本文選題：急性肺損傷 + 炎癥反應�。� 參考：《南方醫(yī)科大學》2013年博士論文

【摘要】：研究背景和目的 急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)及其更嚴重階段急性呼吸窘迫綜合征(Acute Respiratory Distress Syndrome, ARDS)是臨床危重癥發(fā)生急性呼吸衰竭的主要原因,病死率高達50%。ALI/ARDS發(fā)病機制錯綜復雜,目前為止尚未完全闡明,各種以肺為靶目標的的傳染病、生物化學損傷、嚴重外傷與創(chuàng)傷后感染、休克、中毒均可成為ALI的主要發(fā)病因素,其病理基礎均表現(xiàn)為肺內(nèi)失控的炎癥反應所致的肺毛細血管膜損傷,肺水腫及透明膜形成。 雖然機械通氣和全身激素治療在一定程度上延緩了ALI/ARDS的進展,但是目前臨床仍缺乏針對ALI/ARDS的有效免疫調(diào)控及肺保護手段。由于參與ALI炎癥反應及氧化應激損傷的介質(zhì)眾多,且彼此相互聯(lián)系、互為因果,在治療過程中針對單一介質(zhì)的單克隆抗體、拮抗劑、抑制劑等均未取得滿意的防治效果。此外,炎癥介質(zhì)為機體所必需,過多或不足均會造成損害,而使用抑制劑等劑量與時機很難把握,常使此類研究陷入困境。 核因子Kappa B (Nuclear Factor Kappa B, NF-кB)信號通路是啟動炎癥反應的關(guān)鍵通路,在感染及創(chuàng)傷等多種因素誘發(fā)的炎癥反應及氧化應激損傷中起重要作用。NF-кB是廣泛存在于細胞漿中的一種快反應轉(zhuǎn)錄因子,靜息狀態(tài)下,NF-кB與其抑制因子IκB結(jié)合以無活性的三聚體形式存在于細胞漿。當細胞受到細胞因子、促炎介質(zhì)、病毒及細菌分解物等外界刺激后,NF-кB被激活并迅速從細胞漿轉(zhuǎn)位到細胞核,在胞核內(nèi)與相應基因上的κB位點發(fā)生特異性結(jié)合,調(diào)控細胞因子、化學趨化因子、生長因子、粘附分子、誘生型一氧化氮合成酶和協(xié)同刺激分子等相關(guān)基因的表達,進而參與機體炎癥反應、氧化應激、細胞凋亡等。抑制INF-кB活化不僅可以降低炎癥損傷,還可以同時減弱氧化應激,減少細胞組織的損傷。已有研究證明抑制NF-кB活化可以明顯地降低脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)所致的感染性休克小鼠死亡率。本課題組前期研究與其他國外研究均顯示抑制NF-кB過度活化可減少TNF-α誘導的肺泡上皮細胞炎癥反應、氧化應激損傷及凋亡。因此,我們推測,NF-кB是連接ALI炎癥反應與氧化應激的重要節(jié)點,對NF-кB的活性進行調(diào)控是同時下調(diào)ALI炎癥反應與減輕氧化應激損傷的關(guān)鍵。 通過抑制IκB激酶(IкBkinase,IKK)活性進而下調(diào)NF-кB活化程度是當前研究ALI/ARDS干預策略的熱點。IKK對IκB的磷酸化是NF-кB活化的關(guān)鍵步驟,是NF-кB在炎癥反應過程中激活的經(jīng)典途徑。IKK由IKKα、IKKβ和IKKy三個亞單位組成,其中IKKy又稱NEMO,是IKK的調(diào)節(jié)亞單位。研究證實IKK活化經(jīng)典的NF-кB信號通路依賴IKKy的完整性。目前已經(jīng)有了針對IKK調(diào)節(jié)亞單位NEMO的結(jié)合肽(NEMO Binding Domain Peptide, NBD), NBD可與NEMO特異性結(jié)合從而阻斷IKK復合物的組裝并下調(diào)IKK活性,進而抑制NF-кB活化。但是如何把穩(wěn)定的具有生物學活性的NBD靶向?qū)氲椒闻K以及如何把握NBD使用劑量與給藥時機,以便更好低改善ALI失控的炎癥反應和氧化損傷,目前未見相關(guān)研究。 在藥劑學領域,使用藥物載體是改善藥效,提高藥物靶向性與減少藥物不良反應的一種措施。本研究擬利用外源性肺泡表面活性物質(zhì)(Pulmonary Surfactant, PS)包封NBD,再經(jīng)氣管內(nèi)霧化的形式靶向肺部給藥,在提高藥物穩(wěn)定性的同時,能更大可能性地改善NBD對肺組織的親和力和促進NBD進入肺結(jié)構(gòu)細胞以抑制NF-кB信號通路的活化,而外源性PS則可補充炎癥反應或氧化應激中損失的肺泡表面活性物質(zhì),以協(xié)同達到糾正ALI病理損傷、維持正常呼吸功能的目的。 綜上所述,本課題的研究目的如下： 1采用氣管內(nèi)霧化、氣管內(nèi)滴入和腹腔注射LPS復制ALI小鼠模型,評估LPS經(jīng)不同給藥方式致小鼠肺組織病理損傷及炎癥反應程度,選則手術(shù)創(chuàng)傷小、操作簡便且最接近ALI病理特點的小鼠模型。 2確定最佳造模方式之后,不同劑量的NBD經(jīng)氣管內(nèi)霧化預處理0.5h,評價NBD預處理對ALI小鼠肺組織過度炎癥反應及氧化應激損傷的影響。 3選擇合適劑量的NBD充分溶解于外源性PS,探討NBD聯(lián)合PS預處理對ALI小鼠肺組織過度炎癥反應的影響及作用機制。 方法 1LPS經(jīng)不同給藥方式致ALI小鼠模型的比較研究 12周齡,SPF級雄性BLAB/c小鼠隨機分為正常對照組(NC group)、氣管內(nèi)霧化組(ITA group)、氣管內(nèi)滴入組(ITI group)和腹腔注射組(IPI group),每組21只。NC組小鼠腹腔注射0.1mL水合氯醛麻醉后氣管內(nèi)霧化噴入100μL空氣；ITA組小鼠麻醉后氣管內(nèi)霧化噴入LPS溶液100μL(1mg/mL);ITI組小鼠麻醉后氣管內(nèi)滴入LPS溶液100μL(1mg/mL);IPI組小鼠腹腔注射LPS溶液100μL(1mg/mL)。ITA組和ITI組各取3只小鼠用伊文斯藍溶液取代LPS溶液以顯示氣管內(nèi)霧化和滴入時藥物的肺內(nèi)分布。LPS給藥2h后麻醉并剪斷腹主動脈放血處死全部小鼠,充分暴露胸腔,分別取肺組織行干濕重比、HE染色及病理評分；ELISA檢測小鼠支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid, BALF)中TNF-α和IL-1p濃度；Real-time RT-PCR檢測小鼠肺組織TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平；Western Blot檢測小鼠肺組織IкB-α蛋白含量及IкB-α和NF-кBp65蛋白磷酸化水平。 2NBD預處理對LPS誘導ALI小鼠過度炎癥反應及氧化應激的影響 12周齡,SPF級雄性BLAB/c小鼠隨機分為對照組(control)、模型組(model)、NBD陰性對照組(N-NBD)、NBD低劑量組(S-NBD)、NBD中劑量組(M-NBD)和NBD高劑量組(L-NBD),每組18只。對照組小鼠腹腔注射0.1mL水合氯醛麻醉后氣管內(nèi)霧化噴入100μL空氣；模型組小鼠麻醉后氣管內(nèi)霧化LPS溶液100μL (1mg/mL); NBD陰性對照組及NBD低中高劑量組小鼠麻醉后分別經(jīng)氣管內(nèi)霧化噴入相應劑量的NBD陰性對照溶液及NBD溶液50μL,0.5h后再次經(jīng)氣管內(nèi)霧化LPS溶液50μL (2mg/mL), LPS給藥2h后麻醉并剪斷腹主動脈放血處死全部小鼠。充分暴露胸腔取小鼠全肺組織行病理切片、HE染色及病理評分,ELISA檢測小鼠BALF中TNF-α和IL-1β濃度；Real-time RT-PCR檢測肺組織TNF-α、IL-1β、NOX1、NOX2和NOX4mRNA轉(zhuǎn)錄水平；Western Blot檢測肺組織IкB-α、NOX1、NOX2、NOX4蛋白含量及IкB-α、NF-кB p65蛋白磷酸化水平；比色法檢測肺組織超氧化物歧化酶活力(Superoxide Dismutase, SOD)、總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity, T-AOC)和丙二醛(Malondialdehyde, MDA)濃度。 3NBD聯(lián)合PS預處理對LPS誘導ALI小鼠過度炎癥反應及信號通路的影響 12周齡,SPF級雄性BLAB/c小鼠隨機平均分為對照組(control)、模型組(model)、PS組、PS+(N-NBD)組、PS+NBD組和NBD組,每組12只。對照組及模型組小鼠造模方法同第二章；PS和NBD組小鼠麻醉后氣管內(nèi)霧化相應劑量的單藥PS和NBD50μL0.5h后,再次經(jīng)氣管內(nèi)霧化LPS溶液50μL(2mg/mL); PS+(N-NBD)和PS+NBD組小鼠麻醉后經(jīng)氣管內(nèi)霧化相應劑量的PS+(N-NBD)和PS+NBD混合制劑50μL0.5h后,再次經(jīng)氣管內(nèi)霧化LPS溶液50μL (2mg/mL)。 LPS給藥2h后麻醉并剪斷腹主動脈放血處死全部小鼠,ELISA檢測小鼠BALE中TNF-α和IL-1p濃度,Real-time RT-PCR檢測肺組織TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平,Western Blot檢測肺組織IкcB-α、NF-кB、P38MAPK, ERK1/2和JNK蛋白表達及磷酸化水平。 4統(tǒng)計學處理 應用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析,計量資料以均數(shù)±標準差(x±S)表示。所有數(shù)據(jù)均進行方差齊性檢驗,組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)。方差齊時多重比較采用LSD檢驗法,方差不齊時多重比較采用Dunnett's T3檢驗法,顯著性水準α取0.05,雙側(cè)。 結(jié)果 1LPS經(jīng)不同給藥方式致ALI小鼠模型的比較研究 1.1氣管內(nèi)霧化伊文斯藍溶液的小鼠肺組織藍染區(qū)域較分散,呈點狀或斑片狀分布于各肺葉。氣管內(nèi)滴入伊文斯藍溶液的小鼠肺組織藍染區(qū)域分布較集中,主要集中在主氣管兩側(cè),呈塊狀分布,部分標本的伊文斯藍溶液僅分布于個別肺葉,其余肺葉則未見藍染。 1.2各組小鼠肺組織濕/干重比例差異有統(tǒng)計學意義(F=39.512, P0.001)。ITA組、ITI組和IPI組肺濕/干重比例均顯著高于NC組(P均0.001),而ITA組、ITI組和IPI組之間差異無統(tǒng)計學意義(P均0.05)。 1.3各組小鼠肺組織病理評分差異有統(tǒng)計學意義(F=80.84,P0.001)。ITA組、ITI組和IPI組病理評分均顯著高于對照組(P均0.001),其中ITA組和ITI組均顯著高于IPI組(P=0.001和P=0.002),而ITA組和ITI組之間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.054)。NC組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰,肺泡壁薄,肺間質(zhì)無炎癥細胞浸潤。ITA組小鼠各肺葉均存在彌漫性的肺泡間隔增厚與肺泡壁破壞,肺間質(zhì)炎癥細胞浸潤與出血,血管床不同程度破壞。ITI組小鼠部分肺葉結(jié)構(gòu)破壞嚴重,部分肺葉結(jié)構(gòu)相對完整,肺葉之間病灶不均勻。IPI組小鼠在肺泡結(jié)構(gòu)、血管床破壞程度和炎癥細胞浸潤方面均較輕, 1.4各組小鼠BALF中TNF-a和IL-1β濃度差異有統(tǒng)計學意義(F=102.737,F=28.259,PD.001)。ITA組、ITI組和IPI組TNF-a和IL-1p濃度均較NC組增高,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001)。ITA組和ITI組TNF-a濃度均顯著高于IPI組(P=0.001),而ITA組和ITI組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.386)。ITA組IL-1β濃度顯著高于ITI組和IPI組(P=D.008和PD.001),ITI組又顯著高于IPI組(P=0.044)。 1.5各組小鼠肺組織TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異有統(tǒng)計學意義(F=86.498,F=129.033,P均0.001)。ITA組、ITI組和IPI組TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平均較NC組增高,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001)。ITA組TNF-α mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于ITI組和IPI組(P=0.016和P0.001),而ITI組又顯著高于IPI組(P=D.D2)。ITA組IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于ITI組和IPI組(P=0.02和P0.001),ITI組又顯著高于IPI組(P0.001)。 1.6各組小鼠肺組織IкB-α蛋白含量及IкB-α、NF-кB p65磷酸化水平差異有統(tǒng)計學意義(F=38.500,F=56.193,F=15.220,P均0.001)。ITA組、ITI組和IPI組IкB-α蛋白含量均較NC組減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001,P0.001和P=0.016)。ITA組和ITI組IкB-α磷酸化水平均較NC組顯著增加(P均0.001),而IPI組和NC組間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.526)。ITA組和ITI組NF-кBp65磷酸化水平均較NC組顯著增加(P0.001和P=0.002),而IPI組和NC組間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.164)。ITA組IкB-α蛋白含量均顯著低于ITI組和IPI組(P=0.023和P0.001),而ITI組又顯著低于IPI組(P=0.003)。ITA組IкB-α磷酸化水平顯著高于ITI組和IPI組(P=D.009和P0.001),ITI組又顯著高于IPI組(P0.001)。ITA組和ITI組肺組織NF-кBp65磷酸化水平均顯著高于IPI組(P=0.002和P=0.019),而ITA和ITI組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.138)。 2NBD預處理對LPS誘導ALI小鼠過度炎癥反應及氧化應激失衡的影響 2.1各組小鼠肺組織病理評分差異有統(tǒng)計學意義(F=69.594,P0.001)。LPS給藥2h后,模型組病理評分顯著高于對照組(P0.001)。給予NBD預處理0.5h,NBD低中高劑量組病理評分均較模型組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.019,P0.001和P0.001)。NBD中劑量組和高劑量組病理評分均顯著低于NBD低劑量組(P=0.038和P=0.004),而NBD高劑量組與中劑量組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.246)。對照組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰,肺泡壁薄,肺間質(zhì)無炎癥細胞浸潤。模型組和NBD陰性對照組小鼠各肺葉均存在彌漫性的肺泡間隔增厚、肺泡壁破壞以及肺泡塌陷,肺間質(zhì)炎癥細胞浸潤與出血,血管床不同程度破壞。給予低中高劑量NBD預處理0.5h,可以顯著減輕LPS誘導的肺組織病理損傷,并且NBD的肺組織保護作用呈現(xiàn)濃度依賴性增強。 2.2各組小鼠BALF中TNF-α和IL-1β濃度差異有統(tǒng)計學意義(F=104.414,F=110.934,P均0.001)。LPS給藥2h后,模型組TNF-α和IL-1β濃度均較對照組升高,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001)。給予NBD預處理0.5h, NBD低中高劑量組’TNF-α和IL-1p濃度均較模型組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001)。NBD低中高劑量組間TNF-α濃度呈濃度依賴性降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。NBD中劑量組和高劑量組IL-1β濃度均低于NBD低劑量組,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001),而NBD高劑量組與中劑量組相比無統(tǒng)計學差異(P=0.099)。 2.3各組小鼠肺組織TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異有統(tǒng)計學意義(F=118.309,F=129.174,P均0.001)。LPS給藥2h后,模型組TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平均較對照組升高,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001)。給予NBD預處理0.5h, NBD中劑量和高劑量組TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平均較模型組顯著降低(P均0.001)。NBD低中高劑量組間TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平呈濃度依賴性降低,差異有統(tǒng)計學意義(PD.05)。 2.4各組小鼠肺組織IкB-α蛋白含量及IкB-α、NF-кB p65蛋白磷酸化水平差異有統(tǒng)計學意義(F=84.342, F=222.636, F=247.138, P均0.001)。LPS給藥2h后,模型組IкB-α蛋白含量較對照組顯著減少(P0.001),而IкB-α和NF-кB p65磷酸化水平均較對照組顯著增加(P均D.001)。給予NBD預處理0.5h, NBD低中高劑量組IкB-α蛋白含量均較模型組增加,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001),而IкB-α和NF-кB p65磷酸化水平均較模型組減少,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001)。NBD中劑量組IкB-α蛋白含量較NBD低劑量組顯著增高(P=0.035),而NBD高劑量組與低中劑量組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P=0.628和P=0.085)。NBD低中高劑量組間肺組織IкB-α和NF-кBp65蛋白磷酸化水平呈濃度依賴性降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2.5各組小鼠肺組織SOD、T-AOC和MDA濃度差異有統(tǒng)計學意義(F=71.710,F=7.416,F=45.965,P均D.001)。LPS給藥2h后,模型組SOD和T-AOC濃度均較對照組顯著降低(P均0.001),而MDA濃度較對照組顯著增高(P均0.001)。給予NBD預處理0.5h,NBD中劑量組和高劑量組SOD和T-AOC濃度均較模型組顯著增高(P均0.01),而NBD低劑量組與模型組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P=0.236和P=0.165)。NBD低中高劑量組MDA濃度均較模型組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.01,P0.001和P0.001)。NBD中劑量組和高劑量組MDA濃度均較NBD低劑量組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001),而NBD中劑量和高劑量組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P=D.63)。 2.6各組小鼠肺組織NOX1、NOX2和NOX4mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異有統(tǒng)計學意義(F=79.146, F=22.826, F=55.446, P均D.001)。LPS給藥2h后,模型組NOX1、 NOX2和NOX4mRNA轉(zhuǎn)錄水平均較對照組顯著升高(P均D.001)。給予NBD預處理0.5h, NBD低中高劑量組NOX1、NOX2和NOX4mRNA轉(zhuǎn)錄水平均較模型組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。NBD中劑量組和高劑量組NOX1、 NOX2和NOX4mRNA轉(zhuǎn)錄水平均顯著低于NBD低劑量組(P均0.05),而NBD高劑量組與中劑量組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=D.334,P=0.911和P=0.119)。 2.7各組小鼠肺組織NOX1、NOX2和NOX4蛋白表達水平差異有統(tǒng)計學意義(F=137.291,F=8.256,F=162.843,P均D.D1)。LPS給藥2h后,模型組NOX1、 NOX2和NOX4蛋白表達水平均較對照組增加,差異有統(tǒng)計學意義(P=D.022、P0.001和P0.001)。給予NBD預處理0.5h,NBD中劑量組和高劑量組肺組織NOX1和NOX2蛋白表達水平均較模型組顯著減少(P均0.01),而NBD低劑量組與模型組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.111和P=0.123),NBD低中高劑量組NOX4蛋白表達水平均較模型組顯著減少(P均0.001)。NBD低中高劑量組間NOX1蛋白表達水平呈濃度依賴性降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。NBD高劑量組NOX2蛋白表達水平較NBD低劑量組顯著降低(P=D.006),而NBD中劑量與與低劑量組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.112)。 NBD中劑量組和高劑量組NOX4蛋白表達水平均較NBD低劑量組顯著降低(P均D.001),而NBD中劑量和高劑量組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P=D.142)。 3PS聯(lián)合NBD預處理對LPS誘導ALI小鼠過度炎癥反應的影響及機制研究 3.1各組小鼠BALF中TNF-α和IL-1p濃度差異有統(tǒng)計學意義(F=80.065,F=49.220,P均0.001)。LPS給藥2h后,模型組TNF-α和IL-1β濃度均較對照組顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.001)。PS組、NBD組和PS+NBD組TNF-α和IL-1β濃度均較模型組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。PS+NBD組TNF-α和IL-1β濃度均較PS組顯著降低(P0.001和P=0.002),而PS+NBD組與NBD組之間無統(tǒng)計學意義差異(P=0.606和P=0.544)。 3.2各組小鼠肺組織TNF-α和IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異有統(tǒng)計學意義(F=80.057,F=65.830,P均0.001)。LPS給藥2h后,模型組TNF-α和IL-1βmRNA轉(zhuǎn)錄水平較均較對照組顯著升高(P均0.001)。PS組、NBD組和PS+NBD組TNF-α和IL-1βmRNA轉(zhuǎn)錄水平均顯著低于模型組(P均0.001)。PS+NBD組TNF-α mRNA轉(zhuǎn)錄水平均較PS和NBD單藥組顯著降低(P0.001和P=D.002),而IL-1β mRNA轉(zhuǎn)錄水平僅較PS組顯著降低(P0.001),與NBD組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.111)。 3.3各組小鼠肺組織iкB-α蛋白含量及IкB-α、NF-кBp65蛋白磷酸化水平差異有統(tǒng)計學意義(F=49.981, F=35.166, F=25.220, P均0.001)。LPS給藥2h后,模型組IкB-α含量較對照組顯著減少(P0.001),而IкB-α和NF-кBp65磷酸化水平均較對照組顯著增加(P均0.001)。PS組、NBD組和PS+NBD組IкB-α含量均較模型組顯著增加(P均D.001),而IкB-α和NF-xBp65磷酸化水平均較模型組顯著降低(P均0.001)。PS+NBD組IKB-α含量較PS組顯著增加(P=0.021),而與NBD組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.26)。PS+NBD組IкB-α和NF-кBp65磷酸化水平均較PS和NBD組顯著降低(P均0.05),而PS組和NBD組之間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.953和P=0.849)。 3.4各組小鼠肺組織P38MAPK、ERK1/2和JNK蛋白磷酸化水平差異有統(tǒng)計學意義(F=36.678,F=6.659,F=6.056,P均0.001)。LPS給藥2h后,模型組P38MAPK、ErK1/2和JNK磷酸化水平均較對照組顯著增加(P均0.001)。PS組肺組織P38MAPK磷酸化水平較模型組顯著減少(P=0.011),而PS+NBD組和NBD組與模型組相比,差異均無統(tǒng)計學意義(P=0.946和P=0.253)。PS組ERK1/2磷酸化水平與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義(P=0.055),而PS+NBD組和NBD組均較模型組顯著降低(P=0.001和P=0.01)。PS組、NBD組和PS+NBD組JNK磷酸化水平均較模型組顯著降低(P=0.045,P=0.005和P=0.001),而PS組、NBD組和PS+NBD組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結(jié)論 1.與氣管內(nèi)滴入和腹腔注射相比,氣管內(nèi)霧化能使LPS更加均勻地分布于小鼠肺內(nèi),顯著增加LPS與肺組織的有效接觸面積,引起更強烈的炎癥放大反應,造成更嚴重的肺組織損傷,從而更接近ALI病理過程,而且氣管內(nèi)霧化LPS具有手術(shù)創(chuàng)傷小、操作簡便等特點,是復制ALI小鼠模型的優(yōu)選方案。 2.給予適當劑量的NBD預處理,可以有效抑制LPS誘導的ALI小鼠肺組織內(nèi)NF-кB信號通路的正反饋性放大,進而明顯減輕肺組織炎癥反應和氧化應激損傷,保護肺組織結(jié)構(gòu)細胞。 3.NBD聯(lián)合PS預處理,不僅可以顯著下調(diào)炎癥反應信號通路中MAPKs磷酸化水平,抑制NF-кB環(huán)路的正反饋性放大,減少TNF-α和IL-1β等促炎介質(zhì)表達,進而減輕肺組織炎癥損傷,而且外源性PS可以有效補充因過度炎癥反應和氧化應激而丟失的內(nèi)源性PS。二者聯(lián)合使用,具有協(xié)同抗炎效果。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R563.8

【參考文獻】

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本文編號：2053125