本文選題：日本血吸蟲 + 過(guò)敏性哮喘　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:探討過(guò)繼轉(zhuǎn)移日本血吸蟲感染鼠樹突狀細(xì)胞通過(guò)對(duì)白介素-13細(xì)胞因子的調(diào)控而抑制過(guò)敏性哮喘黏液分泌的作用機(jī)制。方法:取10只正常對(duì)照小鼠和10只日本血吸蟲(SJ)感染小鼠,用于分離DC。實(shí)驗(yàn)分正常組(control)、日本血吸蟲感染組(SJ)、OVA組(OVA誘發(fā)哮喘組),SJ+OVA組(過(guò)繼轉(zhuǎn)移日本血吸蟲感染鼠DC+OVA誘發(fā)哮喘組),每組各6只小鼠(隨機(jī)分組)。1.體內(nèi)SJ感染鼠模型的建立,采用MACS磁珠分選方法從SJ感染小鼠及對(duì)照小鼠脾臟中提取DC,分別經(jīng)尾靜脈過(guò)繼轉(zhuǎn)移給BALB/C小鼠,并用OVA誘發(fā)哮喘,4周后處死小鼠。2.肺組織提取,制作病理切片,以HE染色及PAS染色方法以及免疫等方熒光染色法檢測(cè)肺組織病理變化及相關(guān)蛋白表達(dá)情況。3.肺組織總RNA提取。采用qRT-PCR檢測(cè)各組白介素-13 mRNA水平以及蛋白水平在肺組織中的表達(dá)情況。4.脾細(xì)胞提取,用ELISA方法檢測(cè)脾細(xì)胞上清液中白介素-13水平。5.體外實(shí)驗(yàn),細(xì)胞提取共培養(yǎng)。處死小鼠,取小鼠股骨,收集DC細(xì)胞。取小鼠脾臟,制備單個(gè)脾細(xì)胞懸液,用MS柱收集CD4~+T細(xì)胞。建立DC與CD4~+T細(xì)胞共培養(yǎng),提取DC與CD4~+T細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)胞中總RNA,測(cè)定總RNA質(zhì)量及濃度,檢測(cè)白介素-13的表達(dá)。結(jié)果:1.在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,觀察單純OVA誘發(fā)哮喘組和SJ+OVA組肺部病理切片發(fā)現(xiàn),與單純對(duì)照組相比,OVA誘發(fā)哮喘組和SJ+OVA組肺部均有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),證明OVA誘導(dǎo)組誘導(dǎo)成功。但與單純OVA誘發(fā)哮喘組相比,SJ+OVA組肺部支氣管管壁完整,肺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕,且支氣管管壁增厚不明顯,管腔內(nèi)黏液減少。比較說(shuō)明日本血吸蟲感染鼠樹突狀細(xì)胞過(guò)繼轉(zhuǎn)移后能抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn),同時(shí)能抑制黏液分泌。2.對(duì)過(guò)繼轉(zhuǎn)移組與單純哮喘組白介素-13mRNA以及黏液蛋基因表達(dá)水平比較發(fā)現(xiàn),與健康對(duì)照組和SJ組相比,SJ+OVA組白介素-13水平及黏液蛋白基因表達(dá)水平均明顯升高;但與OVA誘導(dǎo)組相比,SJ+OVA組白介素-13水平及黏液蛋基因表達(dá)明顯受到抑制(P0.05)。進(jìn)一步用免疫熒光染色方法檢測(cè)白介素-13與氣道黏液蛋白MUC(MUC為黏液蛋白,我們測(cè)定重要的黏液蛋白之一-MUC5AC)結(jié)果顯示:與OVA單純誘導(dǎo)組相比,SJDC過(guò)繼轉(zhuǎn)移組白介素-13及氣道黏液蛋白表達(dá)明顯受到抑制。3.白介素-13表達(dá)細(xì)胞的鑒定實(shí)驗(yàn)中,利用SEA刺激細(xì)胞(模擬體內(nèi)SJ感染刺激),結(jié)果顯示,LPS刺激組與SEA刺激組相比,白介素-13 mRNA表達(dá)升高,但相對(duì)于GAPDH表達(dá)量過(guò)低,提示DC不是白介素-13最主要的誘導(dǎo)細(xì)胞。采取免疫熒光染色方法進(jìn)一步鑒定白介素-13的表達(dá)細(xì)胞(OVA單純哮喘肺組織),白介素-13與CD4~+T細(xì)胞出現(xiàn)共同表達(dá)區(qū)域,提示在該模型中CD4~+T細(xì)胞為白介素-13的主要表達(dá)細(xì)胞。4.對(duì)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白介素-13水平檢測(cè)顯示:與Control組相比,OVA組與SJ+OVA組白介素-13均顯著升高。與OVA組相比,SJ+OVA組白介素-13水平明顯受抑制,且有顯著性差異,與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)肺部組織白介素-13的變化。5.體外細(xì)胞共培養(yǎng)結(jié)果顯示:DC經(jīng)SEA處理后與OVA誘導(dǎo)鼠中提取的CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)。共培養(yǎng)后48 h及72 h時(shí),SEA處理組DC與對(duì)照組(未經(jīng)處理DC)和LPS刺激組相比,白介素-13的表達(dá)受抑制,提示SEA處理后的DC可抑制CD4~+T細(xì)胞的白介素-13的表達(dá)。結(jié)論:1.SJDC過(guò)繼轉(zhuǎn)移后不僅抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn),同時(shí)對(duì)黏液分泌具有一定的抑制作用。2.DC不是白介素-13最主要的誘導(dǎo)細(xì)胞,在該模型中CD4~+T細(xì)胞為白介素-13的主要表達(dá)細(xì)胞。3.SEA處理后的DC可抑制CD4~+T細(xì)胞的白介素-13的表達(dá)。
[Abstract]:Objective : To study the mechanism of inhibiting the secretion of IL - 13 in mice infected with OVA . Methods : 10 normal control mice and 10 mice infected with SJ + OVA were isolated from the spleen of SJ + OVA group . The expression of interleukin - 13 ( IL - 13 ) in spleen cells was significantly increased compared with control group .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R562.25;R532.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1844456