本文選題：趨化因子受體　切入點(diǎn)：CXCR3　出處：《延邊大學(xué)》2012年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 支氣管哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與,Thl和Th2型細(xì)胞因子產(chǎn)生失衡有關(guān),以氣道高反應(yīng)性為特征的氣道慢性炎癥性疾病。多種細(xì)胞趨化因子及其受體參與哮喘的氣道炎癥反應(yīng),CD8+T細(xì)胞在哮喘的氣道高反應(yīng)性(AHR)和過敏性肺部炎癥反應(yīng)中起重要作用。CXCL10(干擾素-γ誘導(dǎo)蛋白-10)主要表達(dá)于活化的CD8+T細(xì)胞,與它的受體CXCR3結(jié)合后,可吸引T細(xì)胞募集到肺組織。本實(shí)驗(yàn)通過CXCR3基因敲除小鼠,研究其在卵清蛋白(OVA)致敏的哮喘反應(yīng)中的作用機(jī)制。 方法： 將64只野生型C57BL/6品系雄性小鼠和64只雄性CXCR3基因敲除小鼠分為4組：正常對(duì)照組1(WT/SAL組,32只C57BL/6WT小鼠);正常對(duì)照組2(KO/SAL組,32只C57BL/6KO小鼠)；哮喘組1(WT/OVA組,32只C57BL/6WT小鼠)；哮喘組2(KO/OVA,32只C57BL/6KO小鼠)。哮喘組均于第0d和第14d向小鼠腹腔內(nèi)注射致敏液(50μg OVA和2.25mg氫氧化鋁佐劑生理鹽水)0.2ml,第25d起將小鼠置于透明密閉容器中,用1%的OVA溶液10ml進(jìn)行霧化吸入,每日1次,每次20min,連續(xù)6d。正常對(duì)照組則均使用氫氧化鋁佐劑混合生理鹽水腹腔注射,生理鹽水霧化吸入。所有各組小鼠均于末次激發(fā)末次霧化激發(fā)試驗(yàn)24h后處死。HE、PAS染色檢測(cè)肺組織病理改變。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺泡灌洗液和肺組織CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞百分比。BCA法檢測(cè)BALF上清總蛋白量。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)小鼠肺泡灌洗液和肺組織IFN-γ、IL-4和CXCL10等細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)。RT-PCR檢測(cè)TNF-α、IFN-γ、IL-8(KC)、 TGF-β1和CXCL10等細(xì)胞趨化因子在小鼠肺組織mRNA中的表達(dá)。 結(jié)果： 霧化激發(fā)過程中WT/OVA組小鼠出現(xiàn)較明顯的呼吸急促、煩躁不安、頭面部瘙癢、腹肌抽搐等癥狀。與野生型小鼠(WT/OVA)相比,CXCR3基因敲除小鼠(KO/OVA)肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著減少(P0.05),并且較野生型小鼠(WT/OVA)的BALF上清液總蛋白量減少,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),即炎癥程度較輕。HE、PAS染色均顯示CXCR3基因敲除小鼠(KO/OVA)氣道內(nèi)過敏性炎癥表現(xiàn)較野生型小鼠(WT/OVA)減輕。并且半定量分析顯示野生型小鼠較CXCR3基因敲除小鼠的氣道炎癥水平明顯增高,又顯著性差異(P=0.045)。而正常對(duì)照組的肺組織結(jié)構(gòu)正常,未見明顯炎癥反應(yīng)。小鼠肺功能檢查顯示與CXCR3基因敲除小鼠(KO/OVA)相比,野生型小鼠(WT/OVA)在吸入濃度為25mg/ml乙酰甲膽堿后的氣道反應(yīng)性和氣道阻力,比顯著性增高(P0.05)。流式細(xì)胞術(shù)顯示,CXCR3基因敲除小鼠的BALF中CD8+T細(xì)胞百分比較野生型小鼠明顯降低(P=0.003)。在mRNA水平,CXCR3基因敲除小鼠肺組織中IFN-γ的表達(dá)較野生型小鼠明顯上調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。ELISA試驗(yàn)顯示,CXCR3基因敲除小鼠的BALF中IFN-γ的濃度較野生型小鼠增高(P0.05)。而野生型小鼠BALF中的IL-4濃度較CXCR3基因敲除小鼠增高(P0.05)。 結(jié)論： 本試驗(yàn)利用OVA腹腔注射致敏,結(jié)合OVA持續(xù)霧化吸入激發(fā)成功制作了哮喘小鼠模型。CXCR3基因敲除后,OVA誘發(fā)的小鼠肺部過敏性炎癥反應(yīng)減輕。CXCR3通過募集CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞到達(dá)炎癥部位,進(jìn)一步啟動(dòng)炎癥介質(zhì)的釋放,在哮喘氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性方面起關(guān)鍵作用。因此,CXCR3可能作為治療哮喘的新目標(biāo)。
[Abstract]:Objective:
Bronchial asthma is caused by a variety of cells and cellular components involved in, Thl and Th2 cytokines imbalance, characterized by a chronic inflammatory airway disease with airway hyperresponsiveness. Airway inflammation of various cell chemotactic factor and its receptor in CD8+T cells in asthma, airway hyperresponsiveness of asthma (AHR) plays an important the role of.CXCL10 and allergic lung inflammation (interferon gamma inducible protein -10) is mainly expressed on activated CD8+T cells, combined with its receptor CXCR3, which can attract T cell recruitment to the lung tissue. The experiments of CXCR3 gene knockout mice, study the ovalbumin (OVA) sensitization reaction mechanism of asthma in.
Method錛，

本文編號(hào)：1640599