【摘要】：目的:探討高遷移率族蛋白B1(HMGB1)通過Toll樣受體4(TLR4)介導(dǎo)小鼠急性肺損傷時CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+Treg)免疫功能及免疫抑制活性的變化;研究CD4+CD25+Treg與CD4+CD25-T細(xì)胞相互作用的影響。方法:分別給健康清潔級C57BL/10J和C57BL/10Sc[分別為TLR4野生型(TLR4+/+)和敲除型(TLR4-/-)]小鼠氣管內(nèi)注射HMGB1(20μg/只)為實驗組,同時設(shè)立氣管內(nèi)注射生理鹽水野生型小鼠為對照組;(1)于造模后飼養(yǎng)48小時眼球取血法法處死小鼠收集血清及肺泡灌洗液(BALF),光鏡下觀察肺臟病理改變,稱重測定肺臟干濕比;采用免疫磁珠分離脾臟CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-T細(xì)胞。(2)將各組部分CD4+CD25+Treg體外培養(yǎng)24小時后,采用流式細(xì)胞儀檢測CD4+CD25+Treg表達(dá)叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(FOXP3)和淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)的表達(dá)強(qiáng)度,并且用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測BALF中白細(xì)胞介素-1(IL-1),腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及CD4+CD25+Treg分泌的白細(xì)胞介素-10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)的含量。(3)將各組CD4+CD25+Treg與對照組CD4+CD25-T細(xì)胞按1:1比例共培養(yǎng),包被CD3單抗和可溶性CD28單抗輔助活化;CCK-8法檢測CD4+CD25+Treg對CD4+CD25-T細(xì)胞增殖的抑制作用。并采用ELISA法檢測共培養(yǎng)體系中分泌的白細(xì)胞介素-4(IL-4)、IL-2和干擾素-γ(IFN-γ)的含量。結(jié)果:1、與對照組相比,兩實驗組小鼠氣管內(nèi)注射HMGB1后,肺組織損傷程度明顯嚴(yán)重,肺臟干濕比值及BALF灌洗液中TNF-α,IL-1含量顯著增高,且TLR4野生型小鼠較TLR4敲除型小鼠病變程度更加嚴(yán)重;2、流式細(xì)胞學(xué)檢測免疫磁珠分選的CD4+CD25+Treg純度在90%以上;TLR4野生型急性肺損傷小鼠FOXP3和CTLA-4表達(dá)強(qiáng)度低于對照組和TLR4敲除型(P0.05);野生型實驗組小鼠Treg分泌的IL-10及TGF-β含量較對照組含量降低(P0.05),而TLR4敲除型較對照組IL-10及TGF-β含量升高(P0.05);3、經(jīng)CD3和CD28輔助活化后,TLR4野生型急性肺損傷小鼠CD4+CD25+Treg與效應(yīng)T細(xì)胞共培養(yǎng)上清中,IL-2,IFN-γ含量高于對照組(P0.05),IL-4含量低于對照組(P0.05),提示CD4+CD25+Treg可使T細(xì)胞極化Th2細(xì)胞能力減弱,向Th1細(xì)胞方向極化;而TLR4敲除型急性肺損傷小鼠CD4+CD25+Treg與效應(yīng)T細(xì)胞共培養(yǎng)上清中,IL-2,IFN-γ含量低于對照組(P0.05),IL-4含量高于對照組(P0.05),CD4+CD25+Treg介導(dǎo)的免疫抑制效應(yīng)促使T細(xì)胞極化為Th2細(xì)胞,引起Th1/Th2的漂移。結(jié)論:1、氣管內(nèi)注射HMGB1可以誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷模型;2、免疫磁珠分選的CD4+CD25+Treg細(xì)胞純度較高,可以滿足后續(xù)實驗的要求;3、在急性肺損傷時HMGB1可通過TLR4下調(diào)CD4+CD25+Treg的免疫功能,使CD4+CD25+Treg中Foxp3和CTLA-4分子的表達(dá)下調(diào),從而減弱其免疫抑制功能的發(fā)揮;4、在急性肺損傷時HMGB1可通過TLR4使CD4+CD25+Treg極化Th2細(xì)胞能力減弱,向Th1細(xì)胞方向極化,弱化了CD4+CD25+Treg的功能,影響炎癥反應(yīng)的結(jié)局;為ARDS開辟新的治療靶點。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of high mobility group protein B1 (HMGB1) on the immune function and immunosuppressive activity of CD4 CD25 regulatory T cells (CD4 CD25 Treg) in mice with acute lung injury mediated by Toll like receptor 4 (TLR4), and to investigate the interaction between CD4 CD25 Treg and CD4 CD25-T cells. Methods: healthy clean grade C57BL/10J and C57BL/10Sc [TLR4 wild-type (TLR4 /) and knockout type (TLR4-r-)] mice were given intratracheal injection of HMGB1 (20 渭 g / mouse) respectively as experimental group. At the same time, the wild-type mice with intratracheal injection of normal saline were set up as the control group. (1) after 48 hours of feeding, the mice were killed to collect serum and alveolar lavage fluid (BALF),) to observe the pathological changes of lung, and the lung dry-wet ratio was measured. Splenic CD4 CD25 Treg and CD4 CD25-T cells were isolated by immunomagnetic beads. (2) after cultured in vitro for 24 hours, the expression of CD4 CD25 Treg, FOXP3 and CTLA-4 were detected by flow cytometry. The levels of interleukin-1 (IL-1), tumor necrosis factor- 偽 (TNF- 偽), interleukin-10 (IL-10) and transforming growth factor- 尾 (TGF- 尾) secreted by CD4 CD25 Treg in BALF were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). (3) CD4 CD25 Treg and CD4 CD25-T cells in control group were co-cultured at 1:1. The inhibitory effect of CD4 CD25 Treg on the proliferation of CD4 CD25-T cells was detected by CCK-8 method coated with CD3 McAb and soluble CD28 McAb. The levels of interleukin-4 (IL-4) IL-2 and interferon- 緯 (IFN- 緯) secreted in co-culture system were detected by ELISA method. Results compared with the control group, the lung tissue injury of the mice in the two experimental groups was obviously serious after intratracheal injection of HMGB1, and the ratio of lung dry-wet and the content of TNF- 偽 IL-1 in the BALF lavage fluid were significantly higher than those in the control group. The pathological changes of TLR4 wild-type mice were more serious than those of TLR4 knockout mice. The CD4 CD25 Treg purity of immunomagnetic beads was more than 90% in TLR4 wild-type mice with acute lung injury, and the expression of FOXP3 and CTLA-4 in mice with wild type lung injury was lower than that in control group. The levels of IL-10 and TGF- 尾 secreted by Treg in wild type mice were lower than those in control group (P0.05), while those of TLR4 knockout type were higher (P0.05) than those of control group (P0.05). After CD3 and CD28 activation, the contents of TGF- 尾 in wild type of lung injury mice were significantly lower than those in control group (P0.05). The content of IL-2IFN- 緯 in the supernatant of Treg and effector T cell culture was higher than that in the control group (P0.05), which suggested that CD4 CD25 Treg could weaken the ability of polarized Th2 cells. The level of IL-2tIFN- 緯 in the supernatant of CD4 CD25 Treg and effector T cells in mice with acute lung injury induced by TLR4 knockout type was lower than that in the control group (P0.05) and the immunosuppressive effect mediated by CD4 CD25 Treg in the control group was higher than that in the control group (P0.05). Cause the drift of Th1/Th2. Conclusion HMGB1 injected into trachea can induce acute lung injury model in mice. The purity of CD4 CD25 Treg cells separated by immunomagnetic beads is high, which can meet the requirements of subsequent experiments. HMGB1 can down-regulate the immune function of CD4 CD25 Treg through TLR4 during acute lung injury. The expression of Foxp3 and CTLA-4 molecules in CD4 CD25 Treg was down-regulated and the immunosuppressive function was weakened. In acute lung injury, HMGB1 could weaken the ability of CD4 CD25 Treg polarized Th2 cells through TLR4, polarize CD4 CD25 Treg cells in the direction of Th1 cells, and weaken the function of CD4 CD25 Treg. To influence the outcome of inflammatory reaction; to open up a new therapeutic target for ARDS.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563

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4 ;Ｃａｌｆａｃｔａｎｔ在兒科急性肺損傷中的療效[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2005年

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本文編號：2179741