本文選題：胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素 + 胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素受體��； 參考：《中國(guó)病理生理雜志》2014年11期

【摘要】：目的:研究結(jié)核分枝桿菌抗原85B(Ag85B)慢病毒對(duì)正常人支氣管上皮細(xì)胞(NHBEC)表達(dá)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受體TSLPR的影響,探究Ag85B抑制哮喘氣道炎癥的機(jī)制。方法:將Ag85B基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞,構(gòu)建攜帶Ag85B和EGFP報(bào)告基因的慢病毒載體p LVXIRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒)。用鑒定后的Ag85B慢病毒感染HEK293細(xì)胞,計(jì)算滴度并觀察感染效率。利用Lipofectamine? 2000使Ag85B慢病毒感染體外培養(yǎng)NHBEC,設(shè)立空病毒感染和空白對(duì)照組。Real-time PCR和Western blotting檢測(cè)Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:成功構(gòu)建Ag85B慢病毒感染NHBEC體系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,熒光顯微鏡下可見(jiàn)強(qiáng)綠色熒光蛋白表達(dá),細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,病毒滴度為2×1011TU/L,感染效率達(dá)到90%以上。Real-time PCR和Western blotting結(jié)果顯示Ag85B慢病毒成功感染NHBEC,可見(jiàn)相應(yīng)Ag85B mRNA和蛋白表達(dá)。與空病毒感染和空白對(duì)照組比較,Ag85B慢病毒感染組TSLP mRNA表達(dá)有下降趨勢(shì),TSLPR mRNA與TSLP和TSLPR的蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P0.05)。結(jié)論:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表達(dá),提示Ag85B可能通過(guò)靶向阻滯TSLP-TSLPR途徑抑制哮喘氣道炎癥。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of mycobacterium tuberculosis antigen 85BnAg85B) lentivirus on the expression of thymic stromal lymphopoietin (TSLP) and its receptor TSLPR in normal human bronchial epithelial cells (NHBECs), and to explore the mechanism of Ag85B inhibiting airway inflammation in asthma. Methods: the recombinant plasmid of Ag85B gene was transferred into 293T cells to construct lentivirus vector p LVXIRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B lentivirus carrying Ag85B and EGFP reporter genes. HEK293 cells were infected with identified Ag85B lentivirus, the titer was calculated and the infection efficiency was observed. Ag85B lentivirus was infected with Lipofectamine? 2000 in vitro. Empty virus infection and blank control group. Real-time PCR and Western blotting were used to detect the expression of Ag85BtSLP, TSLPR mRNA and protein. Results: the Ag85B lentivirus infected NHBEC system was successfully constructed. After 48 h of NHBEC infection, strong green fluorescent protein expression was observed under fluorescence microscope, and the cells grew well. The titer of the virus was 2 脳 1011TU / L, and the infection efficiency was over 90%. Real-time PCR and Western blotting showed that Ag85B lentivirus was successfully infected with NHBECs, and the corresponding Ag85B mRNA and protein expression could be seen. Compared with empty virus infection and blank control group, the expression of TSLP mRNA in Ag85B lentivirus infection group showed a downward trend. The protein expression levels of TSLPR mRNA, TSLP and TSLPR were significantly decreased in Ag85B lentivirus infection group. Conclusion NHBEC infection with NHBEC can inhibit the expression of TSLP and TSLPR in NHBEC, suggesting that Ag85B may inhibit airway inflammation of asthma by blocking TSLP-TSLPR pathway.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院;廣東省人民醫(yī)院 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院呼吸內(nèi)科;廣東省人民醫(yī)院 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)研究中心;
【基金】：廣州市科技計(jì)劃(No.2014J4100040) 廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.S2011010003664)
【分類(lèi)號(hào)】：R562.2

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1916494