本文關(guān)鍵詞：幾丁糖霧化吸入對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的抑制作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第二軍醫(yī)大學(xué)》 2014年

幾丁糖霧化吸入對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的抑制作用

周璐璐  

【摘要】：急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是圍手術(shù)期常見的缺血缺氧性損傷，急性肺部炎癥過程可能演化發(fā)展為以肺纖維化為主要病理生理改變的慢性炎癥過程。肺上皮細(xì)胞凋亡、成纖維細(xì)胞（fibroblast, Fb）的過度增生、異常分化以及膠原合成增多在肺纖維化過程中發(fā)揮了重要作用。醫(yī)用幾丁糖是一種聚氨基葡萄糖，能夠選擇性促進(jìn)上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞生長，抑制Fb生長，促進(jìn)組織修復(fù)。 本研究通過氣管滴入脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）建立大鼠肺纖維化模型，在連續(xù)3天氣管滴入LPS后肺纖維化形成過程期間每天行幾丁糖霧化吸入直至實驗終點。實驗結(jié)束時取肺組織行HE、Masson染色評價肺組織病理變化；樣本堿水解法測定肺組織羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）含量以了解肺組織膠原沉積情況；Westernblot檢測與肺纖維化相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶-3（matrix metallopmteinase-3，MMP-3）和組織金屬蛋白酶抑制物-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）的蛋白含量。研究幾丁糖霧化吸入對LPS誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的影響，嘗試為臨床肺纖維化的治療提供新的實驗思路。第一部分大鼠肺纖維化模型的建立 研究目的： 通過組織病理學(xué)檢測，觀察大鼠經(jīng)LPS處理后不同時間點肺組織的炎癥反應(yīng)和纖維化情況，為后續(xù)研究提供依據(jù)。 研究方法： 健康雄性SD大鼠30只，隨機(jī)分為5組，依據(jù)處理方法和取材時間分別命名為：對照組（C組，n=6）、 LPS處理后3天組（L3組，n=6）、LPS處理后7天組（L7組，n=6）、LPS處理后14天組（L14組，n=6）、LPS處理后28天組（L28組，n=6）。 C組:大鼠在實驗開始后前3天每天予以氣管滴入無菌生理鹽水(0.2ml/kg)，于氣管首次滴入生理鹽水后第3天處死并切取左肺組織。 L3組:大鼠在實驗開始后前3天每天予以氣管滴入LPS (5mg/kg,0.2ml/kg)，于氣管首次滴入LPS后第3天處死并切取左肺組織。 L7組:大鼠在實驗開始后前3天每天予以氣管滴入LPS (5mg/kg,0.2ml/kg)，于氣管首次滴入LPS后第7天處死并切取左肺組織。 L14組:大鼠在實驗開始后前3天每天予以氣管滴入LPS (5mg/kg,0.2ml/kg)，于氣管首次滴入LPS后第14天處死并切取左肺組織。 L28組:大鼠在實驗開始后前3天每天予以氣管滴入LPS (5mg/kg,0.2ml/kg)，于氣管首次滴入LPS后第28天處死并切取左肺組織。 對各組大鼠左肺組織進(jìn)行HE和Masson染色以及Ashcroft纖維化評分，觀察大鼠經(jīng)LPS處理后不同時間點肺組織的炎癥反應(yīng)和纖維化情況。 研究結(jié)果： 光學(xué)顯微鏡下觀察HE染色和Masson染色結(jié)果可見：C組肺組織結(jié)構(gòu)無異常改變。L3組出現(xiàn)肺泡間隔水腫、肺泡出血、單核巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤等炎癥反應(yīng)表現(xiàn)；L7組肺泡壁內(nèi)Fb增生明顯，組織間隙出現(xiàn)膠原纖維沉積；L14組肺泡壁內(nèi)炎癥細(xì)胞數(shù)目雖有所減少，但膠原沉積增加，肺內(nèi)形成肺間質(zhì)纖維化；L28膠原沉積明顯增加，肺泡壁間隔增寬，形成明顯的肺間質(zhì)纖維化。Ashcroft纖維化評分結(jié)果顯示：與C組相比，L組(L3, L7, L14, L28)評分均高于C組，L28組＞L14組＞L7組＞L3組，任意兩組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05）。 結(jié)論： 肺纖維化模型開始制作后第3天肺組織呈現(xiàn)急性炎癥反應(yīng)，第14天肺內(nèi)形成肺間質(zhì)纖維化，第28天時肺纖維化程度進(jìn)一步加重，符合ARDS炎癥反應(yīng)和肺纖維化的病理進(jìn)程。 第二部分幾丁糖霧化吸入對LPS誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的抑制作用 研究目的： 通過對各組大鼠進(jìn)行組織病理學(xué)檢測和肺組織HYP含量的測定，，研究幾丁糖霧化吸入對LPS誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的影響；通過Western blot檢測，研究幾丁糖霧化吸入是否對與肺纖維化相關(guān)的MMP-3和TIMP-1蛋白含量有影響。 研究方法： 健康雄性SD大鼠24只，隨機(jī)分為4組，依據(jù)處理方法分別命名為對照組(C組，n=6)、LPS組（L組，n=6）、幾丁糖組(Ch組，n=6)、LPS+幾丁糖組（LCh組，n=6）。 C組：大鼠在實驗開始后前3天每天予以氣管滴入無菌生理鹽水(0.2ml/kg)，之后每天霧化生理鹽水2次直至實驗結(jié)束，每次30min，中間間隔30min。 L組：大鼠在實驗開始后前3天每天予以氣管滴入LPS (5mg/kg,0.2ml/kg)，之后每天霧化生理鹽水2次直至實驗結(jié)束，方法同C組。 Ch組：除給大鼠霧化生理鹽水改為霧化幾丁糖，其余均同C組。 LCh組：除給大鼠霧化生理鹽水改為霧化幾丁糖，其余均同L組。 各組大鼠均于首次氣管滴入生理鹽水或LPS后第28天處死并切取肺組織。對各組大鼠左肺組織行HE染色、Masson染色以及Ashcroft纖維化評分，評價各組大鼠肺組織纖維化情況；通過樣本堿水解法對各組大鼠右上葉肺組織行HYP含量檢測，以了解各組大鼠肺組織膠原沉積情況；對各組大鼠右中葉肺組織行Western blot檢測，以了解各組大鼠肺組織MMP-3和TIMP-1的蛋白含量情況。 研究結(jié)果： 光學(xué)顯微鏡下觀察HE染色和Masson染色結(jié)果可見：與C組相比，Ch組無顯著差異，L組膠原沉積明顯增加，肺泡壁間隔增寬，形成明顯肺間質(zhì)纖維化；相比于L組，LCh組膠原沉積明顯減少，肺組織結(jié)構(gòu)明顯改善。Ashcroft纖維化評分結(jié)果顯示：與C組相比，Ch組評分無顯著差異(P0.05)，L組評分高于C組(P 0.05)；與L組相比，LCh組評分降低(P 0.05)。 HYP含量結(jié)果顯示：與C組相比，Ch組HYP含量無顯著差異(P0.05)，L組HYP含量高于C組(P 0.01)；與L組相比，LCh組HYP含量降低(P 0.01)。 Western blot檢測MMP-3和TIMP-1的蛋白含量結(jié)果顯示：與C組相比，Ch組兩者表達(dá)均無顯著差異(P0.05)，L組兩者表達(dá)均顯著上升(P 0.01)；與LPS組相比，LCh組兩者表達(dá)均顯著下降(P0.01)。 結(jié)論： 幾丁糖霧化吸入后，LPS誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化明顯改善，組織中HYP含量降低即大鼠肺組織膠原沉積減少，提示幾丁糖霧化吸入對LPS誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化有抑制作用；與肺纖維化相關(guān)的MMP-3和TIMP-1的蛋白含量顯著下降，推測幾丁糖霧化吸入對LPS誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的抑制作用可能與MMP-3和TIMP-1相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

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6 向菲;基質(zhì)金屬蛋白酶在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用及其調(diào)節(jié)的研究[D];華中科技大學(xué);2006年

7 孫英新;螺旋藻藻藍(lán)蛋白抗百草枯誘導(dǎo)大鼠肺纖維化的研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2012年

8 費雁;芪丹化纖方對大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及機(jī)制研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2009年

9 丁明橋;化纖湯對肺纖維化大鼠肺組織細(xì)胞外基質(zhì)代謝的干預(yù)作用及機(jī)制[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2007年

10 靳曉霞;加味小苦辛湯治療兒童肺纖維化臨床經(jīng)驗總結(jié)及相關(guān)實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王平凡;尾加壓素Ⅱ在人肺纖維化組織中的表達(dá)及意義[D];蘭州大學(xué);2008年

2 王勝霞;玉屏風(fēng)多糖對大鼠肺纖維化的預(yù)防作用及部分機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

3 包敏;胰島素樣生長因子1作用下的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠肺纖維化的治療作用及其機(jī)制[D];南京大學(xué);2011年

4 于國強(qiáng);呂曉東教授治療肺纖維化之經(jīng)驗[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2007年

5 施維;整合素相關(guān)激酶與上皮—間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化在肺纖維化中的作用[D];華中科技大學(xué);2007年

6 劉娟;枇杷葉三萜酸對大鼠肺纖維化的防治作用及其部分機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

7 董靜;丹參對實驗性肺纖維化形成的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2003年

8 高曉方;干擾素γ對大鼠肺纖維化的治療作用及機(jī)制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 毛新妍;吲哚-3-原醇對博萊霉素致小鼠/大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

10 王星;酒精與大鼠肺纖維化關(guān)系的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：幾丁糖霧化吸入對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的抑制作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：173413