本文選題：激素抵抗型哮喘　切入點(diǎn)：PBMC　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：一.研究背景 支氣管哮喘(Bronchial asthma)是常見的氣道慢性過敏性炎癥性疾病,糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid,GC)是目前治療支氣管哮喘氣道慢性炎癥的主要藥物,尤其是引入吸入GCs。吸入GCs由于其發(fā)揮作用快,副作用小,受到人們的重視,發(fā)展迅速,臨床上應(yīng)用最廣泛,而口服或靜脈使用GC由于全身副作用較大,現(xiàn)在僅用于緩解重度支氣管哮喘急性大發(fā)作。 與其他藥物一樣,臨床上支氣管哮喘患者對(duì)激素治療表現(xiàn)出很大個(gè)體差異。絕大部分患者經(jīng)口服或吸入GCs后病情得到控制甚至臨床痊愈,但是一小部分支氣管哮喘患者應(yīng)用GCs治療無效,使用更大劑量或長(zhǎng)期應(yīng)用GCs治療,其癥狀和肺功能也不會(huì)得到明顯改善,而只能導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用,這種對(duì)激素治療不敏感的哮喘稱為激素抵抗型哮喘(Steroid-resistant asthma, SRA)。SRA是Schmart Z等在1968年報(bào)道了6例哮喘患者在大劑量GCs治療后癥狀無明顯改善而首次提出來的。目前關(guān)于SRA的診斷比較公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)是：哮喘患者如果使用足量的激素(口服潑尼松龍每天≥40mg)和足夠的療程(≥2周),而其FEV1%未能在≤75%預(yù)計(jì)值的基礎(chǔ)上增加15%,不管在吸入p受體激動(dòng)劑后FEV1%改善是否15%,即符合SRA的定義。國外報(bào)道,SRA約占支氣管哮喘患者的10%,國內(nèi)SRA患者所占比例目前缺乏相應(yīng)的數(shù)據(jù)。雖然SRA患者與一般哮喘患者相比并不算多,但在實(shí)際醫(yī)療工作中,SRA患者的診治卻耗費(fèi)了主要的醫(yī)護(hù)力量及醫(yī)療資源。隨著GCs在支氣管哮喘患者的廣泛應(yīng)用,治療這一部分患者的重要性越來越受到臨床醫(yī)生的重視,迫切需要了解SRA的發(fā)病情況,并努力尋找SRA的預(yù)測(cè)因子,把握臨床治療決策,減少治療錯(cuò)誤給患者帶來的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和嚴(yán)重的副作用。 絲切蛋白-1(cofilin-1)具有肌動(dòng)蛋白解聚因子的特征,它與肌動(dòng)蛋白解聚因子(actin depolymerization factor, ADF)和Cofilin-2共同構(gòu)成在進(jìn)化上高度保守的ADF/cofilin家族,大量表達(dá)于胚胎期和成熟組織中。ADF/cofilin家族是許多細(xì)胞進(jìn)程如細(xì)胞運(yùn)動(dòng),細(xì)胞分裂和細(xì)胞膜形成所必須的。絲切蛋白與肌動(dòng)蛋白絲的結(jié)合改變了肌絲的扭曲,從而促進(jìn)肌絲的分離和解聚。除了以上作用外,最近研究證實(shí),在激素抵抗HeLa細(xì)胞中,cofilin-1可以影響糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor, GR)的亞細(xì)胞分布,增加GR在細(xì)胞核中的分布,抑制GR的活性,它的過表達(dá),不僅引起細(xì)胞骨架的破裂,而且通過上調(diào)c-JUN減弱糖皮質(zhì)激素的功能,在GC抵抗中發(fā)揮重要作用。Nisha Vasavda和同事進(jìn)一步研究了cofilin-1在支氣管哮喘GC抵抗中的作用,他們初步證實(shí)GC不敏感患者外周血CD4+T細(xì)胞中cofilin-1的表達(dá)明顯高于GC敏感患者,同時(shí)在體外培養(yǎng)的JurkatT細(xì)胞中,cofilin-1的表達(dá)不受地塞米松的影響,其過表達(dá)可以減弱GC對(duì)細(xì)胞因子的抑制。另外cofilin-1可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞趨化,而哮喘的發(fā)生進(jìn)展過程與TH2細(xì)胞的過度活化是密切相關(guān)的。過度活化的TH2細(xì)胞釋放炎癥因子IL-33,其與TH2細(xì)胞表面的特異性受體ST2L結(jié)合后又促進(jìn)以TH2細(xì)胞為主的炎癥過程。Prefontaine,D在研究哮喘病人中發(fā)現(xiàn)哮喘病人的氣道平滑肌活檢組織中IL-33的表達(dá)量不論是基因水平還是蛋白水平都要高于正常對(duì)照組,這種趨勢(shì)在重癥哮喘中尤其明顯,IL-33可能是重癥哮喘和難治性哮喘的一種新型炎癥標(biāo)志因子。 而至今尚未有學(xué)者研究支氣管哮喘患者糖皮質(zhì)激素治療前后cofilin-1的表達(dá)水平的變化。如果與他們所做的體外實(shí)驗(yàn)一樣,地塞米松對(duì)cofilin-1的表達(dá)無影響,那么cofilin-1的過表達(dá)是否是疾病本身引起GC抵抗的一個(gè)原因,是否可以作為一個(gè)GC治療反應(yīng)性的預(yù)測(cè)因子值得進(jìn)一步的探討。為此本課題通過對(duì)三年中在門診明確診斷的支氣管哮喘患者給予最新哮喘防治指南推薦的正規(guī)的GC分級(jí)治療,觀察GC治療的反應(yīng)性,根據(jù)國際上SRA的診斷標(biāo)準(zhǔn)篩選SRA患者,了解本地區(qū)的SRA發(fā)病情況和GC治療反應(yīng)性與外周血cofilin-1表達(dá)的相關(guān)性,探索cofilin-1作為GC治療反應(yīng)性預(yù)測(cè)因子的可能。 二.研究目的 通過評(píng)估哮喘患者對(duì)激素治療的反應(yīng)性,了解本地區(qū)SRA發(fā)病情況,分析糖皮質(zhì)激素治療反應(yīng)性與cofilin-1表達(dá)水平的相關(guān)性,探索cofilin-1作為激素治療反應(yīng)性預(yù)測(cè)因子的可能,并對(duì)SRA可能的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行部分研究(GRp和IL-33的過表達(dá))。 三.材料和方法 收集2008年6月-2010年12月南方醫(yī)院呼吸科門診診斷支氣管哮喘的患者,診斷標(biāo)準(zhǔn)和嚴(yán)重程度的分級(jí)嚴(yán)格按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘組制定的最新標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。所有診斷支氣管哮喘的患者,收集其個(gè)人史、職業(yè)史、家族患病史等資料,并完成ACQ5評(píng)分和24小時(shí)癥狀評(píng)分,行肺功能檢查,篩選出FEV1%≤75%的患者作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象(共收集375例支氣管哮喘患者病歷,僅小部分患者篩選入組)。給予支氣管哮喘患者中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘組2008年推薦的GC分級(jí)治療,入組患者給予口服潑尼松40mg治療,比較治療前和治療2周后肺功能改善情況。根據(jù)國外文獻(xiàn)中提及的SRA診斷標(biāo)準(zhǔn),從所有診斷明確并給予正規(guī)治療的患者中篩選SRA患者。根據(jù)肺功能FEV1%情況,FEV1%≤75%的患者治療2周后FEV1%是否升高15%將患者分為SSA(Steroid-sentive asthma)組(23例)和SRA組(8例),對(duì)其相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行比較。 采集治療前患者外周血9m1,2m1用于檢測(cè)外周血嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),5m1用于分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),提取細(xì)胞總蛋白,通過(?)Western blotting技術(shù)檢測(cè)PBMCs中cofilin-1蛋白的表達(dá),并用Western blotting技術(shù)檢(?)(?)JPBMCs中糖皮質(zhì)激素受體beta(GRβ)的表達(dá)情況,另外2m1外周血分離血漿備用,ELISA法測(cè)定外周血血漿IL-33含量。并對(duì)治療前患者行誘導(dǎo)痰細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。治療2周后,患者復(fù)診再次收集外周靜脈血5ml用于分離單個(gè)核細(xì)胞,檢測(cè)cofilin-1和GRp表達(dá)情況。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)和中位數(shù)(Median)表示。符合正態(tài)分布兩組比較采用t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布兩組比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)(Mann-Whitney U Test),配對(duì)樣本非參數(shù)檢驗(yàn)用Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)；樣本率與總體率的比較采用二項(xiàng)分布檢驗(yàn)(Binomial Test);基本資料的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn),以a=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。外周血cofilin-1水平與肺功能指標(biāo)和細(xì)胞分類計(jì)數(shù)百分比作等級(jí)相關(guān)分析(Spersman相關(guān))。 四.結(jié)果 1、共收集375例支氣管哮喘病歷,入組23例激素敏感型哮喘患者(SSA)和8例激素抵抗型哮喘患者(SRA)。SRA發(fā)病率約為2.1%(8/375),低于國外統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)SRA的發(fā)病率10%(Binomial Test, P=0.000)。 2、兩組之間基本資料的比較： (1)兩組年齡比較無顯著差異(t=-0.055,P=0.957)。 (2)兩組性別分布無顯著差異(P=0.698)。 (3)兩組病程之間的比較無顯著差異(t=-0.297,P=0.769)。 (4)兩組ACQ5評(píng)分、白天癥狀評(píng)分、夜間癥狀評(píng)分的比較結(jié)果均無顯著差異(分別為t=-1.038,P=0.308；t=0.293,P=0.772；t=-0.635,P=0.531)。 3、口服激素治療之前,兩組患者的肺功能指標(biāo)FEV1%之間比較無明顯差異(62.7(40-70.3)vs44.8(41-51.2),Z=-1.851,P=0.064)。治療之后,SSA組患者FEV1%明顯改善(62.7(40-70.3)vs78.4(67.4-84.3),Z=4.198,P=0.000),但SRA組患者FEV1%卻無明顯變化(44.8(41-51.2)vs41.8(31.2-52.3,),Z=-0.210,P=0.833)。 4、口服激素治療之前,SRA患者誘導(dǎo)痰中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(S-NEU%)要高于SSA患者(48.5(45-62)vs35(33-41),Z=-3.216,P=0.001),而兩組誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(S-EOS%)比較無明顯差異(6(2-11)vs7(3-16),Z=-0.906,P-0.365)。兩組患者外周血中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比(B-NEU%)(57.0(53.5-64.4)vs61.3(53.7-66.8),Z=-0.711,P=0.477)和嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比(B-EOS%)(6.7(4.7-6.8)vs4.2(1.9-5.5),Z=-1.791,P=0.073)比較無明顯差異。 5、口服激素治療之前,SRA組患者外周血PBMCs cofilin-1的表達(dá)水平顯著高于SSA組(Cofilin-1/β-actin為1.82(1.29-2.24)vsl.21(1.00-1.29),Z=-2.884,P=0.004)。治療后,SSA組cofilin-1明顯下降(1.21(1.00-1.29)vs0.67(0.46-0.97),Z=-4.045,P=0.000),而SRA組cofilin-1無明顯變化(1.82(1.29-2.24)vs1.51(1.24-1.96),Z=-1.680,P=0.093)。 6、口服激素治療之前患者外周血cofilin-1的表達(dá)水平與患者FEV1%改善程度呈明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.397,P=0.027),與患者誘導(dǎo)痰中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)呈正相關(guān)(r=0.439,P=0.022),而與患者誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(r=-0.217,P=0.276)、外周血中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(r=0.074,P=0.697)和嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(r=0.251,P=0.182)均無明顯相關(guān)。治療前后cofilin-1的下降程度與患者PEF%的改善程度呈正相關(guān)(r=0.37,P=0.044)。 7、用我們的檢測(cè)方法,23例激素敏感型哮喘患者外周血PBMCs中幾乎檢測(cè)不到GRp的表達(dá),8例激素抵抗型哮喘患者經(jīng)過治療后GRp的表達(dá)明顯升高(GRp:p-actin ratio12.83*10-3vs216.4*10-3, Z=-2.521, P=0.012)。 8、口服激素治療之前,SRA患者外周血血漿IL-33(pg/m1)含量要稍高于SSA患者(87.00(71.57-110.54)vs72.76(61.23-82.76),Z=2.032,P=0.042)。 五.結(jié)論 1、廣州地區(qū)激素抵抗型哮喘的發(fā)病率較低。 2、誘導(dǎo)痰技術(shù)在氣道炎癥診斷中的發(fā)揮重要作用,SRA的炎癥表型可能為中性粒細(xì)胞炎癥為主。 3、Cofilin-1的表達(dá)水平與哮喘患者對(duì)激素治療的反應(yīng)性有關(guān),cofilin-1可能作為激素治療反應(yīng)的預(yù)測(cè)因子。 4、SRA患者經(jīng)過治療后GRp的表達(dá)明顯升高,治療前SRA患者外周血血漿IL-33含量要稍高于SSA患者。我們推測(cè)二者可能通過不同途徑參與到激素不敏感過程中來,這為提出新的治療方案奠定基礎(chǔ)。 5、cofilin-1可能通過影響糖皮質(zhì)激素受體的核轉(zhuǎn)移引起GRB的過表達(dá)。cofilin-1可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞的趨化,造成氣道中性粒細(xì)胞浸潤。cofilin-1促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的趨化,可以通過IL-33與配體結(jié)合激活TH2細(xì)胞,釋放相關(guān)炎癥因子。以上這些都可能造成患者對(duì)激素治療的反應(yīng)性低下。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R562.25

【引證文獻(xiàn)】

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1 王燕;支氣管哮喘合并變應(yīng)性鼻炎與單純支氣管哮喘之差異分析[D];吉林大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1574985