本文選題：p120　切入點：NF-κB　出處：《華中科技大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：一、實驗目的 本實驗使用脂多糖（LPS）氣管內(nèi)注射建立小鼠急性肺損傷模型（ALI），檢測在氣道損傷修復過程中p120蛋白的表達變化及在細胞內(nèi)的定位、NF-κB信號通路相關(guān)蛋白的表達變化及細胞因子IL-8的表達變化，初步探討小鼠氣道炎癥發(fā)生過程中的有關(guān)機制。 二、實驗方法 C57小鼠隨機分為實驗組1d、4d、7d、14d組和對照組，每組8只。實驗組經(jīng)氣管內(nèi)注射LPS（5mg/kg），對照組氣管內(nèi)注射等量生理鹽水，分別于注射后1d、4d、7d及14d取肺組織。采用HE染色觀察各組小鼠的氣道上皮形態(tài)學變化；免疫組織化學方法檢測p120在氣道上皮細胞的表達及在細胞內(nèi)的定位；Westernblot方法分別檢測小鼠肺組織內(nèi)p120、NF-κB亞基p65、p-IκBα及IκBα等表達水平的變化；ELISA（定量酶聯(lián)免疫吸附實驗）檢測小鼠肺組織勻漿上清液中NF-κB信號通路下游靶基因之一細胞因子IL-8的表達變化。 三、實驗結(jié)果 1、HE染色顯示：對照組小鼠支氣管黏膜上皮細胞排列整齊，未見明顯損傷及修復性變化。實驗組小鼠氣道上皮呈現(xiàn)了損傷及損傷后增殖、修復的形態(tài)學變化。實驗1d組小鼠未出現(xiàn)明顯的急性炎癥變化，氣道上皮連續(xù)性較好，肺泡也無明顯的病理變化。實驗4d組小鼠氣道黏膜上皮細胞出現(xiàn)明顯的壞死、脫落，細支氣管腔內(nèi)及管壁周圍見多量炎癥細胞浸潤，肺泡間隔明顯增寬，支氣管旁血管擴張、充血，血管周圍見多量炎癥細胞滲出。實驗7d組小鼠支氣管壁周圍仍見較多炎癥細胞浸潤，但部分區(qū)域肺泡間隔較前有所恢復。實驗14d組小鼠細支氣管壁炎細胞浸潤減少，肺泡間隔基本恢復正常，部分區(qū)域細支氣管黏膜上皮細胞排列緊密，上皮層次稍增多，呈現(xiàn)增殖變化。 2、免疫組化染色顯示：p120在對照組小鼠氣道上皮呈現(xiàn)圍繞氣道上皮細胞連續(xù)棕黃色線狀表達，在實驗組小鼠氣道上皮的細胞膜表達呈現(xiàn)先減少后逐漸恢復趨勢。實驗1d組，p120仍表現(xiàn)為沿氣道上皮細胞膜呈棕黃色連續(xù)線狀表達；實驗4d組和7d組，p120在小鼠氣道上皮細胞膜上表達明顯減少，部分區(qū)域見細胞質(zhì)內(nèi)表達；實驗14d組，部分區(qū)域恢復p120在小鼠氣道上皮細胞膜上棕黃色連續(xù)線狀表達。各實驗組與對照組相比均有明顯的差異（p＜0.05）。 3、Westernblot檢測顯示： 1）與對照組小鼠肺組織內(nèi)p120表達水平相比較，實驗組小鼠肺組織內(nèi)p120蛋白水平呈現(xiàn)出先降低后逐漸恢復的趨勢，實驗1d組和4d組p120蛋白水平下降較明顯，7d組和14d組p120蛋白水平有所上升，但仍低于對照組。各實驗組與對照組之間p120蛋白水平差異具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05)。 2）與對照組小鼠肺組織內(nèi)NF-κB表達水平比較，實驗組小鼠肺組織內(nèi)NF-κB表達呈現(xiàn)出先增加、后逐漸降低的動態(tài)變化，其表達變化的趨勢與p120的變化趨勢相反，即實驗1d組和4d組NF-κB表達增加，7d組和14d組NF-κB表達逐漸降低至接近對照組水平。實驗1d組、4d組和7d組與對照組比較NF-κB表達差異明顯，具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）；實驗14d組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。 3）與對照組比較，小鼠肺組織內(nèi)p-IκBα呈現(xiàn)先增加后減少趨勢，IκBα則先因磷酸化增加而表達減少，，后因磷酸化降低而表達增加。實驗1d組、4d組及7d組與對照組之間差異明顯，具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05），實驗14d組與對照組之間差異無統(tǒng)計學意義。 4、ELSIA結(jié)果顯示：LPS刺激C57小鼠后，IL-8的表達水平先增加后降低。各實驗組與對照組表達水平差異明顯，具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）。 四、實驗結(jié)論 由LPS所致的小鼠ALI，可能通過下調(diào)氣道上皮細胞內(nèi)p120表達并致其發(fā)生細胞內(nèi)定位的改變，引起IκBα發(fā)生磷酸化并降解，從而活化NF-κB信號途徑，促進前炎癥因子IL-8等的生成與分泌，參與氣道炎癥反應和增生修復過程。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R563.8

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 朱敏;馬燕;李娜萍;李建莎;汪永平;王滿香;王芳;吳人亮;;GSK3β在幾種氣道上皮損傷模型中的表達[J];中國組織化學與細胞化學雜志;2007年03期

本文編號：1613609