發(fā)布時間：2017-12-25 15:10

  本文關(guān)鍵詞：大鼠矽肺噬菌體單鏈抗體庫構(gòu)建　出處：《中國職業(yè)醫(yī)學(xué)》2016年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的利用噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建大鼠矽肺噬菌體單鏈抗體(Sc Fv)庫,為后續(xù)篩選矽肺特異性Sc Fv奠定基礎(chǔ)。方法無特定病原體級雄性SD大鼠24只,予質(zhì)量濃度為100 g/L的二氧化硅混懸液1.0 m L經(jīng)支氣管一次性灌注染塵,構(gòu)建矽肺模型。于造模后第3、6、9和12周分別取6只大鼠周圍血淋巴細胞混勻,以Trizol法提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA;利用簡并引物進行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR),擴增抗體重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)的基因,用T4 DNA連接酶連接獲得ScFv基因片段,將其與噬菌粒PCANTAB-5e重組,采用氯化鈣轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸埃希氏菌(E.coli)TG1中,經(jīng)M13K07輔助噬菌體超感染,構(gòu)建矽肺模型大鼠噬菌體ScFv庫;隨機挑取10個菌落進行質(zhì)粒雙酶切鑒定。結(jié)果矽肺模型大鼠周圍血總RNA瓊脂糖凝膠電泳可見2條明顯28S和18S條帶,總RNA完整性較好;VH基因片段大小約為400 bp,VL基因片段大小約為350 bp,重組后Sc Fv基因片段長度約為750 bp;M13K07輔助噬菌體擴增后鋪雙層瓊脂平板,見小米粒大小、透亮的噬菌斑,噬菌體滴度為1.35×1016pfu/L;以重組噬菌粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coli TG1后鋪氨芐青霉素抗性固體平板,計算菌落數(shù)為8.0×10~9cfu/L;陽性克隆質(zhì)粒PCR和雙酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳顯示陽性插入率為90.0%,所建Sc Fv庫庫容為7.2×10~9cfu/L。結(jié)論成功構(gòu)建矽肺模型大鼠噬菌體Sc Fv庫,其庫容量及多樣性可為后續(xù)篩選提供保障。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81273039)
【分類號】：R135.2
【正文快照】： 矽肺是由于長期吸入含有游離二氧化硅粉塵而引起的以肺組織廣泛纖維化為主要特征的職業(yè)病,是目前危害我國粉塵作業(yè)工人健康最嚴(yán)重的職業(yè)病之一,其發(fā)病機制尚不清楚。矽肺發(fā)生發(fā)展過程中既存在大量細胞因子誘導(dǎo)肺纖維化發(fā)生的效應(yīng)[1-2],也與免疫反應(yīng)具有一定的關(guān)聯(lián)性[3-5]。有

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6 山內(nèi)忠平;王葆茹;;小鼠,大鼠飼育室環(huán)境溫度條件的實驗性探討[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;1982年01期

7 丁正梁;鄒惠莉;舒家模;;SD大鼠臨床生物化學(xué)正常值測定[J];上海實驗動物科學(xué);1986年03期

8 孟憲忠,于維漢,曾紹娟,周葆初,康保安;錳對大鼠硒代謝的影響[J];營養(yǎng)學(xué)報;1987年02期

9 肖云;汞在大鼠生后發(fā)育過程中的體內(nèi)分布和排泄[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1987年04期

10 許保全;;飲食鎂對大鼠氟化物生物效力的影響[J];地方病譯叢;1988年03期

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2 蔡東聯(lián);胡同杰;趙繼軍;曹翔;蘇峰;;生血靈治療SD大鼠急性貧血效果觀察[A];中國營養(yǎng)學(xué)會第六屆臨床營養(yǎng)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];1997年

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5 王勁;柳啟沛;黃宗枝;;幾種不同鈣化合物對大鼠鋁、鉛代謝的影響(摘錄)[A];營養(yǎng)健康新觀察（第三十八期）：營養(yǎng)因素與骨髓健康[C];2009年

6 梁銳;王軍波;;核苷酸喂養(yǎng)大鼠的安全性評價[A];北京市營養(yǎng)學(xué)會第四屆會員代表大會暨膳食與健康研討會論文集[C];2010年

7 孟紫強;秦國華;白巨利;張建彪;張欣;楊振華;;二氧化硫吸入后大鼠肺組織基因表達譜的改變[A];中國毒理學(xué)會第四屆全國學(xué)術(shù)會議論文（摘要）集[C];2005年

8 江新鳳;邵宛芳;劉彩霞;楊普香;;復(fù)合茶湯調(diào)節(jié)SD大鼠血脂水平的研究[A];第十五屆中國科協(xié)年會第20分會場：科技創(chuàng)新與茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展論壇論文集[C];2013年

9 鐘華敏;駱明勇;謝永強;;短期錳接觸對成年大鼠生長發(fā)育的毒性影響[A];中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會成立30周年紀(jì)念大會暨2010中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會學(xué)術(shù)大會壁報展示論文[C];2010年

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4 范瑛;參考劑量雙酚A對大鼠水迷宮行為影響的研究[D];華中科技大學(xué);2014年

5 井明艷;鋅影響大鼠生長發(fā)育及其與降鈣素基因相關(guān)肽調(diào)控攝食的機理研究[D];浙江大學(xué);2007年

6 蔡愛芳;運動對二VA英致大鼠脂質(zhì)合成代謝障礙的干預(yù)作用及其機制研究[D];北京體育大學(xué);2013年

7 郭曉英;氟對大鼠肝臟功能和形態(tài)的影響及與氧化應(yīng)激關(guān)系的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2003年

8 黃云飛;吸煙對雄性大鼠生殖毒性的實驗研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

9 彭國慶;甲醛誘導(dǎo)雌性大鼠卵巢及子宮毒性研究[D];中南大學(xué);2011年

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1 張林;膠原樣結(jié)構(gòu)巨噬細胞受體介導(dǎo)的線粒體凋亡在染矽塵大鼠肺纖維化中的作用[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

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3 高輝;發(fā)芽糙米對發(fā)育期大鼠低水平鉛暴露損害的拮抗作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 華辰風(fēng);Kisspeptins/GPR54系統(tǒng)在ZEA誘導(dǎo)的雌性大鼠青春期啟動提前中的作用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

5 梁瀟;維生素E對苯并[a]芘誘導(dǎo)雄性SD大鼠的神經(jīng)毒性的保護作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 伍應(yīng)松;γ-氨基丁酸對高溫條件下大鼠生長、免疫及繁殖功能的影響研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 鄧洋;啤酒對大鼠血液動力學(xué)和抗氧化作用影響的實驗研究[D];內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院;2009年

8 王艷;左旋肉堿改善鎘致SD大鼠神經(jīng)毒性作用的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

9 陳麗麗;不同劑量橄欖油對大鼠血膽固醇水平的影響及其機制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2009年

10 劉琦;鉛對大鼠動脈血管細胞增生和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號：1333325