【摘要】：白介素-32(IL-32)最早發(fā)現(xiàn)于1992年,是NK細(xì)胞、上皮細(xì)胞所分泌的一種細(xì)胞因子,但此后對于其研究并未取得明顯進(jìn)展,直到2005年才被正式命名為IL-32,是目前發(fā)現(xiàn)的最新的細(xì)胞因子之一。目前的研究表明IL-32在免疫缺陷癥、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩、類風(fēng)濕等疾病均有異常表達(dá),在呼吸系統(tǒng)疾病,IL-32在肺結(jié)核、肺癌、哮喘及慢性阻塞性肺疾病(COPD)也均有異常表達(dá)。研究證明人體內(nèi)存在γ-干擾素(INF-γ)——IL-32——白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)正反饋通路,COPD患者尤其慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者,該通路被激活,IL-32表達(dá)明顯增加;國內(nèi)外研究表明,硝苯地平、辛伐他汀、布地奈德等藥物能抑制哮喘中的IL-32的表達(dá),從而發(fā)揮抗炎作用,減輕哮喘急性發(fā)作的次數(shù)及嚴(yán)重程度,國外研究還表明布地奈德也能抑制COPD中IL-32表達(dá)。國內(nèi)外的研究認(rèn)為IL-32主要通過絲裂原活化蛋白激酶P38(P38MAPK)磷酸化途徑、核因子-?b(NF-?b)途徑、Caspase途徑等激活下游新號通路,上調(diào)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-1β、白介素-8(IL-8),白介素-6(IL-6)等炎癥因子的表達(dá),參與了COPD的炎癥反應(yīng),目前研究證實(shí)INF-γ——IL-32——IL-1β通過調(diào)節(jié)TGF-β、VEGF等的表達(dá)參與COPD的氣道重塑過程及肺氣腫的形成。糖皮質(zhì)激素(GC)因?yàn)槠鋸V泛的有效的的抗炎作用,是治療COPD最主要的藥物,但其療效遠(yuǎn)不如哮喘,目前認(rèn)為導(dǎo)致這一結(jié)果原因是糖皮質(zhì)激素抵抗,早期的研究認(rèn)為糖皮質(zhì)激素抵抗的主要原因是GR異常所致,大量資料表明糖皮質(zhì)激素抵抗患者及動物模型均檢測到糖皮質(zhì)激素受體(GR)表達(dá)降低。而最新研究表明人體GR受體存在α、β兩種亞型,GRα是發(fā)揮糖皮質(zhì)激素效應(yīng)的靶受體,而GRβ則是一種糖皮質(zhì)激素效應(yīng)的內(nèi)源性拮抗劑,在激素抵抗型的哮喘及血液病的患者中,檢測到GRα表達(dá)下調(diào)、GRβ表達(dá)上調(diào),因此GRα/GRβ失衡是糖皮質(zhì)激素抵抗的重要原因。少數(shù)研究表明INF-γ——IL-32——IL-1β通過NF-?b/AP-1通路參與GRα、GRβ等表達(dá),通過上調(diào)GRβ表達(dá),下調(diào)GRα表達(dá),參與了糖皮質(zhì)激素抵抗�？死顾厥且环N大環(huán)內(nèi)酯類藥物,已經(jīng)被廣泛用于穩(wěn)定期COPD的治療,研究表明:克拉霉素可以降低穩(wěn)定期COPD患者TNF-α,IL-8,IL-6等炎癥因子的表達(dá),抑制肺部炎癥,提高運(yùn)動耐力,改善肺功能�？死顾氐脑贑OPD中抗炎作用已經(jīng)被公認(rèn),但是關(guān)于克拉霉素治療COPD中的機(jī)制,國內(nèi)外研究雖然較少,克拉霉素是否通過INF-γ——IL-32——IL-1β通路調(diào)節(jié)下游炎癥因子的表達(dá),從而發(fā)揮治療COPD作用,克拉霉素是否通過INF-γ——IL-32——IL-1β調(diào)節(jié)NF-?b/AP-1,影響GRα、GRβ的表達(dá),從而逆轉(zhuǎn)糖皮質(zhì)激素抵抗,國內(nèi)外尚未見類似研究,本研究意在探克拉霉素下調(diào)IL-32表達(dá)對COPD大鼠糖皮質(zhì)激素抵抗的影響及機(jī)制。材料與方法健康的雄性SD大鼠50只,體重180±20g。隨機(jī)分為:空白組(10只)、模型組(40只)。模型組:第1、31、61天經(jīng)氣管插管后氣道內(nèi)滴入脂多糖,第2~30、32~60、62~90天在熏煙箱中被動吸煙。健康對照組:第1、31、61天經(jīng)氣管插管后氣道內(nèi)滴入生理鹽水,第2~30、32~60、62~90天在熏煙箱中呼吸空氣。模型構(gòu)建完成后,將模型組隨機(jī)分為4組,即COPD組,克拉霉素中,布地奈德組,聯(lián)合干預(yù)組,每組10只。COPD組:第91天開始給予生理鹽水灌胃,1次/日,2ml/只,共30天。克拉霉素組:第91天開始給予克拉霉素灌胃,1次/日,50mg/kg,共30天。布地奈德組:第91天開始霧化吸入布地奈德,1次/日,1mg/只,共30天。聯(lián)合干預(yù)組:第91天開始給予克拉霉素灌胃,劑量及時間同上,霧化吸入布地奈德,劑量及時間同上。第121天檢測肺功能,留取血液及肺泡灌洗液,使用ELISA法檢測血清及肺泡灌洗液中INF-γ、IL-32、TNF-α、NF-?b的水平;部分肺組織進(jìn)行HE染色后觀察肺組織病理學(xué)改變,部分肺組織使用免疫組化、Western Blot及RT-PCR檢測GRα及GRβ的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx?)描述數(shù)據(jù),兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組間比較采用采用單因素方差分析,相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果1各組大鼠肺組織病理學(xué)改變與空白組相比,COPD組大鼠氣管及支氣管粘膜上皮細(xì)胞脫落,炎性細(xì)胞浸潤,支氣管平滑肌增厚,膠原沉積,肺泡壁變薄,甚至破裂融合成肺大泡。與COPD患者的氣管及肺組織病理學(xué)變化一致。各藥物干預(yù)組的大鼠肺組織破壞程度都較COPD組輕,其中聯(lián)合干預(yù)組大鼠肺組織破壞最輕。2各組大鼠肺功能改變COPD組大鼠,0.3秒最大呼氣量/用力肺活量(forced expiratory volume0.3/forced vital capacity,FEV0.3/FVC)明顯低于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);吸氣阻力(inspiratory resistance,Ri)、呼氣阻力(expiratory resistance,Re)明顯高于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。克拉霉素組、布地奈德組FEV0.3/FVC均高于COPD組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);克拉霉素組、布地奈德組Ri及Re明顯低于COPD組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。聯(lián)合干預(yù)組FEV0.3/FVC高于COPD組、克拉霉素組及布地奈德組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,聯(lián)合干預(yù)組Ri、Re低于COPD組、克拉霉素組及布地奈德組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3血清及肺泡灌洗液中INF-γ、IL-32、TNF-α、NF-?b的水平COPD組血清INF-γ、IL-32、TNF-α、NF-?b的水平明顯高于空白組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);COPD組肺泡灌洗液INF-γ、IL-32、TNF-α、NF-?b的水平明顯高于空白組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。布地奈德組及克拉霉素組血清INF-γ、IL-32、TNF-α、NF-?b的水平明顯低于COPD組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);布地奈德組及克拉霉素組肺泡灌洗液明顯低于COPD,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。聯(lián)合干預(yù)組血清INF-γ、IL-32、TNF-α、NF-?b的水平明顯低于COPD組、布地奈德組、克拉霉素組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),聯(lián)合干預(yù)組肺泡灌洗液INF-γ、IL-32、TNF-α、NF-?b的水平明顯低于COPD組、布地奈德組、克拉霉素組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4肺組織中GRα、GRβ的免疫組化COPD組GRα表達(dá)為明顯低于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβ表達(dá)明顯高于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。布地奈德組、克拉霉素組GRα表達(dá)均高于COPD組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβ表達(dá)均低于COPD組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。聯(lián)合干預(yù)組GRα表達(dá)高于COPD組、布地奈德組、克拉霉素組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβ表達(dá)低于COPD組、布地奈德組、克拉霉素組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5肺組織中GRα、GRβ蛋白表達(dá)水平COPD組GRα蛋白表達(dá)水明顯低于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβ蛋白表達(dá)水平明顯高于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。布地奈德組、克拉霉素組GRα蛋白表達(dá)水平均高于COPD組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβ蛋白表達(dá)水平均低于COPD組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。聯(lián)合干預(yù)組GRα蛋白表達(dá)水平高于COPD組、布地奈德組、克拉霉素組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβ蛋白表達(dá)水平低于COPD組、布地奈德組、克拉霉素組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6肺組織中GRα、GRβ的m RNA水平COPD組GRαmRNA水平明顯低于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβm RNA水平明顯高于空白組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。布地奈德組、克拉霉素組GRαm RNA水平均高于COPD組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβ表達(dá)均低于COPD組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。聯(lián)合干預(yù)組GRαm RNA水平高于COPD組、布地奈德組、克拉霉素組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GRβ表達(dá)低于COPD組、布地奈德組、克拉霉素組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7血清(B)及肺泡灌洗液中(F)INF-γ、IL-32與TNF-α、NF-kb、FEV0.3/FVC、GRα、GRβ相關(guān)性分析大鼠血清及肺泡灌洗液中INF-γ與IL-32均呈正相關(guān)(P0.05);大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-32與TNF-α、NF-?b均呈正相關(guān)(P0.05),與FEV0.3/FVC呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-32、TNF-α、NF-?b與肺組織中GRα免疫組化、蛋白表達(dá)水平、m RNA水平均呈負(fù)相關(guān)(P0.05),與GRβ免疫組化、蛋白表達(dá)水平、m RNA均呈正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論1.INF-γ——IL-32——IL-1β正反饋環(huán)參與了COPD的發(fā)病過程,克拉霉素、布地奈德單用或聯(lián)合應(yīng)用均能不同程度抑制該反饋環(huán)激活,減輕COPD大鼠肺部及全身的炎癥反應(yīng),改善COPD大鼠肺功能。2.COPD大鼠GRα表達(dá)明顯降低,GRβ表達(dá)明顯升高,GRα/GRβ失衡導(dǎo)致COPD大鼠產(chǎn)生糖皮質(zhì)激素抵抗。3.克拉霉素、布地奈德均在不同程度上調(diào)節(jié)GRα/GRβ失衡,逆轉(zhuǎn)COPD大鼠糖皮質(zhì)激素抵抗,兩者聯(lián)合應(yīng)用時效果更明顯,這一過程于INF-γ——IL-32——IL-1β正反饋環(huán)有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉宇宏;王沙沙;沈凌汛;徐玉蘭;;IL-32γ對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期的影響[J];中國免疫學(xué)雜志;2012年03期

2 鄧星奇;張志鋒;劉梅;顧薇;凌美蓉;丁念昌;程德山;周健;王繼芹;;吸入布地奈德對被動吸煙大鼠肺功能及肺組織IL-32表達(dá)的影響[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年17期

3 楊勇;王化芬;王超群;梁臻龍;吳佗;袁寧;江新泉;;骨髓增生異常綜合征患者血清IL-32和IL-18檢測及其相關(guān)研究[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年01期

4 閻紅娥;張堯;鮑文華;孫云暉;柴明思;;慢性阻塞性肺疾病患者血清中IL-32、8-iso-PGF2α的變化及意義[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2014年02期

5 柳愛華;宣群;寶福凱;;IL-32及其與結(jié)核病的相關(guān)性研究進(jìn)展[J];中國病原生物學(xué)雜志;2010年03期

6 唐金勇;曹春華;文浩杰;;IL-32在慢性鼻竇炎組織中的表達(dá)及機(jī)理研究[J];中國耳鼻咽喉顱底外科雜志;2014年03期

7 嚴(yán)若華;劉勁芳;;腦血管損傷性認(rèn)知功能障礙病人IL-32的檢測及其臨床意義研究[J];數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志;2011年03期

8 夏芹;張恒超;李渲;葉e，

本文編號：2334551