本文選題：間質(zhì)性肺病　切入點：系統(tǒng)性硬化癥　出處：《中南大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：探討microRNA-146b (miR-146b)及microRNA-503(miR-503)在博來霉素所致肺纖維化(bleomycin-induced pulmonary fibrosis)小鼠肺組織中的表達及其可能的作用機制。 方法：①將50只C57BL/6小鼠隨機分為三組：對照組、博來霉素肺纖維化組(模型組)、硼替佐米干預(yù)組(干預(yù)組)；對照組予以氣管內(nèi)灌注生理鹽水,造模后1周予以腹腔注射生理鹽水(0.1ml)；模型組則氣管內(nèi)滴注博來霉素溶液(3.5mg/kg),造模后1周予以腹腔注射生理鹽水(0.1ml),干預(yù)組給予氣管內(nèi)滴注博來霉素溶液(方法劑量同模型組),造模后1周予以腹腔注射硼替佐米溶液(120ug/kg,0.1ml);分別于造模后第3周、第4周處死小鼠。②采用肺組織蘇木精—伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色)、masson三色染色法及纖維化相關(guān)基因檢測等方法驗證纖維化模型是否構(gòu)建成功。③提取肺組織總核糖核酸(Ribonucleic Acid, RNA),檢測各組小鼠肺組織中miR-146b及miR-503的表達。④利用生物信息學(xué)網(wǎng)站(TargetScan, PicTar, MiRanda)及生物醫(yī)學(xué)檢索網(wǎng)站PubMed預(yù)測miR-146b及miR-503纖維化相關(guān)靶基因。⑤利用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(Real-time Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)及蛋白質(zhì)印記(Western-blot)分析所預(yù)測的靶基因的表達。 結(jié)果：①成功構(gòu)建博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化小鼠模型。②miR-146b在模型組小鼠中表達較對照組明顯上調(diào)；miR-503在模型組小鼠中表達較對照組明顯下調(diào)(P0.01)。③通過生物信息學(xué)預(yù)測miR-146b纖維化相關(guān)靶基因有irak、siah2、klf4、mmp16、notchl及fox03,其中在模型組小鼠中fox03,siah2表達下調(diào)(P0.01),與miR-146b表達趨勢相反。④通過生物信息學(xué)預(yù)測miR-503纖維化相關(guān)靶基因Smad7,在模型組小鼠肺組織中mRNA水平表達無明顯改變。 結(jié)論：①在博來霉素誘導(dǎo)肺纖維化小鼠肺組織中miR-146b表達上調(diào),miR-503表達下調(diào)；②在博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠肺組織中foxO3、siah2表達下調(diào),而生物信息學(xué)預(yù)鋇foxO3、siah2為miR-146b靶基因；③未發(fā)現(xiàn)硼替佐米(120ug/kg)能改善博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression and possible mechanism of microRNA-146b miR-146b and microRNA-503miR-503 in bleomycin-induced pulmonary fibrosis mice induced by bleomycin. Methods 50 C57BL / 6 mice were randomly divided into three groups: control group, bleomycin pulmonary fibrosis group (model group), bortezomib intervention group (intervention group) and control group were given intratracheal instillation of normal saline. In the model group, intratracheal infusion of bleomycin solution (3.5 mg / kg), intraperitoneal injection of normal saline (0.1 ml) one week after modeling, and intratracheal infusion of bleomycin solution (same dose) were given in the intervention group. The model group was treated with intraperitoneal injection of bortezomil solution (120ug- kg / kg) 0.1 ml / ml 1 week after the model was made, respectively at the third week after the model was made. At week 4, the mice were killed by hematoxylin-eosin staininging-HE staining and fibrosis-related gene detection to verify whether the fibrosis model was successfully constructed or not. 3. 3 was used to extract total ribonucleic acid from lung tissue. Detection of miR-146b and miR-503 expression in lung tissues of mice in each group using bioinformatics websites: Target Scan, PicTaran, MiRanda) and biomedical search site PubMed for predicting miR-146b and miR-503 Fibrosis-related target gene .5 using real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction. Real-time Polymerase Chain reaction (RT-PCR) and protein imprinting were used to analyze the expression of target gene. Results the mouse pulmonary fibrosis model induced by bleomycin was successfully constructed. 2miR-146b expression was significantly up-regulated in the model group compared with the control group. The target genes related to miR-146b fibrosis are irakassiah2lf4mmp16notchl and fox03. among them, the expression of fox03 siah2 is down-regulated in model group, contrary to the trend of miR-146b expression, the target gene Smad7 is predicted by bioinformatics, and the mRNA level in lung tissue of model group is predicted by bioinformatics. There was no obvious change in expression. Conclusion the expression of miR-146b in bleomycin-induced pulmonary fibrosis mice is up-regulated and down-regulated in bleomycin induced pulmonary fibrosis mice, and the expression of foxO3osiah2 is down-regulated in bleomycin induced pulmonary fibrosis mice. However, bioinformatics showed that barium foxo _ 3 siah2 was the target gene of miR-146b, but bortezomide 120ugr / kg could improve pulmonary fibrosis induced by bleomycin in mice.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563

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本文編號：1619299