本文關(guān)鍵詞：CTNNAL1對肺應(yīng)激損傷上皮修復(fù)和間質(zhì)修復(fù)的平衡點(diǎn)調(diào)控，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中南大學(xué)》 2014年

CTNNAL1對肺應(yīng)激損傷上皮修復(fù)和間質(zhì)修復(fù)的平衡點(diǎn)調(diào)控

譚眉靈  

【摘要】：肺和氣道作為內(nèi)外環(huán)境相互作用的第一道界面,經(jīng)常遭受來自外環(huán)境的應(yīng)激刺激或損傷,構(gòu)成許多肺部疾病甚至全身性疾病的啟動基礎(chǔ)。氣道上皮是肺臟應(yīng)激的首道防線,受損后的氣道上皮立即啟動修復(fù)過程,包括可逆的上皮修復(fù)和不可逆的間質(zhì)修復(fù)。上皮-問質(zhì)轉(zhuǎn)變(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是指細(xì)胞由上皮表型向間質(zhì)表型轉(zhuǎn)變的過程。EMT的發(fā)生是纖維化中肌成纖維細(xì)胞的重要來源,是介于正常組織損傷后上皮修復(fù)和間質(zhì)修復(fù)之間一個極重要的生物學(xué)過程。受損的肺組織如何選擇不同類型的修復(fù)機(jī)制,可能取決于其表達(dá)的具有感知周邊環(huán)境和自身狀態(tài)功能的粘附分子譜。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)連環(huán)素(catenin)家族成員CTNNAL1(catenin alpha-like1)在哮喘病人氣道粘膜中表達(dá)下調(diào)；體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CTNNAL1參與氣道應(yīng)激反應(yīng),促進(jìn)人支氣管上皮細(xì)胞(human bronchial epithelial cells, HBECs)增殖和損傷修復(fù),提示CTNNAL1不僅僅是一種結(jié)構(gòu)性粘附分子,還能響應(yīng)應(yīng)激,對氣道上皮細(xì)胞的應(yīng)激和修復(fù)功能應(yīng)該具有保護(hù)性的作用。因此,本研究假設(shè)在肺臟應(yīng)激損傷與修復(fù)的過程中,CTNNAL1在上皮細(xì)胞中發(fā)揮積極影響,對肺損傷后上皮修復(fù)與間質(zhì)修復(fù)起平衡調(diào)控作用。 目的： 本課題擬用臭氧作為應(yīng)激刺激,構(gòu)建人支氣管上皮細(xì)胞EMT模型,并觀察CTNNAL1對氣道上皮細(xì)胞EMT的影響,探討CTNNAL1在氣道上皮損傷和修復(fù)過程中的作用。 方法： (1)體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞系(HBECs),用臭氧進(jìn)行應(yīng)激刺激,構(gòu)建EMT模型,用實(shí)時熒光定量PCR, Western blot法和細(xì)胞免疫組化法鑒定上皮和間質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá)。 (2)體外培養(yǎng)CTNNAL1高表達(dá)和沉默的HBE穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,采用實(shí)時熒光定量PCR和Western blot法檢測臭氧應(yīng)激下CTNNAL1不同表達(dá)水平HBECs上皮和間質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá),觀察CTNNAL1對EMT的影響。 (3)ELISA法檢測臭氧應(yīng)激下各組HBECs中TGF-β1的分泌情況。 結(jié)果： (1)臭氧應(yīng)激可使HBECs上皮標(biāo)記物表達(dá)降低,間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)增高,符合EMT表型。 (2)CTNNAL1高表達(dá)促進(jìn)臭氧應(yīng)激后HBECs上皮標(biāo)記物表達(dá),抑制間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá),抑制EMT發(fā)生；CTNNAL1沉默后作用相反。 (3)臭氧應(yīng)激后,HBECs分泌的TGF-β1表達(dá)增多；CTONAL1高表達(dá)下調(diào)HBECs分泌的TGF-β,CTNNAL1沉默后增加TGF-β1的表達(dá)量。 結(jié)論： (1)成功構(gòu)建臭氧應(yīng)激人支氣管上皮細(xì)胞的EMT模型。 (2)臭氧應(yīng)激人支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)源性TGF-β1分泌增多。 (3)CTNNAL1可減少內(nèi)源性TGF-β1分泌并抑制臭氧應(yīng)激誘發(fā)的人支氣管上皮細(xì)胞EMT作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

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