH1完全甲基化細(xì)胞系(RKO, Hela, MGC803)無CDH1蛋白(E-cadherin)表達(dá)。 3、發(fā)生RUNX3甲基化細(xì)胞系(RKO,293T, MCF7, MKN74, AGS, MGC803, Hela)比未發(fā)生甲基化細(xì)胞系(BGC823, HCT116, MKN45)其mRNA表達(dá)水平明顯降低。 4、11例(68.75%)IPF組織有CDHl啟動(dòng)子甲基化,7例(41.18%)肺癌組織中有CDHl啟動(dòng)子甲基化,切緣正常組織無CDHl甲基化。IPF中CDHl啟動(dòng)子甲基化與病人年齡、性別、吸煙、病程無關(guān)。 5、9例(52.94%)肺癌組織E-cadherin表達(dá)異常,CDHl甲基化患者中E-cadherin異常表達(dá)的比例(71.4%)比正常表達(dá)比例(28.6%)高。2例CDHl甲基化的IPF患者,其成纖維細(xì)胞灶表面被覆的上皮細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)減弱或缺失。 6、7例(43.75%)IPF組織中有RUNX3啟動(dòng)子甲基化,9例(52.94%)肺癌組織中有RUNX3啟動(dòng)子甲基化,3例(17.65%)切緣正常組織有RUNX3啟動(dòng)子甲基化。IPF中RUNX3啟動(dòng)子甲基化與病人年齡、性別、吸煙、病程無關(guān)。 [結(jié)論] 1、細(xì)胞系試驗(yàn)表明CDHl及RUNX3啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化在轉(zhuǎn)錄水平上抑制目的基因表達(dá)。 2、IPF同肺癌一樣,存在CDH1及RUNX3啟動(dòng)子區(qū)域甲基化現(xiàn)象,其中CDHl甲基化發(fā)生率顯著高于切緣正常組織。IPF發(fā)生抑癌基因甲基化可能是IPF容易合并肺癌的原因之一。 3、IPF組織成纖維細(xì)胞灶表面被覆的肺泡上皮細(xì)胞E-cadherin表達(dá)缺失或減弱可能與CDHl甲基化有關(guān)。CDHl甲基化引起蛋白表達(dá)缺失,促進(jìn)EMT進(jìn)程,參與IPF發(fā)病。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R563

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：2340962