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  本文關(guān)鍵詞：鈾礦塵致RAW264.7細(xì)胞凋亡的線粒體相關(guān)途徑的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南華大學(xué)》 2015年

鈾礦塵致RAW264.7細(xì)胞凋亡的線粒體相關(guān)途徑的研究

李躲  

【摘要】：目的:探討鈾礦塵致RAW264.7細(xì)胞凋亡的線粒體相關(guān)途徑的機(jī)制,為鈾礦塵致肺損傷機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(0μg/ml)和鈾礦塵組(25、50、100、200和400μg/ml),通過(guò)MTT法檢測(cè)不同濃度鈾礦塵對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞細(xì)胞(RAW264.7)存活率的影響及其時(shí)效關(guān)系;Hoechst33258熒光標(biāo)記法及Annexin-V FITC/PI雙染法分析鈾礦塵對(duì)RAW264.7細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)和凋亡率的影響;羅丹明123熒光探針檢測(cè)鈾礦塵作用于RAW264.7細(xì)胞后,線粒體膜電位的改變;Western Blot檢測(cè)鈾礦塵作用后的RAW264.7細(xì)胞中各凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況:細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞色素C(Cyt-c)以及線粒體和胞漿內(nèi)Cyt-c,剪切的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase--3),剪切的半胱天冬酶-9(Cleaved-Caspase-9)、剪切的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved-PARP)、Bcl-2以及Bax。Q-PCR法檢測(cè)鈾礦塵對(duì)RAW264.7細(xì)胞Bcl-2和Bax基因表達(dá)的影響;結(jié)果:MTT結(jié)果顯示不同濃度鈾礦塵作用于RAW264.7細(xì)胞不同時(shí)間后,細(xì)胞存活率呈染毒時(shí)間和劑量依賴性下降。將不同濃度鈾礦塵作用于RAW264.7細(xì)胞24h后,Hoechst33258染色和Annexin-V FITC/PI雙染法流式細(xì)胞儀檢測(cè),兩者結(jié)果均顯示RAW264.7細(xì)胞凋亡隨著鈾礦塵濃度的增加而增加。Rh123染色后,熒光分光光度法檢測(cè),提示線粒體膜電位隨著鈾礦塵濃度增加而降低。細(xì)胞內(nèi)Cyt-c和胞漿內(nèi)Cyt-c表達(dá)成上升趨勢(shì),而線粒體內(nèi)Cyt-c的表達(dá)是降低的;Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9及Cleaved-PARP蛋白的表達(dá)均升高,提示這三種蛋白的前體均被激活。Q-PCR結(jié)果顯示,隨著鈾礦塵濃度增加,Bcl-2基因表達(dá)降低而Bax基因表達(dá)增高;Western Blot結(jié)果顯示:Bcl-2蛋白表達(dá)降低,Bax蛋白表達(dá)增加,與其基因的表達(dá)趨勢(shì)相同。結(jié)論:1.25~400μg/ml鈾礦塵可以誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞發(fā)生凋亡;2.鈾礦塵致RAW264.7細(xì)胞的凋亡作用可能是通過(guò)依賴Caspase-3的線粒體途徑實(shí)現(xiàn)的;3.Bcl-2蛋白家族中Bcl-2和Bax可能參與調(diào)節(jié)鈾礦塵致RAW264.7細(xì)胞的凋亡。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R135.2
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：鈾礦塵致RAW264.7細(xì)胞凋亡的線粒體相關(guān)途徑的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：182190