P120及NF-κB在脂多糖致小鼠急性肺損傷氣道上皮中的表達(dá)變化及相關(guān)機(jī)制
發(fā)布時(shí)間:2018-03-15 00:21
本文選題:p120 切入點(diǎn):NF-κB 出處:《華中科技大學(xué)》2012年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文
【摘要】:一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?本實(shí)驗(yàn)使用脂多糖(LPS)氣管內(nèi)注射建立小鼠急性肺損傷模型(ALI),檢測(cè)在氣道損傷修復(fù)過程中p120蛋白的表達(dá)變化及在細(xì)胞內(nèi)的定位、NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化及細(xì)胞因子IL-8的表達(dá)變化,初步探討小鼠氣道炎癥發(fā)生過程中的有關(guān)機(jī)制。 二、實(shí)驗(yàn)方法 C57小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組1d、4d、7d、14d組和對(duì)照組,每組8只。實(shí)驗(yàn)組經(jīng)氣管內(nèi)注射LPS(5mg/kg),對(duì)照組氣管內(nèi)注射等量生理鹽水,分別于注射后1d、4d、7d及14d取肺組織。采用HE染色觀察各組小鼠的氣道上皮形態(tài)學(xué)變化;免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)p120在氣道上皮細(xì)胞的表達(dá)及在細(xì)胞內(nèi)的定位;Westernblot方法分別檢測(cè)小鼠肺組織內(nèi)p120、NF-κB亞基p65、p-IκBα及IκBα等表達(dá)水平的變化;ELISA(定量酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))檢測(cè)小鼠肺組織勻漿上清液中NF-κB信號(hào)通路下游靶基因之一細(xì)胞因子IL-8的表達(dá)變化。 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、HE染色顯示:對(duì)照組小鼠支氣管黏膜上皮細(xì)胞排列整齊,未見明顯損傷及修復(fù)性變化。實(shí)驗(yàn)組小鼠氣道上皮呈現(xiàn)了損傷及損傷后增殖、修復(fù)的形態(tài)學(xué)變化。實(shí)驗(yàn)1d組小鼠未出現(xiàn)明顯的急性炎癥變化,氣道上皮連續(xù)性較好,肺泡也無明顯的病理變化。實(shí)驗(yàn)4d組小鼠氣道黏膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)明顯的壞死、脫落,細(xì)支氣管腔內(nèi)及管壁周圍見多量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡間隔明顯增寬,支氣管旁血管擴(kuò)張、充血,血管周圍見多量炎癥細(xì)胞滲出。實(shí)驗(yàn)7d組小鼠支氣管壁周圍仍見較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),但部分區(qū)域肺泡間隔較前有所恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)14d組小鼠細(xì)支氣管壁炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少,肺泡間隔基本恢復(fù)正常,部分區(qū)域細(xì)支氣管黏膜上皮細(xì)胞排列緊密,上皮層次稍增多,呈現(xiàn)增殖變化。 2、免疫組化染色顯示:p120在對(duì)照組小鼠氣道上皮呈現(xiàn)圍繞氣道上皮細(xì)胞連續(xù)棕黃色線狀表達(dá),在實(shí)驗(yàn)組小鼠氣道上皮的細(xì)胞膜表達(dá)呈現(xiàn)先減少后逐漸恢復(fù)趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)1d組,p120仍表現(xiàn)為沿氣道上皮細(xì)胞膜呈棕黃色連續(xù)線狀表達(dá);實(shí)驗(yàn)4d組和7d組,p120在小鼠氣道上皮細(xì)胞膜上表達(dá)明顯減少,部分區(qū)域見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá);實(shí)驗(yàn)14d組,部分區(qū)域恢復(fù)p120在小鼠氣道上皮細(xì)胞膜上棕黃色連續(xù)線狀表達(dá)。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比均有明顯的差異(p<0.05)。 3、Westernblot檢測(cè)顯示: 1)與對(duì)照組小鼠肺組織內(nèi)p120表達(dá)水平相比較,實(shí)驗(yàn)組小鼠肺組織內(nèi)p120蛋白水平呈現(xiàn)出先降低后逐漸恢復(fù)的趨勢(shì),實(shí)驗(yàn)1d組和4d組p120蛋白水平下降較明顯,7d組和14d組p120蛋白水平有所上升,但仍低于對(duì)照組。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間p120蛋白水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 2)與對(duì)照組小鼠肺組織內(nèi)NF-κB表達(dá)水平比較,實(shí)驗(yàn)組小鼠肺組織內(nèi)NF-κB表達(dá)呈現(xiàn)出先增加、后逐漸降低的動(dòng)態(tài)變化,其表達(dá)變化的趨勢(shì)與p120的變化趨勢(shì)相反,即實(shí)驗(yàn)1d組和4d組NF-κB表達(dá)增加,7d組和14d組NF-κB表達(dá)逐漸降低至接近對(duì)照組水平。實(shí)驗(yàn)1d組、4d組和7d組與對(duì)照組比較NF-κB表達(dá)差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);實(shí)驗(yàn)14d組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3)與對(duì)照組比較,小鼠肺組織內(nèi)p-IκBα呈現(xiàn)先增加后減少趨勢(shì),IκBα則先因磷酸化增加而表達(dá)減少,,后因磷酸化降低而表達(dá)增加。實(shí)驗(yàn)1d組、4d組及7d組與對(duì)照組之間差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),實(shí)驗(yàn)14d組與對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4、ELSIA結(jié)果顯示:LPS刺激C57小鼠后,IL-8的表達(dá)水平先增加后降低。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組表達(dá)水平差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論 由LPS所致的小鼠ALI,可能通過下調(diào)氣道上皮細(xì)胞內(nèi)p120表達(dá)并致其發(fā)生細(xì)胞內(nèi)定位的改變,引起IκBα發(fā)生磷酸化并降解,從而活化NF-κB信號(hào)途徑,促進(jìn)前炎癥因子IL-8等的生成與分泌,參與氣道炎癥反應(yīng)和增生修復(fù)過程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號(hào)】:R563.8
【參考文獻(xiàn)】
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1 朱敏;馬燕;李娜萍;李建莎;汪永平;王滿香;王芳;吳人亮;;GSK3β在幾種氣道上皮損傷模型中的表達(dá)[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2007年03期
本文編號(hào):1613609
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