【摘要】：目的:制備粉塵螨粗抗原建立BALB/c小鼠哮喘模型,檢測(cè)細(xì)胞因子并觀察肥大細(xì)胞形態(tài)及脫顆粒的情況。方法:制備粉塵螨粗抗原,30只BALB/c小鼠隨機(jī)均分為3組,陰性對(duì)照組(A組)、哮喘模型組(B組)和治療組(C組)。A組始終使用PBS處理,B組和C組在第0、7和14天用50μg粉塵螨粗抗原+50μl明礬佐劑腹腔注射致敏。在第28天,A組和B組用PBS、C組用粉塵螨粗抗原(350μg/次)皮下注射免疫1周,隔天免疫1次,末次免疫1周后開(kāi)始用50μg粉塵螨粗抗原滴鼻激發(fā),每天1次,連續(xù)7次。末次激發(fā)24 h后進(jìn)行氣道高反應(yīng)檢測(cè)。末次激發(fā)48 h后處死小鼠取血,對(duì)小鼠進(jìn)行肺泡灌洗收集肺泡灌洗液(BALF),無(wú)菌摘取肺組織和脾臟,分別進(jìn)行肺組織病理切片與脾細(xì)胞培養(yǎng)。檢測(cè)BALF和脾細(xì)胞上清中IL-4、IL-10和IFN-γ細(xì)胞因子水平,血清中IgE、組胺抗體水平,進(jìn)行HE染色和甲苯胺藍(lán)染色觀察肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度和肥大細(xì)胞脫顆粒狀況。結(jié)果:與B組相比,C組氣道高反應(yīng)性和肺部病理癥狀減輕(P0.01)。C組BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示與B組相比細(xì)胞總數(shù)和嗜酸粒細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.01)。與B組相比,C組的肥大細(xì)胞脫顆粒情況明顯減輕,細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定。與B組(IgE:1.905)相比,C組血清中抗原特異性IgE抗體水平(IgE:1.278)明顯降低(P0.01)。BALF細(xì)胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ水平檢測(cè)結(jié)果顯示,與B組相比,C組BALF中IL-4水平明顯降低接近A組值(P0.01),而IL-10與A、B兩組相比有明顯升高(P0.01),C組的IFN-γ也高于A、B兩組(P0.01)。C組脾細(xì)胞上清中IL-4明顯低于B組(P0.01),而IL-10明顯高于B組(P0.01),IFN-γ也明顯高于B組(P0.01)。BALF和血清中組胺水平結(jié)果顯示,在BALF中,C組與B組相比略低(P0.05),而在血清中檢測(cè)出的組胺有明顯降低(P0.05)。結(jié)論:過(guò)敏性哮喘模型脫敏治療后小鼠肥大細(xì)胞脫顆粒情況被抑制。
[Abstract]:Aim: to establish asthma model of BALB/c mice with coarse antigen of Dermatophagoides farinae, detect cytokines and observe the morphology and degranulation of mast cells. Methods: thirty BALB/c mice were randomly divided into 3 groups. Negative control group (group A), asthma model group (group B) and treatment group (group C). A) were treated with PBS all the time. Group B and C were sensitized with 50 渭 g adjuvant 50 渭 l of coarse antigen of Dermatophagoides farinae on the 7th and 14th day after treatment. On the 28th day, group A and group B were immunized subcutaneously with the crude antigen of Dermatophagoides farinae (350 渭 g / time) for 1 week in PBS,C group, once every other day. After the last immunization, 50 渭 g crude antigen of Dermatophagoides farinae was given nasal drip once a day for 7 consecutive times. Airway hyperresponsiveness was detected 24 h after the last excitation. The mice were sacrificed for 48 h after the last stimulation, and the alveolar lavage fluid (BALF),) was collected by alveolar lavage. The lung tissue and spleen were removed with (BALF), and the pathological sections of lung tissue and the culture of spleen cells were carried out respectively. The levels of IL-4,IL-10 and IFN- 緯 cytokines in the supernatant of BALF and spleen cells, and the level of IgE, histamine antibody in serum were measured. The infiltration of inflammatory cells and degranulation of mast cells were observed by HE staining and toluidine blue staining. Results: compared with group B, the airway hyperresponsiveness and lung pathological symptoms were alleviated in group C (P0.01). C group). The cell count in BALF of group C was significantly lower than that in group B (P0.01), and the total number of cells and the number of eosinophils in group B were significantly lower than those in group B (P0.01). Compared with group B, the degranulation of mast cells in group C was significantly reduced and cell morphology was stable. Compared with group B (IgE:1.905), the level of antigen-specific IgE antibody (IgE:1.278) in serum of group C was significantly lower than that of group B (P0.01). BALF cytokines IL-4,IL-10 and IFN- 緯). Compared with group B, the level of IL-4 in BALF in group C was significantly lower than that in group A (P0.01), while the level of IFN- 緯 in group IL-10 was significantly higher than that in group A and B (P0.01), C group was also higher than that in group A and B group (P0.01). C group was significantly lower than that in group B (P0.01), IL-10 was significantly higher than group B (P0.01), IFN- 緯 was significantly higher than group B (P0.01). It was also significantly higher than that in group B (P0.01). BALF and serum histamine level). In BALF, group C was slightly lower than group B (P0.05), while histamine detected in serum was significantly lower (P0.05). Conclusion: the degranulation of mast cells was inhibited after desensitization in allergic asthma model.
【作者單位】： 深圳大學(xué)過(guò)敏反應(yīng)與免疫學(xué)研究所;南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院遺傳教研室;
【基金】：海外及港澳學(xué)者合作研究基金(No.31328014) 廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.04554;S2013040014206) 廣東省高等學(xué)校國(guó)際暨港澳臺(tái)科技合作創(chuàng)新平臺(tái)項(xiàng)目(No.2012gjhz0009) 深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.JCYJ20120613100657482、JCYJ20120613173913654、JCYJ20120613173233810)資助
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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9 趙麗麗;雙歧桿菌完整肽聚糖對(duì)哮喘模型小鼠骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

10 謝強(qiáng);哮喘患者血清sCD86水平及聯(lián)合吸入治療對(duì)其影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：2264875