【摘要】：研究背景： 在哮喘病理發(fā)展過程中，氣道平滑肌細胞（ASMCs）不僅數(shù)量的增加，還有功能的改變；此外還有有細胞外基質(zhì)（ECM）量的改變和組成的改變。ASMCs能分泌TGF-β、eotaxin等多種免疫調(diào)節(jié)因子，具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能。在哮喘病人氣道中，纖維粘連蛋白、Ⅰ型膠原和層粘蛋白等明顯增加。纖維粘連蛋白、Ⅰ型膠原促進ASMCs的增殖及分泌eotaxin等免疫因子，層粘蛋白則抑制ASMCs的增殖。但層粘連蛋白對ASMCs分泌功能的影響尚無文獻報道。層粘連蛋白在黑色素瘤細胞中能通過增加MKP-1的表達抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，由此，層粘連蛋白是否可以通過增加MKP-1的表達來影響氣道平滑肌細胞分泌功能。整合素是ECM與細胞骨架及信號通路連接的橋梁。整合素α7β1表達于氣道平滑肌細胞等細胞，整合素α7特異性的與層粘連蛋白結(jié)合，因此，層粘連蛋白是否通過整合素α7β1影響氣道平滑肌細胞分泌功能。 目的： 探討層粘連蛋白-整合素α7β1信號通路是否能影響ASMCs表達及分泌TGF-β1、eotaxin-1等因子及其機制。并探討層粘連蛋白對哮喘小鼠的作用。 方法： 1）細胞實驗：用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)出人氣道平滑肌細胞（HASMCs），將2-5代 的HASMCs用于實驗。將HASMCs接種于層粘連蛋白（10ug/ml）包被的培養(yǎng)板及空白培養(yǎng)板中，用整合素α7單抗、β1單抗阻斷層粘連蛋白與HASMCs表面的整合素α7β1結(jié)合；用IL-13（20ng/ml）刺激HASMCs模擬哮喘環(huán)境。分為6組：空白組、IL-13組、IL-13+LN組、LN組、IL-13+LN+antiα7組、IL-13+LN+antiβ1組。通過realtimePCR法檢測HASMCs中TGF-β1、eotaxin-1、MKP-1的mRNA表達，ELISA法檢測HASMCs培養(yǎng)上清中TGF-β1、eotaxin-1蛋白，通過WesternBlot檢測HASMCs中MKP-1蛋白表達。 2）動物實驗：建立BALB/c小鼠哮喘模型，分3組：正常對照組（用生理鹽水代 替OVA）,哮喘組，層粘連蛋白組（每次激發(fā)前2h用層粘連蛋白200ug預(yù)處理）。用HE染色及PAS染色觀察小鼠氣道炎癥及杯狀細胞增生情況，用ELISA法檢測小鼠肺泡灌洗液（BALF）中IL-4的表達。 結(jié)果： 1）層粘連蛋白-整合素α7β1抑制IL-13誘導(dǎo)的HASMCsTGF-β1、eotaxin-1mRNA表達及蛋白分泌，增加MKP-1mRNA表達及蛋白表達。IL-13組與空白組比較：TGF- β1、eotaxin-1mRNA表達及蛋白分泌增加（p0.05），MKP-1mRNA及蛋白表達減少（p0.05）；IL-13+LN組與IL-13組比較：TGF-β1、eotaxin-1mRNA表達及蛋白分泌減少（p0.05），MKP-1mRNA及蛋白表達增加（p0.05）；IL-13+LN+antiα7組、IL-13+LN+antiβ1組與IL-13+LN組比較：TGF-β1、eotaxin-1mRNA表達及蛋白分泌增加（p0.05），MKP-1mRNA及蛋白表達減少（p0.05）。 2）層粘連蛋白減輕哮喘氣道炎癥及減少杯狀細胞增生，減少BALF中的IL-4，對哮喘具有保護作用。哮喘組與正常對照組比較，，氣道炎癥明顯加重，杯狀細胞明顯增生，BALF中IL-4增加（p0.05）；層粘連蛋白組與哮喘組比較，氣道炎癥明顯減輕，杯狀細胞明顯減少，BALF中IL-4減少（p0.05）。 結(jié)論： 實驗結(jié)果表明層粘連蛋白能抑制IL-13誘導(dǎo)的HASMCs分泌TGF-β1、eotaxin-1水平，增加MKP-1表達；整合素α7單抗、β1單抗可以部分阻斷層粘連蛋白對HASMCs的這種作用。層粘連蛋白減輕哮喘氣道炎癥及杯狀細胞增生，減少BALF中的IL-4。因此，層粘連蛋白-整合素α7β1可以抑制HASMCs細胞因子的合成及分泌，可能通過增加MKP-1表達發(fā)揮作用。層粘連蛋白可以減輕氣道炎癥，對哮喘具有保護作用。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R562.25

【共引文獻】

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本文編號：2275448