本文選題：結核分枝桿菌　切入點：ESAT6　出處：《蘭州大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：現(xiàn)有的實驗方法不能夠準確地鑒別活動性和潛伏性結核人群,為了尋找更加有效的診斷策略來輔助結核菌素皮膚試驗(tuberculin skin test, TST)或者取代它,從而鑒別活動性和潛伏性結核,我們選擇了結核分枝桿菌RD1區(qū)編碼的蛋白ESAT6和CFP10以及在其缺氧的條件下產生的HspX,試圖將ESAT6、 CFP10和HspX三個抗原聯(lián)合診斷運用于鑒別活動性和潛伏性結核中。 方法：收集臨床上肺結核患者(28例)、患者的密切接觸者(14例)以及健康體檢大學生(11例)的外周血,共分四組：肺結核患者分為肺結核初治組(Initial treated-tuberculosis, IT-TB)、肺結核復治組(Retreated-tubercu-losis, RT-TB),密切接觸組(Close contacts, CC,接觸至少一年以上)和健康組(Healthy donors, HD)。ELISPOT技術檢測不同人群在ESAT6、CFP1O和HspX分別刺激后分泌IFN-γ的T淋巴細胞數(shù)。ELISA技術檢測血漿中的總IFN-γ濃度以及ESAT6、CFP10和HspX特異性IgG水平。 結果：ESAT6、CFP10和IHspX體外分別刺激實驗對象的外周血淋巴細胞,可使其分泌大量IFN-γ。與HD組和CC組相比,結核病患者的兩組中,ESAT6和CFP10蛋白刺激的分泌IFN-γ的細胞數(shù)要明顯更多(p＜0.05)。而結核特異性抗原HspX刺激后的結果顯示,在HD組和CC組中,每3×105PBMCs中形成的斑點單位和結核病患者類似甚至多于結核病患者(p＞0.05) ESAT6、CFP10和IHspX分別包被96孔板用來檢測四組人群血漿中的特異性IgG水平。在ESAT6包被的多個稀釋度中,除了1：100稀釋度外,CC組與IT-TB組或是RT-TB組相比OD值要低,結果有明顯的統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。在CFP10包被的實驗里,四組的特異性IgG水平沒有明顯的不同。在HspX包被的實驗里,CC組中吸光度值是高于其他組。在1：100的稀釋度時,CC組的IgG水平明顯高于HD組,IT-TB和RT-TB組。(p＜0.01)在1：800、1：1600、1：6400和1：12800四種稀釋度中,CC與RT-TB相比結果有統(tǒng)計學差異。(p＜0.05) ELISA檢測血漿中總的IFN-γ水平,HD組比RT-TB組分泌更高水平的IFN-γ且差異具有統(tǒng)計學意義。(p＜0.05) 結論：各人群對ESAT6、CFPIO和HspX三種抗原表現(xiàn)出明顯差異。在ELISPOT實驗ESAT6和CFP10蛋白刺激組的結果,分泌IFN-γ的細胞數(shù)表現(xiàn)出比正常人高而HspX蛋白刺激的結果比正常人低。在ELISA實驗ESAT6和CFP10蛋白組中,特異性IgG水平表現(xiàn)出比結核病患者低而HspX的結果比結核病患者高。因此,利用ELISPOT以及ELISA技術,使用這三種抗原聯(lián)合可以對活動性和潛伏性結核進行初步篩選,可作為結核病患者有效的鑒別診斷策略候選。
[Abstract]:Objective: the existing experimental methods can not accurately distinguish active and latent tuberculosis population, in order to find a more effective diagnostic strategy to assist tuberculin skin test (TST) or replace it. To identify active and latent tuberculosis, We selected the protein ESAT6 and CFP10 encoded in the RD1 region of Mycobacterium tuberculosis and the HspX produced under hypoxia condition. We tried to use ESAT6, CFP10 and HspX in the combined diagnosis of active and latent tuberculosis. Methods: the peripheral blood of 28 patients with pulmonary tuberculosis, 14 patients with close contact with the patients and 11 healthy college students were collected. Pulmonary tuberculosis patients were divided into four groups: initial treated-tuberculosis (IT-TBX) group, retreated-tubercu-losism (RT-TBN) group, close contact group (CCL, exposed to at least one year) and healthy group. HD).ELISPOT technique was used to detect CFP1O and HspX stimulation in different groups. The total concentration of IFN- 緯 and the levels of CFP10 and HspX specific IgG in plasma were measured by Elisa and the number of T lymphocytes secreting IFN- 緯. Results the peripheral blood lymphocytes of the subjects were stimulated by CFP10 and IHspX in vitro, which could secrete a great deal of IFN- 緯, compared with those in HD and CC groups, and compared with those in HD and CC groups. The number of IFN- 緯 secreted by ESAT6 and CFP10 protein in the two groups was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). However, the results of HspX stimulation with TB specific antigen showed that, in HD and CC groups, the number of IFN- 緯 secreted by ESAT6 and CFP10 protein was significantly higher than that in CC group. The number of spots per 3 脳 105PBMCs is similar to that of TB patients, even more than that of TB patients (p > 0.05). ESAT6 CFP10 and IHspX were coated with 96 hole plates to detect the specific IgG level in plasma of the four groups. The OD value of CC group was lower than that of IT-TB group or RT-TB group except for 1: 100 dilution. Results there was significant statistical difference (P < 0.05). In the CFP10 coated experiment, There was no significant difference in the specific IgG levels among the four groups. In the HspX coated experiment, the absorbance value of the CC group was higher than that of the other groups. At the dilution of 1: 100, the IgG level of the CC group was significantly higher than that of the HD group (IT-TB) and the RT-TB group (< 0.01) at 1: 800, 1: 16001: 6400 and 1: 12800. There was statistical difference between CC and RT-TB. (P < 0.05). Total level of IFN- 緯 in plasma detected by ELISA the level of IFN- 緯 in HD group was higher than that in RT-TB group and the difference was statistically significant (P < 0.05). Conclusion: the three antigens of ESAT6CF-PIO and HspX were significantly different among different population groups, and the results of ESAT6 and CFP10 protein stimulation in ELISPOT test were significant. The number of IFN- 緯 secreting cells was higher than that of normal persons and the stimulation of HspX protein was lower than that of normal controls. In the ELISA test ESAT6 and CFP10 protein groups, the specific IgG level was lower than that in TB patients and the HspX level was higher than that in TB patients. Using ELISPOT and ELISA, the combination of these three antigens can be used to screen active and latent tuberculosis, and can be used as an effective strategy candidate for differential diagnosis of TB patients.
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R521

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