【摘要】：目的 探討人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(human placenta-derivedmesenchymal stem cells, hpMSCs)對(duì)油酸型大鼠急性肺損傷(acute lung injury, ALI)的炎癥因子IL-8/IL-10的調(diào)節(jié)作用,同時(shí)檢測小G蛋白(RhoA)在油酸型急性肺損傷大鼠肺組織中的表達(dá)變化,探討移植hpMSCs對(duì)RhoA的表達(dá)的影響,為進(jìn)一步揭示間充質(zhì)干細(xì)胞在調(diào)節(jié)急性肺損傷炎癥反應(yīng)中的作用機(jī)制,為尋找靶向治療肺部及其他炎性疾病提供理論依據(jù),同時(shí)為胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在調(diào)節(jié)炎癥治療肺損傷方面提供依據(jù) 方法 采用膠原酶酶消化法體外培養(yǎng)并擴(kuò)增人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)傳代、細(xì)胞計(jì)數(shù),生長曲線及向神經(jīng)、成骨誘導(dǎo)來證明胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞。采用油酸舌下靜脈注射法建立大鼠急性肺損傷模型,進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療。將36只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組,每組12只：(1)正常對(duì)照組(n=12),經(jīng)舌下靜脈注入0.5m1生理鹽水；(2)急性肺損傷組(n=12),經(jīng)舌下靜脈注射油酸(0.2ml/kg),然后立即經(jīng)另一側(cè)注入相應(yīng)量的生理鹽水；(3)細(xì)胞移植組(n=12),經(jīng)舌下靜脈注射油酸(0.2ml/kg),然后經(jīng)另一條舌下靜脈注入培養(yǎng)的人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(1.0×106溶于0.5ml生理鹽水)。各組在實(shí)驗(yàn)后24h麻醉狀態(tài)下活殺動(dòng)物,每組12只。經(jīng)腹主動(dòng)脈取血、離心分離血漿,采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血漿IL-10、IL-8的含量；對(duì)肺組織測定濕／干重比值,制作肺組織切片以HE染色法行病理學(xué)檢查,免疫組織化學(xué)染色、Real-time PCR、Western Blot檢測大鼠肺組織中RhoA的表達(dá)變化。 結(jié)果 1、人胎盤MSCs的分離,培養(yǎng)及多向分化能力：采用酶消化法分離培養(yǎng)人胎盤MSCs。隨傳代次數(shù)的增多,人胎盤MSCs增殖能力減弱；體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)顯示,人胎盤MSCs可向成骨細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等多向分化。 2、油酸型急性肺損傷大鼠模型的建立及hpMSCs移植對(duì)ALI的影響：通過注射油酸后觀察大鼠的一般狀況,肺組織的大體形態(tài),組織切片HE染色顯示,與正常組比較,損傷組及移植組肺組織炎癥改變明顯,但移植組較損傷組炎癥明顯減輕。在損傷24h后,與正常組比較,移植組及損傷組肺W/D值,血漿IL-8及IL-10水平明顯升高；與損傷組比較,移植組肺W/D值,血漿IL-8明顯降低,IL-I0水平高于損傷組,但與對(duì)照組比較無明顯差異。免疫組化、Real-time PCR、Western Blot檢測大鼠肺組織中RhoA的表達(dá)情況顯示,與正常組比較,損傷組及移植組大鼠肺組織RhoA表達(dá)量明顯升高,與損傷組比較,移植組大鼠肺組織RhoA的表達(dá)量明顯降低。 結(jié)論 1、采用酶消化法成功分離并培養(yǎng)傳代的人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞且可向成骨細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等多向分化。 2、油酸舌下靜脈注射可成功復(fù)制急性肺損傷模型損傷。移植人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞后可降低損傷早期肺組織W/D值、血漿細(xì)胞因子IL-8的水平,提高IL-10的水平,從而利于調(diào)節(jié)炎癥因子的失衡問題. 3、急性肺損傷肺組織存在RhoA的高表達(dá),移植人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞后,能夠降低其表達(dá)量,胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在急性肺損傷早期調(diào)節(jié)炎癥因子的平衡表達(dá)中,可能是通過調(diào)節(jié)RhoA的表達(dá)來完成。
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【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R563.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2277073