本文關鍵詞：煙草煙霧對人巨噬細胞超微結構的影響及紅霉素的作用　出處：《廣西醫(yī)科大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的探討煙草煙霧對人巨噬細胞超微結構的影響及紅霉素(Erythromycin, EM)的作用。方法體外培養(yǎng)人類單核細胞系U937細胞,用佛波脂(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA,10ng/ml)誘導分化人巨噬細胞,用煙草煙霧提取物(Cigarette Smoke Extract,CSE)處理人巨噬細胞或EM預處理后用CSE刺激人巨噬細胞,(一)將細胞分組：①空白對照組；②CSE組(加入1%CSE孵育24小時)；③CSE+EM24h組(1μg/ml紅霉素預孵育24h后,加入1%CSE繼續(xù)孵育24小時);④CSE+EM48h組(1μg/ml紅霉素預孵育48h后,加入1%CSE繼續(xù)孵育24小時)。(二)取孵育后各組細胞經預包埋、固定、漂洗、脫水、滲透、聚合、修塊、切片后,經醋酸鈾及檸檬酸鉛染色后,用電子顯微鏡觀察各處理組細胞超微結構。(三)取各組上清液分別離心去除沉淀后,避光加入2’,7’_二氯二氫熒光素二乙酯(2’,7'-dichlorofluorescin-diacetat, DCFH-DA),使其濃度為10uM,37℃下避光孵育30分鐘后,立即予熒光酶標儀檢測各組熒光強度。結果(一)各組人巨噬細胞超微結構的觀察空白對照組：細胞圓或橢圓形,細胞胞質內可見少許線粒體、粗面內質網及溶酶體。絕大多數(shù)表面有許多微絨毛樣突起,核偏心位,呈圓形或橢圓形,少數(shù)呈不規(guī)則形,染色質聚積于核膜下。CSE組：與空白對照組比較,煙草煙霧組中細胞胞質內不僅可見溶酶體、線粒體、內質網數(shù)量明顯增多,亦出現(xiàn)線粒體嵴排列紊亂,嵴斷裂逐漸崩解形成空泡(線粒體空泡化改變)、線粒體基質電子密度增高濃聚,次級溶酶體與初級溶酶體同時存在,甚至可見多個溶酶體聚集融合、粗面內質網輕度擴張的、細胞內基質較濃聚,即粗面內質網脫顆粒現(xiàn)象較明顯。CSE+EM組：與CSE組比較,線粒體數(shù)量減少,未見空泡化改變,溶酶體數(shù)量減少,未見次級溶酶體,內質網數(shù)量減少、無擴張,粗面內質網脫顆�，F(xiàn)象較CSE組減少。(二)CSE刺激及EM干預對人巨噬細胞活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)釋放量的影響：CSE組ROS釋放量明顯高于空白對照組(P0.05),CSE+EM24h組ROS釋放量較CSE組減少(P0.05),CSE+EM48h組ROS釋放量明顯減少(P0.05)。結論1、煙草煙霧刺激人巨噬細胞引起細胞超微結構的改變,表現(xiàn)為線粒體的腫脹及空泡化改變,溶酶體數(shù)量的增多,出現(xiàn)多個溶酶體聚集融合,粗面內質網擴張及脫顆�，F(xiàn)象；而紅霉素預處理后可改善線粒體腫脹及空泡化改變,溶酶體數(shù)量減少,粗面內質網未見擴張,粗面內質網脫顆�，F(xiàn)象減少。2、煙草煙霧刺激人巨噬細胞釋放活性氧明顯增多,紅霉素預處理后可降低活性氧釋放量,提示可能是通過保護線粒體功能而抑制ROS的釋放,這可能是紅霉素抗氧化應激作用的機理。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of tobacco smoke on the ultrastructure of human macrophages and the effect of Erythromycin (EM). The method of in vitro human monocytic U937 cells cultured with phorbol ester (Phorbol 12-myristate, 13-acetate, PMA, 10ng/ml) induced differentiation of human macrophages with cigarette smoke extract (Cigarette Smoke, Extract, CSE) treatment of human macrophages or EM after pretreatment with CSE stimulated macrophages, (a) were divided into four groups: blank control group II; group CSE (adding 1%CSE incubated for 24 hours); group CSE+EM24h (1 g/ml erythromycin pre incubated 24h, add 1%CSE to 24 h of incubation); the CSE+EM48h group (1 g/ml erythromycin pre incubated 48h, add 1%CSE to incubated for 24 hours). (two) after incubation, the cells in each group were pre embedded, fixed, rinsed, dehydrated, permeated, polymerized, repaired and sliced, then stained with uranyl and lead citrate, and the ultrastructure of cells in each treatment group was observed by electron microscope. (three) from the supernatant were removed by centrifugation after precipitation, light with 2 ', 7' _ two chloro two ethyl two hydrogen fluorescence (2, 7'-dichlorofluorescin-diacetat, DCFH-DA), the concentration of 10uM, 37 DEG C under light after 30 min of incubation, immediately to the fluorescence microplate fluorescence intensity detected. Results (1) the ultrastructure of macrophages in each group was observed in blank control group: round or oval cells, and a few mitochondria, rough endoplasmic reticulum and lysosome in cytoplasm. Most of the surface there are many microvilli, nuclear eccentric, round or oval, a few irregular chromatin accumulation in the nuclear membrane. CSE group: compared with the control group, the cell group in tobacco smoke matter not only visible lysosomes, mitochondria and endoplasmic reticulum also significantly increased the number of mitochondrial cristae disordered cristae gradually disintegrated vacuoles (change mitochondrial vacuolation), mitochondrial matrix electron density increased concentration, there are secondary lysosomes and primary lysosomes at the same time, even more than the visible lysosomes and endoplasmic reticulum aggregation and fusion of mild dilatation and intracellular matrix concentration, i.e. the degranulation of rough endoplasmic reticulum is evident. Group CSE+EM: compared with group CSE, the number of mitochondria decreased, no vacuolation changed, the number of lysosomes decreased, no secondary lysosomes were found, the number of endoplasmic reticulum decreased, no expansion was found, and rough granular endoplasmic reticulum degranulation was reduced compared with group CSE. (two) the effect of CSE stimulation and EM intervention on the release of Reactive Oxygen Species (ROS) in human macrophages: the ROS release in CSE group was significantly higher than that in the blank control group (P0.05), the release of CSE+EM24h in CSE+EM24h group was less than that in the control group, and the release rate of group B was significantly reduced. Due to the change of ultrastructure of human macrophage stimulating conclusion 1, tobacco smoke, showed altered mitochondrial swelling and vacuolization, increase the number of lysosomes, multiple aggregation lysosome fusion, rough endoplasmic reticulum expansion and degranulation; while erythromycin preconditioning may improve mitochondrial swelling and vacuolization, reduce the number of lysosomes, no rough endoplasmic reticulum expansion, reduced rough endoplasmic reticulum degranulation. 2, tobacco smoke stimulates the release of reactive oxygen species from human macrophages. Erythromycin can decrease the release of reactive oxygen species after pretreatment. It suggests that the release of ROS may be inhibited by the protection of mitochondrial function. This may be the mechanism of erythromycin anti oxidative stress.
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R563.9

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