本文選題：金黃色葡萄球菌 + Panton-Valetine�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：金黃色葡萄球菌是引起人類各種感染性疾病的重要病原菌，攜帶P-V殺白細(xì)胞素(Panton-Valentine leukocidin, PVL)基因的金葡菌致病性增強(qiáng)，分布更廣，可引起社區(qū)人群的嚴(yán)重感染。大量臨床流行病學(xué)資料都強(qiáng)烈提示，PVL是金黃色葡萄球菌所致壞死性感染的重要毒力因素，但其致病機(jī)制尚不清楚。本課題通過體內(nèi)試驗(yàn)觀察重組PVL（rPVL）引起兔肺炎性損傷的變化，探討多形核粒細(xì)胞(PMNs)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）和細(xì)胞因子在肺炎癥性損傷中的作用，為闡釋PVL的致病機(jī)制，尋求PVL相關(guān)肺炎癥性損傷治療方法提供新思路。 方法：（1）動(dòng)物模型的建立：取45只新西蘭大白兔隨機(jī)分為3組，分別為正常對照組、rPVL組和VCR+rPVL組（實(shí)驗(yàn)前用長春新堿預(yù)處理），每組15只。正常對照組使用PBS灌肺，其它兩組均用rPVL灌肺。（2）BALF中PMNs計(jì)數(shù)、凋亡/壞死、ROS、LDH和LPI檢測：造模后9h，采集支氣管肺泡灌洗液（BALF），計(jì)數(shù)BALF中PMNs，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測BALF中PMNs的凋亡/壞死率和活性氧（ROS）自由基釋放量，比色法檢測BALF上清中乳酸脫氫酶（LDH）含量，BCA法檢測肺通透指數(shù)（LPI）。（3）肺組織濕干比及病理檢測：造模后9h，收集肺組織檢測濕重/干重比，并進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色。（4）肺組織細(xì)胞因子和NF-κB檢測：分別于造模后3h、6h和9h收集肺組織，每個(gè)時(shí)間段5只，ELISA方法檢測肺組織勻漿上清中IL-6、IL-8、TNF-α和IL-10含量變化，免疫組織化學(xué)和Western blotting方法檢測肺組織NF-κB p65蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：（1）與正常對照組比較，rPVL組BALF中PMNs數(shù)量顯著增高，為(3.01±0.02)×106/ml vs（0.57±0.01)×106/ml；BALF中PMNs以晚期凋亡為主，晚期凋亡率顯著增高，為（63.56±3.53）%vs（0.95±0.33）%；PMNs釋放ROS增多，，平均熒光強(qiáng)度（MFI）為（1.56±0.39）vs（0.41±0.03）；LDH含量和LPI均顯著增高。VCR+rPVL組BALF中各項(xiàng)炎癥指標(biāo)均無明顯增高。（2）與正常對照組比較，rPVL組肺濕重/干重比顯著增高，為（6.45±0.35）vs（3.51±0.17），肺組織病理檢查顯示有彌漫性炎性細(xì)胞浸潤、出血、水腫等。VCR+rPVL組肺組織濕重/干重比無明顯增高，病理檢查未見明顯炎性變化。（3）rPVL組肺組織勻漿上清中IL-6、IL-8、TNF-α含量逐漸升高，IL-10含量于9h開始升高。VCR+rPVL組各種細(xì)胞因子含量均無明顯升高。免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)果顯示，rPVL組NF-κBp65被激活轉(zhuǎn)入核內(nèi)，染色以核明顯，且呈時(shí)間依賴性。VCR+rPVL組胞核中極少見或沒有陽性免疫反應(yīng)物質(zhì)。Western blotting方法檢測結(jié)果表明，rPVL組肺組織細(xì)胞核內(nèi)NF-κBp65蛋白表達(dá)明顯增加，且具有時(shí)間依賴性。 結(jié)論：（1）本課題通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)rPVL可以不依賴于細(xì)菌的生存和繁殖，單獨(dú)引起肺組織炎癥性損傷。（2）rPVL引起肺炎癥性損傷依賴PMNs的招募和聚集，繼而壞死，釋放細(xì)胞毒素顆粒內(nèi)容物和通過呼吸爆發(fā)釋放活性氧代謝產(chǎn)物，引起肺組織損傷。（3）rPVL感染后，肺組織表現(xiàn)有NF-κB持續(xù)活化，促炎因子IL-6、IL-8、TNF-α含量逐漸升高，后期伴有抑炎因子IL-10升高。推測rPVL可能通過激活NF-κB，誘導(dǎo)促炎因子產(chǎn)生，促發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)，引起肺組織損傷。
[Abstract]:Objective : Staphylococcus aureus is one of the most important pathogens causing various infectious diseases in human beings .

Methods : ( 1 ) Establishment of animal model : 45 New Zealand rabbits were randomly divided into three groups : normal control group , rPVL group and VCR + rPVL group ( pretreated with vinblastine before experiment ) .

Results : ( 1 ) Compared with the control group , the number of PMNs in BALF of rPVL group was significantly increased , ( 3.01 鹵 0.02 ) 脳 106 / ml vs ( 0.57 鹵 0.01 ) 脳 106 / ml ;
In the BALF , PMNs were mainly in the late stage and the apoptosis rate was significantly higher in the late stage , ( 63.56 鹵 3.53 ) % vs ( 0.95 鹵 0.33 ) % .
The mean fluorescence intensity ( MFI ) of PMNs was ( 1 . 56 鹵 0.39 ) vs ( 0.41 鹵 0.03 ) .
The levels of IL - 6 , IL - 8 , TNF - 偽 in the lung tissues of the patients with VCR + rPVL were significantly higher than those in the normal control group . The results showed that the levels of IL - 6 , IL - 8 and TNF - 偽 in the lung tissues of the rPVL group were significantly higher than those in the normal control group .

Conclusion : ( 1 ) In vivo experiments , rPVL can not depend on the survival and reproduction of bacteria , which can cause inflammatory injury of lung tissue . ( 2 ) The pulmonary inflammatory injury depends on recruitment and aggregation of PMNs , then necrosis , release of cytotoxic granule contents and release of active oxygen metabolites through respiratory burst .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R563.8

【參考文獻(xiàn)】

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1 李洪霞,張進(jìn)川,趙亞力,劉長庭;急性肺損傷大鼠TNF-α、IL-1β、IL-1ra mRNA的表達(dá)及藥物干預(yù)[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2005年04期

2 方偉,陳翠菊;中性粒細(xì)胞與急性呼吸窘迫綜合征[J];臨床薈萃;2004年08期

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1 常文嬌;金黃色葡萄球菌PV-殺白細(xì)胞素（PVL）對多形核粒細(xì)胞的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

本文編號：1875373