本文選題：肺部免疫　切入點：IL-17B　出處：《重慶醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:肺炎已成為危害人類健康的主要疾病之一。目前已有證據(jù)表明肺組織細胞在調(diào)控肺部免疫和感染中發(fā)揮著重要作用。支氣管上皮細胞是抵御外部病原體的第一道防御屏障,肺成纖維細胞在肺結(jié)締組織中含量豐富,是肺間質(zhì)和血管的細胞通訊橋梁。肺部感染時,肺組織細胞通過分泌促炎細胞因子、生長因子、趨化因子以及相應的抗菌物質(zhì)積極參與固有性和獲得性免疫應答。研究肺組織細胞在肺部免疫和感染的作用,有助于預測、預防和治療肺炎及其他呼吸道疾病。IL-17B作為IL-17家族中的一員,雖在免疫性胃腸道疾病中有所提及,但其在肺部免疫中的作用尚未有報道。因此,研究肺部感染中肺組織細胞如何對IL-17B產(chǎn)生免疫應答以及通過何種分子機制調(diào)控該途徑,有助于我們了解肺部感染免疫的進程,為臨床治療提供策略。方法:收集社區(qū)獲得性肺炎(CAP)患者和正常血液標本(成人肺炎患者/正常成人=37/14,兒童肺炎患者/正常兒童=28/14),ELISA檢測兩組標本IL-17B和IL-8水平差異及相關(guān)性;Q-PCR檢測IL-17B處理人支氣管上皮細胞(BEAS-2B)和人肺成纖維細胞(HLF)后,相關(guān)細胞因子m RNA的表達差異;TNF-α、IFN-γ單獨或與IL-17B聯(lián)合處理人支氣管上皮細胞24小時后,ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-8水平的變化;用信號通路抑制劑處理人支氣管上皮細胞1小時后,再用IL-17B處理細胞24小時,ELISA檢測細胞上清IL-8水平變化;IL-17B處理BEAS-2B不同時間點,western blot檢測細胞內(nèi)信號通路蛋白的磷酸化水平;分別用銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和肺炎鏈球菌構(gòu)建小鼠肺炎模型,ELISA檢測小鼠支氣管肺泡灌洗液和血清中IL-17B和IL-8的水平。結(jié)果:CAP患者血清中IL-17B和IL-8水平顯著升高且兩者呈正相關(guān)。IL-17B可誘導人支氣管上皮細胞表達IL-8顯著升高,且具有一定的劑量依賴性。TNF-α可顯著增強IL-17B誘導BEAS-2B表達IL-8,而IFN-γ則顯著降低IL-17B刺激BEAS-2B產(chǎn)生IL-8。IL-17B刺激人支氣管上皮細胞5分鐘后,NF-κB、Akt、ERK、P38 MAPK的磷酸化水平顯著升高;采用NF-κB抑制劑、Akt抑制劑、ERK抑制劑、P38MAPK抑制劑聯(lián)合IL-17B處理BEAS-2B組較IL-17B單獨處理組的IL-8水平顯著降低,且NF-κB、Akt、ERK、P38 MAPK磷酸化水平顯著減弱。不同細菌構(gòu)建的小鼠肺炎模型中,IL-17B和IL-8的水平都顯著升高且兩者正相關(guān)。結(jié)論:肺部感染時,IL-17B通過激活人支氣管上皮細胞NF-κB、Akt、ERK、P38 MAPK信號通路,上調(diào)IL-8的表達水平,進一步促進免疫應答。
[Abstract]:Objective: pneumonia has become one of the major diseases endangering human health. At present, there is evidence that lung tissue cells play an important role in regulating lung immunity and infection. Bronchial epithelial cells are resistant to external pathogens. The first defense barrier, Lung fibroblasts are abundant in the connective tissue of the lung and act as a bridge between the interstitial cells and the blood vessels of the lung. In lung infection, lung tissue cells secrete inflammatory cytokines, growth factors, and growth factors. Chemokines and corresponding antimicrobial substances are actively involved in innate and acquired immune responses. Studying the role of lung tissue cells in lung immunity and infection helps to predict, Prevention and treatment of pneumonia and other respiratory diseases. IL-17B, as a member of the IL-17 family, has been mentioned in immune gastrointestinal diseases, but its role in lung immunity has not been reported. It is helpful to understand the immune process of lung infection by studying the immune response of lung tissue cells to IL-17B and the molecular mechanism through which this pathway is regulated. Methods: IL-17B and IL-8 levels in patients with community-acquired pneumonia (CPAP) and normal blood samples (adult pneumonia / normal adults 37 / 14, pediatric pneumonia / normal children 28 / 14) were detected by Elisa. And the Q-PCR method was used to detect the changes of human bronchial epithelial cells (BEAS-2B) and human lung fibroblasts (HLF) treated with IL-17B. The difference of expression of related cytokine m RNA and the changes of IL-8 level in the supernatant of human bronchial epithelial cells treated with TNF- 偽 -IFN- 緯 alone or in combination with IL-17B for 24 hours were detected by Elisa, and the level of IL-8 in the supernatant of human bronchial epithelial cells treated with signal pathway inhibitor for 1 hour. The changes of IL-8 level in supernatant of cells treated with IL-17B for 24 hours were assayed by Elisa. The phosphorylation level of intracellular signal pathway proteins was detected by western blot at different time points of BEAS-2B treated with IL-17B, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus were used respectively. Elisa was used to detect the levels of IL-17B and IL-8 in bronchoalveolar lavage fluid and serum of mice induced by E. coli and Streptococcus pneumoniae. The expression of IL-8 in human bronchial epithelial cells was significantly increased. In a dose-dependent manner, TNF- 偽 could significantly enhance the expression of IL-8 in BEAS-2B induced by IL-17B, while IFN- 緯 significantly decreased the phosphorylation level of P38 MAPK in human bronchial epithelial cells stimulated by BEAS-2B and IL-8.IL-17B stimulated by IL-17B for 5 minutes. The level of IL-8 in the BEAS-2B group treated with NF- 魏 B inhibitor P38 MAPK and IL-17B was significantly lower than that in the IL-17B alone group. Moreover, the phosphorylation level of NF- 魏 B and AktERKN P38 MAPK was significantly decreased. The levels of IL-17B and IL-8 were significantly increased in mice with pneumonia induced by different bacteria. Conclusion: during pulmonary infection, IL-17B activates the P38 MAPK signaling pathway in human bronchial epithelial cells (NF- 魏 B). Upregulate the expression of IL-8 and further promote the immune response.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R563.1

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本文編號：1590810