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法舒地爾對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響

發(fā)布時(shí)間:2016-11-23 02:46

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《蚌埠醫(yī)學(xué)院》 2015年

法舒地爾對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響

王盼  

【摘要】:目的:觀察法舒地爾對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。方法:1.用0.1%I型膠原酶消化分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,加入ECM完全培養(yǎng)基中培養(yǎng),用胰蛋白酶進(jìn)行消化傳代培養(yǎng),用倒置顯微鏡對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀察和免疫組化鑒定。2.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECs隨機(jī)分為3組:對(duì)照組(加入內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基)、LPS組(加入0.1ug/ml LPS)、法舒地爾組(3.275 ug/ml的法舒地爾+0.1ug/ml LPS)。3.Western-blot檢測(cè)Rho A、ROCK2、p-ERM蛋白表達(dá)情況,熒光定量PCR檢測(cè)Rho A、ROCK2、p-Ezr m RNA表達(dá)。4.激光共聚顯微鏡觀察細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白F-actin的分布變化。結(jié)果:1.原代培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞在接種后24h后完全貼壁生長(zhǎng),第3天融合呈鋪路石樣鑲嵌排列,免疫組化見內(nèi)皮細(xì)胞中胞漿中第VIII因子相關(guān)抗原呈陽性反應(yīng),證實(shí)為內(nèi)皮細(xì)胞。2.與對(duì)照組相比,LPS組RhoA、ROCK2和p-ERM蛋白及基因水平顯著升高(P0.01);與模型組相比,Fasudil組中ROCK2和p-ERM顯著降低(P0.01),Rho A沒有明顯差異(P0.05)。LPS誘導(dǎo)了細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白F-act-in的分布變化,法舒地爾能夠抑制這種改變。結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)成功分離和培養(yǎng)原代HUVECs。2.Rho/ROCK/ERM通路在脂多糖誘導(dǎo)HUVECs細(xì)胞骨架改變中起重要作用。3.法舒地爾可拮抗LPS誘導(dǎo)的骨架蛋白重排等HUVECs損傷,可能與通過抑制Rho/ROCK信號(hào)通路的活化有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R563.8
【目錄】:

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  本文關(guān)鍵詞:法舒地爾對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



本文編號(hào):187265

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