鈣庫操縱的鈣內(nèi)流和鈉鈣交換體在卡巴膽堿引起的氣管平滑肌收縮中的作用
本文選題:氣管平滑肌 + 鈉鈣交換體 ; 參考:《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文
【摘要】:背景氣管、支氣管平滑肌功能障礙引起的呼吸系統(tǒng)疾病是一類常見慢性疾病,近年來,患病率和死亡率呈逐年增加趨勢(shì),嚴(yán)重威脅人類健康。而引起平滑肌收縮最主要的因素是細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度方式包括胞外鈣內(nèi)流和胞內(nèi)鈣的釋放,鈣庫操縱的鈣內(nèi)流(store-operated Ca2+entry,SOCE),是介導(dǎo)Ca2+內(nèi)流的一種重要方式,由鈣庫操縱的鈣內(nèi)流通道(store-operated Ca2+channel,SOCC)介導(dǎo)。Orai1和基質(zhì)相互作用蛋白分子1(STIM1)是SOCC的兩個(gè)重要組成成分。Orai1是位于細(xì)胞膜上的四次跨膜蛋白,利用毒胡蘿卜素(Thapasigargin,TG)清空鈣庫引起鈣庫耗竭后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的鈣濃度感受器STIM1發(fā)生聚集,導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜與細(xì)胞膜靠近,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的STIM1通過與細(xì)胞膜上的Orai1通道蛋白相互作用,激發(fā)Orai1通道開放,介導(dǎo)外鈣內(nèi)流。鈉鈣交換體(sodium calcium exchanger,NCX)是廣泛分布于細(xì)胞質(zhì)膜、線粒體膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、分泌小泡膜等膜性結(jié)構(gòu)上的一種陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。鈉鈣交換體可以對(duì)胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度進(jìn)行快速精確的調(diào)節(jié),從而影響細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育等一系列生理活動(dòng)。氣管平滑肌舒縮在調(diào)節(jié)氣道直徑和呼吸功能中發(fā)揮重要作用,而SOCE和NCX在調(diào)節(jié)氣管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣濃度和收縮功能中有重要作用,但詳細(xì)機(jī)制仍未闡明清楚。本研究采用小鼠氣管為研究對(duì)象,分別用NCX的阻斷劑KB-R7943、Orai1的阻斷劑BTP2和L-型依賴的電壓依賴式鈣通道阻斷劑Nifedipine進(jìn)行處理,探究其內(nèi)在機(jī)制。目的本研究旨在探討鈣庫操縱鈣內(nèi)流(store-operated calcium entry,SOCE)和鈉鈣交換體(sodium calcium exchanger,NCX)在卡巴膽堿引起的氣管平滑肌收縮中的作用。方法1.離體氣管環(huán)的制備采用雄性清潔級(jí)C57小鼠,6~8周齡,體重為20~25 g。小鼠采用CO2窒息法處死,充分暴露頸部并盡快取出氣管,放入預(yù)先通入混合氣體(95%O2和5%CO2)的預(yù)冷Krebs液中。在顯微鏡下沿氣管縱軸快速而準(zhǔn)確的將氣管剪成長(zhǎng)度約2 mm的氣管環(huán)以備用。2.離體氣管張力實(shí)驗(yàn)在氣管張力實(shí)驗(yàn)浴槽中加入5 m L Krebs液,將制備好的氣管環(huán)小心穿入張力換能器的雙層掛鉤上,平衡30 min后開始實(shí)驗(yàn)。在SOCE引起的氣管收縮實(shí)驗(yàn)中,浴槽中加入無鈣Krebs液平衡10 min后,用1μmol/L卡巴膽堿和不同類型的阻斷劑分別處理10 min,最后加入2.5 mmol/L Ca Cl2,實(shí)驗(yàn)過程中采用BL-420生物采集系統(tǒng)記錄氣管環(huán)張力的變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(sx±)表示。并運(yùn)用Sigma Plot 12.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間資料采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。P㩳0.05認(rèn)為有差異并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.阻斷NCX顯著抑制SOCE引起的氣管平滑肌收縮;2.阻斷電壓依賴的鈣通道對(duì)SOCE引起的氣管平滑肌收縮無顯著影響;3.抑制Orai1通道顯著降低SOCE引起的氣管平滑肌收縮反應(yīng);4.阻斷NCX可顯著抑制卡巴膽堿引起的氣管平滑肌收縮反應(yīng);5.阻斷Orai1可顯著抑制卡巴膽堿引起的氣管平滑肌收縮反應(yīng);6.阻斷電壓依賴的鈣通道對(duì)卡巴膽堿引起的氣管平滑肌收縮無顯著影響;7.阻斷TRPC4通道可顯著抑制卡巴膽堿引起的氣管平滑肌收縮反應(yīng)。結(jié)論NCX和Orai1都參與介導(dǎo)卡巴膽堿引起的氣管平滑肌收縮,Orai1主要參與卡巴膽堿引起的起始階段的瞬時(shí)收縮,NCX主要參與卡巴膽堿引起的后期持續(xù)階段的收縮,二者共同參與介導(dǎo)卡巴膽堿引起的收縮。
[Abstract]:In order to study the effect of calcium influx in tracheal smooth muscle cells induced by Ca ~ ( 2 + channel , SOCE ) in tracheal smooth muscle cells . The tracheal smooth muscle contraction induced by carbachol was significantly inhibited in the experiment of tracheal contraction induced by carbachol . Conclusion NCX and Orai1 can significantly inhibit the contraction of tracheal smooth muscle caused by carbachol . Conclusion NCX and Oraigo can significantly inhibit the contraction of tracheal smooth muscle caused by carbachol .
【學(xué)位授予單位】:安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號(hào)】:R56
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,本文編號(hào):2003354
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