發(fā)布時(shí)間：2017-12-25 15:10

  本文關(guān)鍵詞：大鼠矽肺噬菌體單鏈抗體庫(kù)構(gòu)建　出處：《中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué)》2016年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的利用噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建大鼠矽肺噬菌體單鏈抗體(Sc Fv)庫(kù),為后續(xù)篩選矽肺特異性Sc Fv奠定基礎(chǔ)。方法無(wú)特定病原體級(jí)雄性SD大鼠24只,予質(zhì)量濃度為100 g/L的二氧化硅混懸液1.0 m L經(jīng)支氣管一次性灌注染塵,構(gòu)建矽肺模型。于造模后第3、6、9和12周分別取6只大鼠周圍血淋巴細(xì)胞混勻,以Trizol法提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA;利用簡(jiǎn)并引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR),擴(kuò)增抗體重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)的基因,用T4 DNA連接酶連接獲得ScFv基因片段,將其與噬菌粒PCANTAB-5e重組,采用氯化鈣轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸埃希氏菌(E.coli)TG1中,經(jīng)M13K07輔助噬菌體超感染,構(gòu)建矽肺模型大鼠噬菌體ScFv庫(kù);隨機(jī)挑取10個(gè)菌落進(jìn)行質(zhì)粒雙酶切鑒定。結(jié)果矽肺模型大鼠周圍血總RNA瓊脂糖凝膠電泳可見2條明顯28S和18S條帶,總RNA完整性較好;VH基因片段大小約為400 bp,VL基因片段大小約為350 bp,重組后Sc Fv基因片段長(zhǎng)度約為750 bp;M13K07輔助噬菌體擴(kuò)增后鋪雙層瓊脂平板,見小米粒大小、透亮的噬菌斑,噬菌體滴度為1.35×1016pfu/L;以重組噬菌粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coli TG1后鋪氨芐青霉素抗性固體平板,計(jì)算菌落數(shù)為8.0×10~9cfu/L;陽(yáng)性克隆質(zhì)粒PCR和雙酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳顯示陽(yáng)性插入率為90.0%,所建Sc Fv庫(kù)庫(kù)容為7.2×10~9cfu/L。結(jié)論成功構(gòu)建矽肺模型大鼠噬菌體Sc Fv庫(kù),其庫(kù)容量及多樣性可為后續(xù)篩選提供保障。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81273039)
【分類號(hào)】：R135.2
【正文快照】： 矽肺是由于長(zhǎng)期吸入含有游離二氧化硅粉塵而引起的以肺組織廣泛纖維化為主要特征的職業(yè)病,是目前危害我國(guó)粉塵作業(yè)工人健康最嚴(yán)重的職業(yè)病之一,其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。矽肺發(fā)生發(fā)展過(guò)程中既存在大量細(xì)胞因子誘導(dǎo)肺纖維化發(fā)生的效應(yīng)[1-2],也與免疫反應(yīng)具有一定的關(guān)聯(lián)性[3-5]。有

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6 山內(nèi)忠平;王葆茹;;小鼠,大鼠飼育室環(huán)境溫度條件的實(shí)驗(yàn)性探討[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;1982年01期

7 丁正梁;鄒惠莉;舒家模;;SD大鼠臨床生物化學(xué)正常值測(cè)定[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1986年03期

8 孟憲忠,于維漢,曾紹娟,周葆初,康保安;錳對(duì)大鼠硒代謝的影響[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);1987年02期

9 肖云;汞在大鼠生后發(fā)育過(guò)程中的體內(nèi)分布和排泄[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1987年04期

10 許保全;;飲食鎂對(duì)大鼠氟化物生物效力的影響[J];地方病譯叢;1988年03期

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5 王勁;柳啟沛;黃宗枝;;幾種不同鈣化合物對(duì)大鼠鋁、鉛代謝的影響(摘錄)[A];營(yíng)養(yǎng)健康新觀察（第三十八期）：營(yíng)養(yǎng)因素與骨髓健康[C];2009年

6 梁銳;王軍波;;核苷酸喂養(yǎng)大鼠的安全性評(píng)價(jià)[A];北京市營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)第四屆會(huì)員代表大會(huì)暨膳食與健康研討會(huì)論文集[C];2010年

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9 鐘華敏;駱明勇;謝永強(qiáng);;短期錳接觸對(duì)成年大鼠生長(zhǎng)發(fā)育的毒性影響[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)成立30周年紀(jì)念大會(huì)暨2010中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)大會(huì)壁報(bào)展示論文[C];2010年

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3 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 潘洪志 陳文華 李輝;核酸對(duì)鉛中毒損傷修復(fù)的影響[N];保健時(shí)報(bào);2009年

4 本報(bào)記者 孫國(guó)根;“霧霾使鮮肺6天變黑”太夸張[N];健康報(bào);2013年

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3 李升和;微量元素硼對(duì)大鼠營(yíng)養(yǎng)和毒性作用及作用機(jī)理的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 范瑛;參考劑量雙酚A對(duì)大鼠水迷宮行為影響的研究[D];華中科技大學(xué);2014年

5 井明艷;鋅影響大鼠生長(zhǎng)發(fā)育及其與降鈣素基因相關(guān)肽調(diào)控?cái)z食的機(jī)理研究[D];浙江大學(xué);2007年

6 蔡愛芳;運(yùn)動(dòng)對(duì)二VA英致大鼠脂質(zhì)合成代謝障礙的干預(yù)作用及其機(jī)制研究[D];北京體育大學(xué);2013年

7 郭曉英;氟對(duì)大鼠肝臟功能和形態(tài)的影響及與氧化應(yīng)激關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2003年

8 黃云飛;吸煙對(duì)雄性大鼠生殖毒性的實(shí)驗(yàn)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

9 彭國(guó)慶;甲醛誘導(dǎo)雌性大鼠卵巢及子宮毒性研究[D];中南大學(xué);2011年

10 盧靜;大豆肽對(duì)大鼠的心血管效應(yīng)及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2006年

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2 趙琪;酪氨酸氧化產(chǎn)物對(duì)大鼠心肌組織氧化損傷影響的研究[D];江南大學(xué);2015年

3 高輝;發(fā)芽糙米對(duì)發(fā)育期大鼠低水平鉛暴露損害的拮抗作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 華辰風(fēng);Kisspeptins/GPR54系統(tǒng)在ZEA誘導(dǎo)的雌性大鼠青春期啟動(dòng)提前中的作用[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

5 梁瀟;維生素E對(duì)苯并[a]芘誘導(dǎo)雄性SD大鼠的神經(jīng)毒性的保護(hù)作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

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7 鄧洋;啤酒對(duì)大鼠血液動(dòng)力學(xué)和抗氧化作用影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院;2009年

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10 劉琦;鉛對(duì)大鼠動(dòng)脈血管細(xì)胞增生和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1333325