本文選題：T淋巴細(xì)胞核因子　切入點(diǎn)：miR-　出處：《重慶醫(yī)學(xué)》2017年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的通過生物信息軟件預(yù)測(cè)出miR-155的靶基因,構(gòu)建miR-155靶基因熒光素酶基因報(bào)告載體,驗(yàn)證其與miR-155的對(duì)應(yīng)關(guān)系。方法以數(shù)據(jù)庫(kù)miR Base為依據(jù),對(duì)miR-155進(jìn)行生物信息學(xué)分析,通過Target Scan、Mir Base、Pic Tar三大軟件預(yù)測(cè)miR-155的靶基因;將設(shè)計(jì)合成的T淋巴細(xì)胞核因子5(NFAT5)及其突變序列NFAT5-mu序列分別克隆至熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒pMIR-REPORT~(TM) Luciferace;將第4代人胚胎腎293AD(HEK-293AD)細(xì)胞按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組:miR-155mimics+pMIR-NFAT5組、miR-155 mimics+pMIR-NFAT5-mu組、miR-155inhibitor+pMIR-NFAT5組、miR155 Negative control+pMIR-NFAT5組與對(duì)照質(zhì)粒(pRL-TK)共轉(zhuǎn)染24h后用雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒測(cè)定相對(duì)熒光素酶活性。結(jié)果 Mirbase、TargetScan、PicTar預(yù)測(cè)交叉結(jié)果顯示,NFAT5基因3′UTR與miR-155存在結(jié)合互補(bǔ)位點(diǎn);構(gòu)建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu重組質(zhì)粒經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定正確;雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)顯示:pMIR-NFAT5+miR155 mimics組較pMIR-NFAT5+miR-control組熒光素酶活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);而其他組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒;證實(shí)miR-155對(duì)NFAT5基因mRNA 3′-UTR具有靶向調(diào)控作用,為下一步研究miR-155在吸入性肺損傷機(jī)制中的作用提供前期實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)和方法。
[Abstract]:Objective to predict the target gene of miR-155 by bioinformatics software, construct the luciferase gene report vector of miR-155 target gene, and verify the corresponding relationship with miR-155. Methods based on the miR Base database, the bioinformatics analysis of miR-155 was carried out. The target genes of miR-155 were predicted by three software of Target Scan-Mir base Tar. The synthesized T lymphocyte nuclear factor 5 (NFAT5) and its mutated NFAT5-mu sequence were cloned into luciferase reporter plasmid pMIR-REPORTT) Luciferace.The fourth generation of human embryonic kidney 293ADHEK-293ADcells were divided into 4 groups according to random number table: miR-155mimics pMIR-NFAT5 group miR-155 mimics pMIR-NFAT5-mu group miR-155 mimics pMIR-NFAT5-mu group miR-155inhibitor pMIR-NFAT5. Two luciferase assay kit was used to detect the relative luciferase activity after 24 hours of co-transfection with control plasmid pRL-TK. results Mirbase TargetScann PicTar predicted the crossover of Negative pMIR-NFAT5 and pRL-TK. the results showed that there were complementary binding sites between 3UTR and miR-155 of NF-AT5 gene. The recombinant plasmid pMIR-NFAT5-mu was constructed and confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. The detection system of double luciferase reporter gene showed that the luciferase activity in the miR155 mimics group was lower than that in the pMIR-NFAT5 miR-control group. Conclusion the recombinant plasmid of pMIR-NFAT5pMIR-NFAT5-mu luciferase reporter gene was successfully constructed, and it was proved that miR-155 has targeted regulation effect on NFAT5 gene mRNA 3H-UTR. To provide experimental data and methods for the further study of the role of miR-155 in the mechanism of inhalation lung injury.
【作者單位】： 河北北方學(xué)院研究生部;解放軍第三○九醫(yī)院燒傷整形科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目(81372051,81670009) 總參軍事醫(yī)學(xué)和老年病科研基金項(xiàng)目(ZCWS14B06) 解放軍309醫(yī)院院管課題(2014MS-001) 北京市科技計(jì)劃“首都特色”專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目(Z151100004015199) 全軍醫(yī)學(xué)科技青年培育項(xiàng)目(15QNP049)
【分類號(hào)】：R563

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 歐陽為明,張繼帥,謝鑫,金伯泉;pCDM8-GFP報(bào)告載體的構(gòu)建及鑒定[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

2 劉貝娜;何英;王爽;;PLUNC基因啟動(dòng)子區(qū)熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建與鑒定[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期

3 謝景航;鄒佳寧;唐聰;楊家森;羅學(xué)剛;奚濤;;人SMYD3基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建與分析[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年02期

4 金彩霞;李文林;李元杰;徐方;胡以平;;胰島素啟動(dòng)子在肝干細(xì)胞分化研究中的應(yīng)用[J];癌變·畸變·突變;2010年03期

5 隋江東;李華;吳玉章;;NLRP1基因啟動(dòng)子區(qū)熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建與鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2011年04期

6 陳澤志;李勁頻;杜偉偉;劉競(jìng)麗;莫雪安;;FOXP3基因3’-UTR段雙熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建及其活性鑒定[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年02期

7 金彩霞;李文林;朱吉;張南;田棣;胡以平;;胰十二指腸同源盒基因-1啟動(dòng)子在肝干細(xì)胞分化研究中的應(yīng)用[J];癌變.畸變.突變;2006年05期

8 譚靖;蔣先鎮(zhèn);何樂業(yè);蔣志強(qiáng);湯育新;姚鯤;陳兵海;薛娟;;構(gòu)建p53雙熒光報(bào)告載體及其功能驗(yàn)證[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年11期

9 ;[J];;年期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 邵鳳娟;成軍;馬英驥;洪源;郭江;王巧俠;;重組人肝再生增強(qiáng)因子下調(diào)鈣結(jié)合蛋白S100A11基因表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

2 鄧廷賢;龐春英;王建;楊春艷;鄭海英;黃芬香;覃廣勝;楊炳壯;梁賢威;;熒光素酶基因報(bào)告載體的構(gòu)建研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十六屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

3 李偉;梁珊珊;徐海滄;宋雪霏;;含MMP-26啟動(dòng)子區(qū)域蟲螢光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建及其活性檢測(cè)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 劉真;幽門螺桿菌感染相關(guān)microRNAs的篩選、鑒定及功能研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 沈艷;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黃瓜花葉病毒移動(dòng)報(bào)告體系研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 徐麗萍;基于熒光報(bào)告載體的農(nóng)桿菌atu4860基因啟動(dòng)子調(diào)控機(jī)理研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

3 馮輝;一個(gè)新型細(xì)菌單雜交系統(tǒng)報(bào)告載體的構(gòu)建及其在轉(zhuǎn)錄因子發(fā)現(xiàn)中的應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

4 張秋美;釀酒酵母乙醇響應(yīng)報(bào)告載體的構(gòu)建和研究[D];大連理工大學(xué);2009年

5 李英鎮(zhèn);胸腺素β4真核表達(dá)載體及α肌球蛋白重鏈啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)報(bào)告載體的構(gòu)建及其應(yīng)用[D];暨南大學(xué);2014年

6 劉燁;小鼠胚胎干細(xì)胞中DMRT1對(duì)Sox2的調(diào)控作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

7 李軍華;TPT1對(duì)OCT4基因表達(dá)調(diào)控的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：1565456