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《重慶醫(yī)科大學(xué)》 2015年

TRPC1在人氣道上皮內(nèi)的表達(dá)及其意義

何葉  

【摘要】：研究背景：瞬時受體電位蛋白-1(transient receptor potential canonical 1, TRPC1)是廣泛存在于人體多種細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜上一種壓力敏感受體,參與人體內(nèi)多種細(xì)胞的機(jī)電換能機(jī)制。氣道高壓力與肺功能減損、呼吸道炎癥反應(yīng)、氣道黏液高分泌、氣道重塑等肺臟多種病理生理改變有關(guān),但其信號傳導(dǎo)機(jī)制尚不清楚。因此,我們推測TRPC1蛋白可能是支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)感知機(jī)械壓力并介導(dǎo)相關(guān)病理改變的重要受體。目的：探討人支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)TRPC1蛋白的表達(dá)情況及其在氣道感知機(jī)械壓力機(jī)制中的作用。方法：1.收集人肺癌患者肺癌旁5cm以外的無病變組織,根據(jù)臨床表現(xiàn)分為正常組、慢性阻塞性肺病組(COPD)和哮喘組,通過細(xì)胞免疫組織化學(xué)、Western-blot方法、實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)證實(shí)TRPC1在人支氣管上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況,以及各組分布特點(diǎn)；2.16HBE細(xì)胞經(jīng)TRPCl siRNA NC siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)實(shí)現(xiàn)基因沉默后,通過細(xì)胞免疫熒光技術(shù)、Western-blot檢測沉默效率；3.將16HBE細(xì)胞分組處理：單純刺激組、刺激+TRPCl siRNA轉(zhuǎn)染組、對照組,以細(xì)胞牽張刺激系統(tǒng)處理6 mmin后,激光共聚焦技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化。結(jié)果：1.COPD組、哮喘組支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)TRPCl表達(dá)水平明顯高于對照組(均P0.05)；2.經(jīng)TRPCl siRNA轉(zhuǎn)染后,16HBE細(xì)胞內(nèi)TRPCl蛋白表達(dá)水平明顯降低(均P0.01),經(jīng)NC siRNA轉(zhuǎn)染后,TRPCl蛋白的表達(dá)水平無明顯變化(P=0.06,P=0.10)；3.單純刺激組細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度顯著高于對照組(對照組：0.08±0.007,單純刺激組：0.18±0.008,P0.01),而刺激+TRPCl siRNA轉(zhuǎn)染組鈣離子熒光強(qiáng)度與對照組無明顯差異(刺激+TRPCl siRNA組：0.09±0.007,P=0.06)。結(jié)論：1.TRPC1在支氣管上皮細(xì)胞中廣泛表達(dá),且在COPD及哮喘患者肺組織中表達(dá)量較正常肺組織表達(dá)量明顯升高；2.支氣管上皮細(xì)胞16HBE經(jīng)TRPCl siRNA轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞內(nèi)TPRC1蛋白表達(dá)水平明顯抑制；3.支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)的TRPCl蛋白對機(jī)械壓力刺激敏感。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R56
【目錄】：

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