發(fā)布時(shí)間：2018-05-23 20:18

  本文選題：COPD + 依達(dá)拉奉　； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：糖皮質(zhì)激素廣泛用于慢性炎癥、自身免疫性疾病和白血病等腫瘤的治療,發(fā)揮其抗炎、抗免疫等作用,但并不是對(duì)所有患者均有效[1]。在臨床中,糖皮質(zhì)激素在慢性阻塞性肺疾(COPD)和哮喘治療中起著重要的作用,一部分人對(duì)激素不敏感或抵抗,不利于疾病的治療,難以控制疾病進(jìn)展,這些患者體內(nèi)多存在糖皮質(zhì)激素抵抗[2]。研究證實(shí)COPD與支氣管哮喘都存在持續(xù)的慢性氣道炎癥,但是兩者氣道炎癥的機(jī)制有很大差異,例如在氣道炎癥細(xì)胞中,COPD氣道炎癥多是主要以中性粒細(xì)胞為主,而哮喘則是多以嗜酸性粒細(xì)胞為主[3,4]。中性粒細(xì)胞是COPD發(fā)病中關(guān)鍵的效應(yīng)細(xì)胞。它們?cè)贑OPD肺中的數(shù)量顯著增加,與疾病嚴(yán)重程度相關(guān),在疾病進(jìn)展過程中參與氣流受限,慢性支氣管炎和肺氣腫病理學(xué)的發(fā)生[4,5]。COPD患者的中性粒細(xì)胞自發(fā)地釋放大量的活性氧簇(ROS),當(dāng)中性粒細(xì)胞通過肺組織遷移時(shí),在遷徙移動(dòng)通過機(jī)體內(nèi)復(fù)雜的組織時(shí)依次釋放蛋白酶和ROS[6]。另外到處的遷移可能導(dǎo)致更多范圍的損傷,同時(shí)刺激它們的脫顆粒,脫顆粒產(chǎn)物包括促炎細(xì)胞因子,例如IL-8,TNF-α,ROS和蛋白酶(例如中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶,在COPD患者痰中增加,氣道結(jié)構(gòu)破壞),增加了肺組織中更廣泛區(qū)域的炎性反應(yīng)和蛋白酶激活。另外COPD發(fā)病機(jī)制中氧化應(yīng)激可以導(dǎo)致ROS的升高,體內(nèi)過多的,ROS除了直接導(dǎo)致肺損傷外,還可以激活炎癥細(xì)胞釋放炎癥因子,導(dǎo)致中性粒細(xì)胞的激活與聚集,兩者可相互促進(jìn),從而惡性循環(huán),增加對(duì)肺組織的破環(huán)[7-9]。有研究表明[10],氧化應(yīng)激可導(dǎo)致過體內(nèi)亞硝過氧化物的形成,引起組蛋白去乙�；�2(HDAC2)上的酪氨酸殘基被硝化,導(dǎo)致其失活,泛素化和降解;另外,氧化應(yīng)激產(chǎn)物可以激活磷酸肌醇-3-激酶β(PI3Kβ)/蛋白激酶B(AKT)信號(hào)通路,導(dǎo)致HDAC2的磷酸化和失活,無論那種情況導(dǎo)致的HDAC2活性下降,都可以激活NF-k B,觸發(fā)炎癥開關(guān),引起Th17分泌IL-17,IL-17刺激氣道上皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-8,引起中性粒細(xì)胞的募集,繼續(xù)引起炎癥因子的釋放,例如TNF-α,炎癥細(xì)胞的激活,引起NF-k B的活化,這是一個(gè)正反饋調(diào)節(jié),中性粒細(xì)胞大量聚集在氣道和肺組織中,從而導(dǎo)致糖皮質(zhì)激素抵抗[11,12]。以上表明氧化應(yīng)激引起氣道中性粒細(xì)胞募集可能是糖皮質(zhì)激素抵抗的重要機(jī)制,并在COPD疾病發(fā)展中持續(xù)增加糖皮質(zhì)激素的抵抗[1,13]。依達(dá)拉奉是臨床使用的新型強(qiáng)氧化劑,具有強(qiáng)大的抗氧化作用,目前臨床主要應(yīng)用于急性腦梗塞的治療,也有應(yīng)用于百草枯中毒、急性肺損傷等治療中[13,14]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[15],依達(dá)拉奉能夠改善微循環(huán)、保護(hù)氧化失衡的細(xì)胞及抑制溶酶體的釋放等效果。本論文旨在探討依達(dá)拉奉對(duì)COPD大鼠的氧化應(yīng)激作用,通過抗氧化應(yīng)激改善由于肺部中性粒細(xì)胞募集導(dǎo)致的糖皮質(zhì)激素抵抗的影響及其機(jī)制。依達(dá)拉奉能否通過上述抗氧化作用調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞募集,從而改善激素抵抗,目前國內(nèi)外暫無類似研究。材料與方法實(shí)驗(yàn)用健康雄性SD大鼠50只,體重200±20g。隨機(jī)分為健康空白對(duì)照組(10只)、模型組(40只)。模型組:采用煙熏聯(lián)合氣道內(nèi)滴入脂多糖(LPS)的方法建立COPD大鼠模型,造模時(shí)間60天。每隔14天大鼠鼻滴LPS一次,每次200μL,其他時(shí)間在自制封閉式紙箱(50cm*40cm*30cm)內(nèi)煙熏。模型構(gòu)建成功后,將模型組隨機(jī)分為COPD組,依達(dá)拉奉組,布地奈德組,聯(lián)合干預(yù)組,每組10只。COPD組:開始給予生理鹽水腹腔注射,1次/日,2ml/只,共14天。依達(dá)拉奉組:腹腔注射依達(dá)拉奉,1次/日,0.2mg/100g,共14天。布地奈德組:霧化吸入布地奈德,1次/日,1mg/只,共14天。聯(lián)合干預(yù)組:給予依達(dá)拉奉腹腔注射聯(lián)合布地奈德霧化吸入,劑量及時(shí)間同上。干預(yù)14天后檢測(cè)肺功能,留取血液標(biāo)本及肺泡灌洗液,測(cè)定血液中白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),測(cè)定血清中MDA、SOD含量,使用ELISA法檢測(cè)血清及肺泡灌洗液中IL-8、IL-17、TNF-α、NF-?B的水平;解剖大鼠后留取肺組織,行HE染色后觀察肺組織病理改變。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:所有獲得的數(shù)據(jù)均采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)進(jìn)行描述,兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn),多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析,另外相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果1各組大鼠肺組織病理學(xué)改變與空白組對(duì)比,COPD組大鼠肺組織基本結(jié)構(gòu)正常,氣管及支氣管粘膜上皮細(xì)胞腫脹、紊亂、脫落、減少,終末小氣道可見黏液栓及大量炎性細(xì)胞浸潤,支氣管平滑肌增厚,肺泡壁變薄、斷裂,肺泡膨大,多個(gè)肺泡腔增大、相互融甚至破裂融合成肺大泡。這些氣管及肺組織病理學(xué)變化與COPD患者的基本一致。布地奈德組、依達(dá)拉奉組、聯(lián)合干預(yù)組的大鼠肺組織破壞程度較COPD組輕,其中聯(lián)合干預(yù)組破壞最輕。2各組大鼠肺功能改變COPD組大鼠,FEV0.3/FVC、PEF比空白組降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);依達(dá)拉奉組、布地奈德組FEV0.3/FVC、PEF均高于COPD組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);聯(lián)合干預(yù)組FEV0.3/FVC、PEF明顯高于COPD組、布地奈德組,依達(dá)拉奉組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3大鼠動(dòng)脈血及肺泡灌洗液中白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞水平COPD組動(dòng)脈血及肺泡灌洗液中的白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯高于空白組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);布地奈德組血清中白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于COPD組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);依達(dá)拉奉組動(dòng)脈血及肺泡灌洗液白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于COPD組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),聯(lián)合干預(yù)組動(dòng)脈血及肺泡灌洗液中白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于COPD組、布地奈德中、依達(dá)拉奉組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4血清中MDA、SOD含量COPD組中血清MDA水平明顯高于空白組,SOD的水平低于空白組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);布地奈德組血清中MDA的水平明顯低于COPD組,SOD水平高于COPD組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);依達(dá)拉奉組血清MDA的水平明顯低于COPD組,SOD水平高于COPD組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),聯(lián)合干預(yù)組血清MDA、SOD的水平明顯低于COPD組、布地奈德中、依達(dá)拉奉組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5各組中血清及肺泡灌洗液中IL-8、IL-17、TNF-α、NF-?b的水平COPD組血清IL-8、IL-17、TNF-α、NF-?B的水平明顯高于空白組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);布地奈德組血清中IL-8、IL-17、TNF-α、NF-?B的水平明顯低于COPD組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);依達(dá)拉奉組血清IL-8、IL-17、TNF-α、NF-?B的水平低于COPD組,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),聯(lián)合干預(yù)組血清IL-8、IL-17、TNF-α、NF-?B的水平明顯低于COPD組、布地奈德中、依達(dá)拉奉組,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6血清與肺泡灌洗液中IL-17、IL-8、NF-?B相關(guān)性分析大鼠血清中IL-17、IL-8、TN-kB與肺泡灌洗液中相對(duì)應(yīng)的炎癥因子呈正相關(guān),分別為r=0.942(P0.05),r=0.912(P0.05),r=0.922(P0.05);大鼠血清中IL-17與肺泡灌洗液中IL-8、NF-k B呈正相關(guān),分別為r=0.725(P0.05),r=0.776(P0.05);大鼠血清中IL-18與肺泡灌洗液中IL-17、NF-k B呈正相關(guān),分別為r=0.735(P0.05),r=0.801(P0.05);大鼠血清中NF-k B與肺泡灌洗液中IL-17、IL-8呈正相關(guān),分別為r=0.724(P0.05),r=0.768(P0.05)。7血清(B)、肺泡灌洗液(F)中IL-17、IL-8、NF-?B與血清中MDA、SOD的相關(guān)性分析大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-17與MDA水平呈正相關(guān),分別為rB=0.642(P0.05),rF=0.675(P0.05);大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-8與MDA水平呈正相關(guān),分別為rB=0.475(P0.05),rF=0.486(P0.05);大鼠血清及肺泡灌洗液中TN-k B與MDA水平呈正相關(guān),分別為rB=0.365(P0.05),rF=0.387(P0.05);大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-17與SOD水平呈負(fù)相關(guān),分別為rB=-0.425(P0.05),rF=-0.457(P0.05);大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-8與SOD水平呈負(fù)相關(guān),分別為rB=-0.645(P0.05),rF=-0.682(P0.05);大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-8與SOD水平呈負(fù)相關(guān),分別為rB=-0.376(P0.05),rF=-0.396(P0.05)。結(jié)論1.COPD大鼠模型血液及肺泡灌洗液中的IL-8、NF-k B、中性粒細(xì)胞水平升高,存在肺部炎癥損傷;SOD水平降低,MDA水平升高,存在過度氧化;FEV0.3/FVC降低,COPD大鼠有氣流受限。2.布地奈德組中血液及肺泡灌洗液中的IL-17、中性粒細(xì)胞較COPD大鼠降低,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,存在中性粒細(xì)胞募集引起的糖皮質(zhì)激素的抵抗。3.依達(dá)拉奉可以降低COPD大鼠體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平。4.依達(dá)拉奉聯(lián)合布地奈德可能通過抗氧化應(yīng)激途徑,抑制NF-k B的激活,進(jìn)而降低IL-17及中性粒細(xì)胞水平,改善大鼠糖皮質(zhì)激素抵抗。
[Abstract]:The glucocorticoid is widely used in the treatment of chronic inflammation , autoimmune diseases and leukemia , and exerts its anti - inflammatory and anti - immune functions , but is not effective for all patients . In clinic , glucocorticoid plays an important role in the treatment of chronic obstructive pulmonary disease ( COPD ) and asthma , and some people are not sensitive or resistant to hormones and are not conducive to the treatment of diseases . It is difficult to control the progression of disease . There are many glucocorticoid resistance in these patients . The study confirms that there is persistent chronic airway inflammation in COPD and bronchial asthma , but there is a great difference in the mechanism of airway inflammation , for example , in airway inflammation cells , the airway inflammation of COPD is mainly neutrophils , while asthma is the key effector cell in the pathogenesis of COPD . In addition , oxidative stress can activate inflammatory cytokines such as IL - 8 , TNF - 偽 , ROS and protease ( e.g . , neutrophil elastase , increase in sputum of COPD patients , damage to airway structure ) and increase inflammatory response and protease activation . The rats were randomly divided into two groups : control group ( 10 rats ) , model group ( 40 rats ) . The model group was randomly divided into two groups : group of healthy control group ( 10 rats ) , model group ( 40 ) . The levels of MDA and SOD in patients with COPD were significantly lower than those in COPD group ( P0.05 ) . The levels of MDA and SOD in the group were significantly lower than those in COPD group ( P0.05 ) . The levels of IL - 8 , IL - 17 , TNF - 偽 and NF - 魏B in serum and alveolar lavage fluid were significantly lower than those in COPD group ( P0.05 ) . The levels of IL - 8 , IL - 17 , TNF - 偽 and NF - 魏B in serum and alveolar lavage fluid were significantly lower than those in COPD group ( P0.05 ) . The levels of IL - 8 , IL - 8 , IL - 8 , NF - 魏B and MDA in serum and alveolar lavage fluid of rats were positively correlated with levels of IL - 17 and MDA in serum and alveolar lavage fluid ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R563.9

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