本文關(guān)鍵詞：MiR-125b在肺結(jié)核患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞的水平與體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞生物性行為的關(guān)系　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 外周血單個(gè)核細(xì)胞 肺結(jié)核 RAF1 mi R-125b THP-1巨噬細(xì)胞 mi R-125b RAF1 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞活力

【摘要】：第一部分:肺結(jié)核患兒和正常兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞的miR-125b及其靶基因RAF1的表達(dá)檢測(cè)目的:分別檢測(cè)肺結(jié)核患兒和正常兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞中mi R-125b水平,及靶基因RAF1的m RNA和蛋白水平。方法:分別分離出已收集血液標(biāo)本中外周血單個(gè)核細(xì)胞。利用熒光定量PCR檢測(cè)mi R-125b的表達(dá)及其RAF1的m RNA水平;利用蛋白免疫印記技術(shù)檢測(cè)RAF1的蛋白水平。結(jié)果:1.相對(duì)于正常兒童,肺結(jié)核患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞中mi R-125b的表達(dá)下調(diào);2.相對(duì)于正常兒童,肺結(jié)核患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞中RAF1的m RNA和蛋白水平都升高。結(jié)論:肺結(jié)核患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞中mi R-125b表達(dá)下調(diào),其靶基因RAF1表達(dá)升高;mi R-125b靶向調(diào)控RAF1可能參與兒童結(jié)核免疫反應(yīng)機(jī)制。第二部分:mi R-125b與體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞生物學(xué)行為關(guān)系的研究目的:在THP-1巨噬細(xì)胞中,檢測(cè)mi R-125b是否調(diào)控RAF1的表達(dá);并觀察mi R-125b對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞中細(xì)胞凋亡和細(xì)胞活力的調(diào)節(jié)。方法:THP-1巨噬細(xì)胞分為四組,分別為mi R-mimic組、NC-mimic組、mi R-inhibitor組及NC-inhibitor組,利用Lipofectamine TM RNAi MIX分別轉(zhuǎn)染mi R-125b模擬物(mi R-125b mimic)、陰性對(duì)照模擬物(NC-mimic)、mi R-125b抑制物(mi R-125b inhibitor)以及陰性對(duì)照抑制物(NC-inhibitor),轉(zhuǎn)染后,孵育箱中共培養(yǎng)48h;利用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞中RAF1表達(dá),利用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的膜聯(lián)素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)雙染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞的細(xì)胞凋亡,CCK-8法檢測(cè)巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活力。結(jié)果:1,在THP-1巨噬細(xì)胞中,mi R-mimic組,相比較其對(duì)照組NC-mimic組,即mi R-125b高表達(dá)時(shí),RAF1表達(dá)下調(diào);相比較其對(duì)照組NC-inhibitor組,mi R-inhibitor組,即mi R-125b表達(dá)被抑制時(shí),RAF1表達(dá)上調(diào)。2,在THP-1巨噬細(xì)胞中,相對(duì)于NC-mimic組,mi R-mimic組,高表達(dá)mi R-125b,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,細(xì)胞活力降低;相對(duì)于NC-inhibitor組,mi R-inhibitor組,mi R-125b表達(dá)被抑制時(shí),抑制巨噬細(xì)胞凋亡,細(xì)胞活力升高。結(jié)論:在THP-1巨噬細(xì)胞中存在mi R-125b對(duì)靶基因RAF1的調(diào)控;mi R-125b的表達(dá)升高,促進(jìn)巨噬細(xì)胞凋亡,降低細(xì)胞活力;mi R-125b的表達(dá)被抑制時(shí),抑制細(xì)胞凋亡,提高細(xì)胞活力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R521

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本文編號(hào)：1354706