【摘要】：目的：本研究通過觀察大鼠血清中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、IL-4及IFN-y,氣道中RAS及ERK蛋白的表達(dá),探討：(1)辛伐他汀抑制Ras-MAPK信號通路激活的機(jī)制。(2)辛伐他汀通過調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡,減輕哮喘的氣道炎癥。(3)辛伐他汀通過抑制血清中TGF-β1水平及膠原沉積減輕哮喘氣道重塑。 方法：本實(shí)驗將40只體重在130-150g之間的雄性SD大鼠,隨機(jī)分成五組,分別為：對照組；哮喘模型組；辛伐他汀20mg/kg組；辛伐他汀40mg/kg組；辛伐他汀60mg/kg組。哮喘組及辛伐他汀組均采用OVA致敏和激發(fā),不同的是辛伐他汀組在每次激發(fā)前30分鐘給予不同劑量辛伐他汀即20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg灌胃。而對照組致敏和激發(fā)均采用生理鹽水。所有大鼠于末次激發(fā)24小時后先用1%戊巴比妥鈉麻醉,進(jìn)行肺功能檢查測定呼氣峰值變化。然后收集肺泡灌洗液、血清及肺組織。ELISA法檢測血清中TGF-β1、IL-4和IFN-γ的水平；肺組織HE染色后測定支氣管基底膜周徑(Pbm)、總管壁面積(WAt)和平滑肌面積(WAm);馬松染色后檢測氣道壁膠原的表達(dá)；計數(shù)灌洗液中細(xì)胞數(shù)；免疫組織化學(xué)法檢測大鼠氣道中RAS蛋白和ERK蛋白的表達(dá),并進(jìn)行定量分析。 結(jié)果： 1肺功能結(jié)果：隨著乙酰膽堿濃度的增加,哮喘組及辛伐他汀組大鼠呼氣峰值均顯著降低,即氣道阻力明顯升高,但辛伐他汀組呼氣峰值較哮喘組均有所升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 2肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)及其分類計數(shù)的結(jié)果：哮喘組與辛伐他汀組細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)均高于正常對照組(F=64.126P0.01,F=133.766P0.01),但辛伐他汀組均明顯低于哮喘模型組(P0.05)。高劑量辛伐他汀組細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)均低于低劑量辛伐他汀組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 3病理結(jié)果：哮喘大鼠肺組織可見炎癥細(xì)胞浸潤、平滑肌細(xì)胞增生、管壁增厚、上皮細(xì)胞脫落及粘液分泌增多。而辛伐他汀組可明顯減少上述改變。各組支氣管壁厚度、平滑肌層厚度分別為：正常對照組(59.07±10.95,12.85±2.47)、哮喘模型組(90.91±13.80,38.49±3.37)、辛伐他汀20mg/kg組(80.64±14.30,31.28±2.61)、40mg/kg組(73.87±11.97,24.53±2.73)、60mg/kg組(66.88±11.47,17.05±2.65)。對照組低于哮喘組及辛伐他汀組(F=34.553P0.01,F=100.925P0.01)；哮喘組高于辛伐他汀組(P0.01)；高劑量辛伐他汀組低于低劑量組(P0.05)。 4膠原沉積的結(jié)果：與正常對照組(0.0184±0.0034)相比,哮喘模型組(0.0634±0.0071)、辛伐他汀20mg/kg組(0.0463±0.0058)、40mg/kg組(0.0416±0.0058)及60mg/kg(0.0276±0.006)明顯增加(F=65.778,P0.01)；其中哮喘組高于辛伐他汀組(P0.01)；高劑量辛伐他汀組低于低劑量組(P0.01)。 5血清ELISA法檢測IL-4、IFN-γ及TGF-β1結(jié)果： IL-4、TGF-p1水平：與正常對照組(174.34±40.64,56.83±10.62)相比,哮喘組(475.71±55.56,11.86±3.17)、辛伐他汀20mg/kg組(362.91±37.59,162.03±15.51)、40mg/kg組(284.62±34.15,136.87±9.55)、60mg/kg組(225.18±26.92,87.07±8.88)明顯增加(F=64.617P0.01,F=124.41P0.01)；其中哮喘組高于三個辛伐他汀組(P0.05)。高劑量辛伐他汀組低于低劑量組(P0.05)。 IFN-γ水平：與正常對照組(51.26±8.59)相比,哮喘模型組(11.86±3.17)、辛伐他汀20mg/kg組(22.11±4.82)、40mg/kg組(34.52±4.95)、60mg/kg組(44.70±4.16)明顯減少(F=61.541,P0.01)；其中哮喘組低于三個辛伐他汀組(P0.05)；高劑量辛伐他汀組高于低劑量組(P0.05)。 6大鼠氣道免疫組織化學(xué)RAS及ERK蛋白的表達(dá)： ERK、RAS的平均光密度值：與正常對照組(0.1263±0.058,0.0926±0.016)相比,哮喘組(0.4963±0.078,0.2515±0.0417)、辛伐他汀20mg/kg組(0.3955±0.084,0.2138±0.0299)、40mg/kg組(0.3069±0.076,0.1727±0.031)、60mg/kg組(0.2162±0.077,0.1320±0.0258)明顯增加(F=27.531P0.01,F=31.334P0.01)；其中哮喘組高于三個辛伐他汀組(P0.05)。高劑量辛伐他汀組低于低劑量組(P0.05)。 7相關(guān)性分析結(jié)果：大鼠氣道中ERK蛋白的表達(dá)與膠原表達(dá)、血清中TGF-β1及IL-4水平均成顯著正相關(guān)(r=0.861,P0.05,r=0.901,P0.01,r=0.822,P0.05),與IFN-γ水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.822,P0.05)。 結(jié)論： 1哮喘組大鼠氣道中RAS及ERK蛋白表達(dá)明顯高于對照組,提示哮喘的發(fā)生可能與RAS-MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)。三個辛伐他汀組大鼠氣道中RAS及ERK蛋白表達(dá)均低于哮喘組而高于對照組提示辛伐他汀可抑制RAS-MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。 2辛伐他汀可降低哮喘大鼠血清中IL-4及TGF-β1的水平,提高血清中IFN-γ的水平。 3大鼠氣道ERK蛋白表達(dá)與膠原沉積、血清中TGF-β1及IL-4水平呈正相關(guān),與IFN-γ水平呈負(fù)相關(guān)。提示辛伐他汀通過下調(diào)膠原及TGF-β1水平,發(fā)揮抑制氣道重塑的作用；通過上調(diào)IFN-γ的表達(dá)水平,下調(diào)IL-4的表達(dá)水平調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡,發(fā)揮抑制氣道炎癥作用。此過程與辛伐他汀抑制ERK蛋白表達(dá)有關(guān)。 4高劑量辛伐他汀組較低劑量組治療效果好,提示辛伐他汀對哮喘的作用具有劑量依賴性。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 邢雁霞;劉斌鈺;;受體型TPK-Ras-MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進(jìn)展[J];大同醫(yī)學(xué)�？茖W(xué)校學(xué)報;2006年01期

2 楊汀,王辰,龐寶森,黃克武,夏成青,牛淑潔;豚鼠哮喘模型氣道重建對氣道反應(yīng)性的影響[J];中國病理生理雜志;2004年11期

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本文編號：2281458