本文選題：T淋巴細胞核因子　切入點：miR-　出處：《重慶醫(yī)學(xué)》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的通過生物信息軟件預(yù)測出miR-155的靶基因,構(gòu)建miR-155靶基因熒光素酶基因報告載體,驗證其與miR-155的對應(yīng)關(guān)系。方法以數(shù)據(jù)庫miR Base為依據(jù),對miR-155進行生物信息學(xué)分析,通過Target Scan、Mir Base、Pic Tar三大軟件預(yù)測miR-155的靶基因;將設(shè)計合成的T淋巴細胞核因子5(NFAT5)及其突變序列NFAT5-mu序列分別克隆至熒光素酶報告質(zhì)粒pMIR-REPORT~(TM) Luciferace;將第4代人胚胎腎293AD(HEK-293AD)細胞按隨機數(shù)字表法分為4組:miR-155mimics+pMIR-NFAT5組、miR-155 mimics+pMIR-NFAT5-mu組、miR-155inhibitor+pMIR-NFAT5組、miR155 Negative control+pMIR-NFAT5組與對照質(zhì)粒(pRL-TK)共轉(zhuǎn)染24h后用雙熒光素酶檢測試劑盒測定相對熒光素酶活性。結(jié)果 Mirbase、TargetScan、PicTar預(yù)測交叉結(jié)果顯示,NFAT5基因3′UTR與miR-155存在結(jié)合互補位點;構(gòu)建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu重組質(zhì)粒經(jīng)酶切及測序鑒定正確;雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)顯示:pMIR-NFAT5+miR155 mimics組較pMIR-NFAT5+miR-control組熒光素酶活性降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);而其他組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu熒光素酶報告基因重組質(zhì)粒;證實miR-155對NFAT5基因mRNA 3′-UTR具有靶向調(diào)控作用,為下一步研究miR-155在吸入性肺損傷機制中的作用提供前期實驗室數(shù)據(jù)和方法。
[Abstract]:Objective to predict the target gene of miR-155 by bioinformatics software, construct the luciferase gene report vector of miR-155 target gene, and verify the corresponding relationship with miR-155. Methods based on the miR Base database, the bioinformatics analysis of miR-155 was carried out. The target genes of miR-155 were predicted by three software of Target Scan-Mir base Tar. The synthesized T lymphocyte nuclear factor 5 (NFAT5) and its mutated NFAT5-mu sequence were cloned into luciferase reporter plasmid pMIR-REPORTT) Luciferace.The fourth generation of human embryonic kidney 293ADHEK-293ADcells were divided into 4 groups according to random number table: miR-155mimics pMIR-NFAT5 group miR-155 mimics pMIR-NFAT5-mu group miR-155 mimics pMIR-NFAT5-mu group miR-155inhibitor pMIR-NFAT5. Two luciferase assay kit was used to detect the relative luciferase activity after 24 hours of co-transfection with control plasmid pRL-TK. results Mirbase TargetScann PicTar predicted the crossover of Negative pMIR-NFAT5 and pRL-TK. the results showed that there were complementary binding sites between 3UTR and miR-155 of NF-AT5 gene. The recombinant plasmid pMIR-NFAT5-mu was constructed and confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. The detection system of double luciferase reporter gene showed that the luciferase activity in the miR155 mimics group was lower than that in the pMIR-NFAT5 miR-control group. Conclusion the recombinant plasmid of pMIR-NFAT5pMIR-NFAT5-mu luciferase reporter gene was successfully constructed, and it was proved that miR-155 has targeted regulation effect on NFAT5 gene mRNA 3H-UTR. To provide experimental data and methods for the further study of the role of miR-155 in the mechanism of inhalation lung injury.
【作者單位】： 河北北方學(xué)院研究生部;解放軍第三○九醫(yī)院燒傷整形科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上資助項目(81372051,81670009) 總參軍事醫(yī)學(xué)和老年病科研基金項目(ZCWS14B06) 解放軍309醫(yī)院院管課題(2014MS-001) 北京市科技計劃“首都特色”專項基金資助項目(Z151100004015199) 全軍醫(yī)學(xué)科技青年培育項目(15QNP049)
【分類號】：R563

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本文編號：1565456