【摘要】：目的急性肺損傷（ALI）以失控性炎癥反應(yīng)、通透性肺水腫、肺泡內(nèi)液體聚集及呼吸衰竭為病理生理特征。血管緊張素II（Ang II）是腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的主要效應(yīng)物，具有維持體內(nèi)水鹽平衡和細(xì)胞外液容量的生理作用。Ang II在ALI失控性炎癥反應(yīng)中扮演重要作用，，但是在ALI肺水腫形成及肺泡內(nèi)液體聚集中作用尚未闡明。肺泡上皮鈉通道（ENaC）是肺泡內(nèi)鈉水重吸收的關(guān)鍵限速步驟，調(diào)控肺泡內(nèi)液體容量平衡。來源于腎及結(jié)腸等多個(gè)組織器官的研究均提示Ang II能調(diào)控ENaC表達(dá)及功能活性，尚不清楚Ang II在肺組織中對(duì)ENaC的作用。故本研究通過氣道內(nèi)滴入脂多糖誘導(dǎo)ALI動(dòng)物模型及微量泵泵入不同濃度Ang II兩種方式，探討內(nèi)源性生成及外源性給予AngII對(duì)肺泡液體清除（AFC）及肺泡上皮鈉通道（ENaC）表達(dá)的影響，并用A549細(xì)胞進(jìn)一步證實(shí)Ang II對(duì)ENaC的表達(dá)調(diào)控作用。 方法內(nèi)源性Ang II實(shí)驗(yàn)部分：SD大鼠用戊巴比妥腹腔注射麻醉后，行氣管插管，通過氣管導(dǎo)管向氣管內(nèi)注入LPS（1mg/kg）誘導(dǎo)ALI。空白對(duì)照組大鼠則給予等量的生理鹽水。血管緊張素II1型（AT1）受體阻滯劑ZD7155（10mg/kg）在LPS滴入前30min于腹腔內(nèi)注入。SD大鼠均殺死后抽取血液及取出完整肺組織，右肺用于AFC測(cè)量，左肺用于測(cè)量肺組織水含量及支氣管肺泡灌洗液分析，并采用HE染色觀察病理改變，用免疫組織化學(xué)分析ENaC在肺組織內(nèi)的表達(dá)變化。用ELISA方法分析肺組織和血漿中內(nèi)Ang II濃度。肺組織內(nèi)的ENaC蛋白表達(dá)用蛋白免疫印跡法（Western blotting）測(cè)定。外源性Ang II實(shí)驗(yàn)部分：SD大鼠以戊巴比妥腹腔注射麻醉后，行頸靜脈置管術(shù)，通過微量泵泵入不同濃度（1，10及100μg/kg·min）的外源性Ang II�？瞻讓�(duì)照組大鼠則泵入等量的生理鹽水。血管緊張素II1型（AT1）受體阻滯劑ZD7155（10mg/kg）及cAMP降解抑制劑羅利普蘭（1mg/kg）在Ang II泵入前30min于腹腔內(nèi)注入。SD大鼠均殺死后抽取血液及取出完整肺組織，右肺用于AFC測(cè)量，左肺用于測(cè)量肺組織水含量及支氣管肺泡灌洗液分析，并采用HE染色觀察病理改變，用免疫組織化學(xué)分析ENaC在肺組織內(nèi)的表達(dá)變化。用ELISA方法分析肺組織中TNF-α、IL-β濃度。采用RIA法測(cè)定肺組織內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平。肺組織內(nèi)的ENaC mRNA及蛋白表達(dá)分別用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（Western blot）測(cè)定。并進(jìn)一步給予A549細(xì)胞含有不同濃度（10-7M，10-5M）的Ang II培養(yǎng)基培養(yǎng)，用Western blotting分析不同濃度Ang II對(duì)A549細(xì)胞ENaC蛋白表達(dá)的作用。 結(jié)果內(nèi)源性Ang II研究中：氣道內(nèi)滴入LPS誘導(dǎo)肺組織及血漿中Ang II水平顯著升高，并伴隨AFC降低。LPS的作用時(shí)間與Ang II升高和AFC的降低程度相關(guān)(血漿：ALI2h組2.53±0.4μg/l，ALI4h組3.78±1.15μg/l，ALI6h組4.91±1.1μg/l；肺組織：ALI2h組190.2±38.23μg/l，ALI4h組305±72.99μg/l，ALI6h組580.4±129.16μg/l)。預(yù)先給予ZD7155作用后，能顯著抑制ALI誘導(dǎo)的AFC降低作用(7.8±1.61%vs4.4±1.14%)，同時(shí)逆轉(zhuǎn)ALI誘導(dǎo)的對(duì)β及γ-ENaC蛋白表達(dá)的下調(diào)作用，但卻進(jìn)一步下調(diào)α-ENaC蛋白表達(dá)(P0.05)。ZD7155還顯著改善ALI誘導(dǎo)的間質(zhì)水腫及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的病理改變。外源性AngII研究中：給予外源性高濃度（10及100μg/kg·min）Ang II顯著抑制AFC并呈劑量依賴效應(yīng)(P0.05)。Ang II泵入導(dǎo)致對(duì)α-ENaC和β及γ-ENaC表達(dá)的非協(xié)同調(diào)節(jié)作用，上調(diào)α-ENaC和下調(diào)β及γ-ENaC表達(dá)。給予ZD7155干預(yù)后，能顯著拮抗外源性Ang II對(duì)AFC(10.8±1.483%vs6.2±2.683%)及ENaC表達(dá)的調(diào)控作用(P0.05)。在A549細(xì)胞研究中，也顯示Ang II對(duì)ENaC表達(dá)的非協(xié)同調(diào)節(jié)作用，并呈濃度依賴的方式調(diào)控ENaC表達(dá)(P0.05)。外源性Ang II顯著抑制肺組織內(nèi)cAMP水平，給予羅利普蘭后則緩解Ang II對(duì)AFC的抑制作用(9.8±3.033%vs6.2±2.683%)。 結(jié)論內(nèi)外源性Ang II都能夠通過激活A(yù)T1受體抑制肺泡液體清除，導(dǎo)致肺水含量增加，誘導(dǎo)肺水腫形成。 Ang II對(duì)ENaC三個(gè)亞基的表達(dá)呈非協(xié)同的調(diào)節(jié)作用，可能導(dǎo)致了ENaC中HSC與NSC通道比例的失調(diào)，從而影響了肺泡內(nèi)液體的清除。 AT1受體阻滯劑及cAMP降解抑制均能夠?qū)ng II誘導(dǎo)的肺泡液體清除降低具有保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R563.8

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本文編號(hào)：2320703