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白藜蘆醇對慢性哮喘模型小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響及其機(jī)制探討

發(fā)布時間:2018-05-28 13:36

  本文選題:白藜蘆醇 + 哮喘 ; 參考:《南京醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文


【摘要】:目的:觀察白藜蘆醇對慢性哮喘模型小鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響及其機(jī)制探討。方法:32只雌性BALB/c小鼠按隨機(jī)原則分成對照組、哮喘組、白藜蘆醇組和布地奈德組,每組8只。OVA致敏后,5%OVA霧化每周三次,每次30分鐘,直至第55天,白藜蘆醇(30mg/Kg)灌胃,每日一次,直至第55天,布地奈德混懸液每日一次霧化,直至第55天。末次激發(fā)24h后,肺組織病理切片行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察肺組織炎性細(xì)胞浸潤情況,AB-PAS染色觀察杯狀細(xì)胞增生情況,Masson三色染色觀察上皮下纖維化情況,肺組織進(jìn)行羥脯氨酸測定觀察肺組織膠原含量,用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法分別檢測4組小鼠血清總IgE和BALF中IL-4、IL-13的水平。免疫組化半定量法測定氣道壁膠原α-SMA、TGF-β1的表達(dá),實(shí)時熒光定量PCR法(real-time PCR)觀察TGF-β1、fibronectin和collagen-1mRNA的表達(dá),蛋白印跡法(Western blot)觀察肺組織TGF-β1、p-Smad3、Smad7的蛋白表達(dá)。結(jié)果:哮喘組小鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎性細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)高于對照組小鼠(P0.01),白藜蘆醇組和布地奈德組小鼠BALF中炎性細(xì)胞總數(shù)和EOS細(xì)胞數(shù)明顯降低,與哮喘組小鼠相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),白藜蘆醇和布地奈德組小鼠之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);哮喘組BALF中IL-4、IL-13和血清總IgE含量高于對照組(P0.01),白藜蘆醇組和布地奈德組BALF中IL-4、IL-13和血清總IgE含量較哮喘組均減低(P0.01);兩治療組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);哮喘組小鼠氣道PAS陽性上皮細(xì)胞數(shù)/支氣管上皮細(xì)胞數(shù)高于對照組小鼠(P0.01),白藜蘆醇組和布地奈德組小鼠氣道PAS陽性上皮細(xì)胞數(shù)/支氣管上皮細(xì)胞數(shù)低于哮喘組小鼠(P0.05);哮喘組小鼠支氣管Masson染色面積/基底膜周徑高于對照組小鼠(P0.01),白藜蘆醇組和布地奈德組干預(yù)后較哮喘組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);哮喘組小鼠肺組織羥脯氨酸含量高于對照組小鼠(P0.01),白藜蘆醇組和布地奈德組小鼠肺組織羥脯氨酸含量減低,與哮喘組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);哮喘組小鼠支氣管α-SMA陽性染色面積/支氣管基底膜周徑與正常組小鼠相比顯著增加P0.01),白藜蘆醇組和布地奈德組小鼠支氣管α-SMA陽性染色面積/支氣管基底膜周徑低于哮喘組小鼠(P0.01)。哮喘組小鼠肺組織TGF-β1、fibronectin和collagen-1mRNA表達(dá)水平高于對照組(P0.01),白藜蘆醇和布地奈德組小鼠肺組織上述各基因表達(dá)與哮喘組相比降低(P0.05)。哮喘組小鼠TGF-β1、p-Smad3蛋白表達(dá)較對照組明顯升高(P0.01),白藜蘆醇和布地奈德干預(yù)后其表達(dá)低于哮喘組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),總Smad3蛋白各組間未見明顯差異(P0.05);抑制性蛋白Smad7在哮喘組表達(dá)較對照組下降(P0.05),白藜蘆醇及布地奈德干預(yù)后下降減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);白藜蘆醇及布地奈德組間各蛋白比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:白藜蘆醇可在一定程度上抑制哮喘模型小鼠的氣道炎癥和氣道重塑,這種抑制作用可能是通過影響TGF-β1/Smad信號通路發(fā)揮作用的。
[Abstract]:Objective: To observe the effect and mechanism of resveratrol on airway inflammation and airway remodeling in mice with chronic asthma. Methods: 32 female BALB/c mice were divided into control groups according to random principles, asthma group, resveratrol group and budesonide group. After 8.OVA sensitization in each group, 5%OVA was atomized three times per week, 30 minutes each time, until fifty-fifth days, white. Veratride (30mg/Kg) was given to the stomach, once a day, until fifty-fifth days. The budesonide suspension was atomized once a day until the last fifty-fifth days. After the last excitation of 24h, the pathological sections of the lung tissue were stained with hematoxylin eosin (HE) staining to observe the infiltration of inflammatory cells in the lung tissue. AB-PAS staining was used to observe the proliferation of goblet cells, and Masson tricolor staining was used to observe the subcutaneous fibers. The collagen content of lung tissue was observed by hydroxyproline determination in lung tissue. The levels of IL-4 and IL-13 in total IgE and BALF of 4 groups of mice were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The expression of collagen alpha -SMA, TGF- beta 1 in the airway wall, TGF- beta 1, and TGF- beta 1 were observed by real time fluorescence quantitative PCR (real-time PCR), and fibro was observed by the enzyme linked immunosorbent assay. The expression of nectin and collagen-1mRNA and the expression of TGF- beta 1, p-Smad3 and Smad7 in lung tissue were observed by Western blot. Results: the total number of inflammatory cells and eosinophils (EOS) in the alveolar lavage fluid (BALF) of the asthmatic mice was higher than that of the control mice (P0.01). The total number of inflammatory cells in the resveratrol group and the budesonide group was in the BALF number. The number of EOS cells was significantly lower than that in the asthmatic mice (P0.05), and there was no significant difference between the resveratrol and budesonide mice (P0.05). The content of IL-4, IL-13 and serum total IgE in the BALF of the asthmatic group was higher than that of the control group (P0.01), and the IL-4, IL-13, and the serum total IgE in the resveratrol group and the budesonide group were contained in the group of the resveratrol group and the budesonide group. Compared with the asthma group (P0.01), there was no significant difference between the two treatment groups (P0.05). The number of PAS positive epithelial cells / bronchial epithelial cells in the airway of the asthmatic mice was higher than that of the control group (P0.01). The number of PAS positive epithelial cells in the resveratrol group and budesonide group was lower than that of the asthma group. Mice (P0.05); bronchial Masson staining area / basilar membrane diameter of asthmatic mice was higher than that of control group (P0.01). The prognosis of resveratrol group and budesonide group was significantly lower than that of asthma group (P0.01). The content of hydroxyproline in lung tissue of asthmatic mice was higher than that of control group (P0.01), resveratrol group and cloth ground The content of hydroxyproline in lung tissue of nide mice decreased, and the difference was statistically significant compared with that of the asthma group (P0.01). The bronchi positive staining area / bronchi basal membrane circumference of the bronchial tube in the asthmatic mice was significantly increased by P0.01 compared with the normal group, and the positive staining area / bronchi in the resveratrol group and the bronchoid group of the bronchi group in the bronchi group and the bronchode group. The basal membrane circumference of the basal membrane was lower than that of the asthma group (P0.01). The expression level of TGF- beta 1, fibronectin and collagen-1mRNA in the lung tissue of the asthmatic mice was higher than that of the control group (P0.01). The expression of the above genes in the lung tissues of the resveratrol and budesonide mice was lower than that of the asthma group (P0.05). The expression of TGF- beta 1 in the asthmatic group and the expression of p-Smad3 protein in the asthmatic group was significantly higher than that of the control group. The expression of resveratrol and budesonide was lower than that of the asthma group (P0.01). The difference was statistically significant (P0.05), and there was no significant difference between the total Smad3 protein groups (P0.05), and the expression of inhibitory protein Smad7 in the asthma group was lower than that in the control group (P0.05), and the decrease of resveratrol and budesonide decreased significantly (P0. 05) there was no significant difference in the proteins between resveratrol and budesonide group (P0.05). Conclusion: resveratrol can inhibit airway inflammation and airway remodeling in asthma model mice to some extent. This inhibitory effect may be mediated by the effect of the TGF- beta 1/Smad signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】:南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號】:R562.25

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