發(fā)布時間：2017-12-25 04:34

  本文關鍵詞：微粒在COPD患者BALF中變化的研究　出處：《第三軍醫(yī)大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究背景與目的： 微粒(microparticles, MPs)是一種微小的、富含磷脂的細胞膜碎片,由細胞凋亡或受到刺激后以出芽方式產生,其直徑為50nm-2μm,含有多種細胞表面受體以及mRNA等,具有多種生物學功能。在受到刺激或凋亡等情況下能夠產生相應微粒的細胞稱之為“親代細胞”(Origin cells)。目前根據(jù)來源不同可將微粒分為巨噬細胞微粒(Macrophage-derived microparticles, MMPs)、T淋巴細胞微粒(T Lymphocyte-derived microparticles, TLMPs)、B淋巴細胞微粒(B Lymphocyte-derived microparticles, BLMPs)、血小板微粒(Platelet microparticles, PMPs)以及內皮細胞微粒(Endothelial microparticles, EMPs)等。微粒被認為反映了細胞增殖、受刺激或者凋亡的一個動態(tài)平衡,當這種動態(tài)平衡由于各種原因被打破后將導致血循環(huán)中微粒的大量生成,它們能夠攜帶生物活性分子至靶器官或至其他微粒,刺激產生細胞因子、生長因子、組織因子等,引發(fā)多種生物學效應,破壞機體內環(huán)境的相對穩(wěn)定,并在很大程度上影響疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉歸。新近研究表明,微粒具有促炎、促凝、調節(jié)免疫等作用,與炎癥、自身免疫性疾病、腫瘤、敗血癥、瘧疾、血液系統(tǒng)疾病等密切相關。 而作為人體內唯一由兩套血液供應的肺臟,微粒對它的影響可能是巨大的。我們的前期體外研究發(fā)現(xiàn)淋巴細胞微粒(LMPs)能抑制人支氣管上皮細胞生長,使其生長周期阻滯在G1期,而這種生長周期阻滯作用與P21、P27表達上調有關,并且可能是通過AKT/FOXO1信號通路來實現(xiàn)的；該結果提示,微粒可能與呼吸系統(tǒng)疾病也存在著密切關系，很有必要進行深入研究。慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructivepulmonary disease, COPD）是最常見的慢性氣道炎癥性疾病，其患病人數(shù)多、病死率高并嚴重影響患者的勞動能力和生活質量；現(xiàn)已證實巨噬細胞、淋巴細胞、內皮細胞及血小板等在COPD疾病進程中具有重要作用。目前上述細胞產生的微粒在COPD患者體內的含量及變化尚未知，有關微粒在COPD中的相關研究可能會大大開闊該領域的研究視野。本研究擬檢測不同病期COPD患者支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavage fluid, BALF）中MMPs、TLMPs、BLMPs、PMPs以及EMPs的變化情況，初步探討各種微粒與COPD的可能關系，以期為臨床工作中對COPD病情及預后的評估提供一個新的檢測指標。 方法： 本試驗采集COPD患者以及對照者的BALF。利用流式細胞技術檢測灌洗液中的MMPs、TLMPs、BLMPs、EMPs、PMPs的絕對計數(shù)。 具體如下： 1．BALF的采集 1.1BALF的收集：收集COPD不同分期的住院、門診患者及對照者的BALF，在行纖維支氣管鏡支氣管肺泡灌洗術前先予以阿托品0.5mg肌內注射，并采用2%利多卡因溶液對氣道實施局部麻醉。用20ml無菌生理鹽水(37℃，PH7.3)選擇支氣管的第三或者第四級亞段進行灌洗[1][2][3][4][5]。將灌洗液最大限度吸出（回收率約50%），注意在進行支氣管肺泡灌洗操作過程中要動作輕柔，不能額外增加研究對象的痛苦。其中含有痰液、血液或者碳沫的標本視為不合格。將符合標準的灌洗液置入冰盒迅速送往實驗室，進行離心處理[6]。 1.2BALF預處理：將符合標準的灌洗液在4℃條件下2000×g離心10min，每次離心后留取上清液，丟棄底部較渾濁液體，重復以上操作3次后，將處理好的上清液移入一次性微量離心（EP）管中（100μL/管）。 2．流式細胞技術檢測各組BALF中MMPs、TLMPs、BLMPs、PMPs、EMPs的計數(shù)： 在避光條件下將AECOPD組、COPD穩(wěn)定期組、對照組BALF各分為6管（100μL/管），在第1管中加入CD14抗人抗體5μL標記MMPs，第2管中加入CD4抗人抗體5μL標記CD4+TLMPs，第3管中加入CD8抗人抗體5μL標記CD8+TLMPs，第4管中加入CD20抗人抗體20μL標記BLMPs，第5管中加入E(5μL)+CD142(5μL)抗人抗體標記PMPs，第6管中加入CD41（5μL）+CD142（5μL）抗人抗體標記EMPs。震蕩混勻后，分別上機檢測[1][2][3]。 結果： 1． BALF采集情況 符合入選條件用于研究TLMPs及MMPs變化情況的BALF包括AECOPD組患者35例，COPD穩(wěn)定期組患者12例，對照組31例。符合入選條件用于研究BLMPs變化情況的BALF包括AECOPD組患者33例，COPD穩(wěn)定期組患者12例，對照組31例。符合入選條件用于研究PMPs及EMPs的BALF包括AECOPD組患者35例，COPD穩(wěn)定期組患者12例，對照組20例。 2． COPD患者各種微粒數(shù)目變化情況 2.1MMPs數(shù)目變化情況：與對照組[45（1-2296）]相比，AECOPD組[906（25-15537）]和COPD穩(wěn)定期組[737（33-10149）]MMPs數(shù)目顯著增高（P＜0.05），但AECOPD組MMPs數(shù)目與COPD穩(wěn)定期組相比無統(tǒng)計學意義（P0.05）。多組間比較，MMPs數(shù)目具有顯著差異（P＜0.05）。 2.2CD8+TLMPs數(shù)目變化情況：AECOPD組CD8+TLMPs數(shù)目[368（3100-35159）]顯著高于COPD穩(wěn)定期組[1020.5(46-3297)]和對照組[29(3-1012)]（P＜0.05），COPD穩(wěn)定期組CD8+TLMPs數(shù)目顯著高于對照組（P＜0.05）。多組間比較，CD8+TLMPs數(shù)目具有顯著差異（P＜0.05）。 2.3CD4+TLMPs數(shù)目變化情況：CD4+TLMPs數(shù)目在AECOPD組[494（5-15585）]、COPD穩(wěn)定期組[953（4-6247）]、對照組[435（3-9863）]無顯著差異（P＞0.05）。 2.4BLMPs數(shù)目變化情況：AECOPD組BLMPs數(shù)目[46（6-1012）]明顯低于對照組[237(1-4685)]和COPD穩(wěn)定期組[114.5(37-876)]（P＜0.05）；而COPD穩(wěn)定期組BLMPs數(shù)目與對照組相比不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。多組間比較，BLMPs數(shù)目具有顯著差異（P＜0.05）。 2.5PMPs數(shù)目變化情況：AECOPD組PMPs的數(shù)目[81(29-370)]顯著低于COPD穩(wěn)定期組[378.5(56-1260)]和對照組[623.5(74-1531)]（P＜0.05），而COPD穩(wěn)定期組與對照組相比PMPs數(shù)目無統(tǒng)計學意義（P0.05）。多組間比較，PMPs數(shù)目有顯著差異（P＜0.05）。 2.6EMPs數(shù)目變化情況：AECOPD組EMPs數(shù)目[202(12-1873)]顯著低于COPD穩(wěn)定期組[493(124-1892)]和對照組[693.5(43-1847)]（P＜0.05），而COPD穩(wěn)定期組與對照組相比EMPs數(shù)目無統(tǒng)計學意義（P0.05）。多組間比較，EMPs數(shù)目有顯著差異（P＜0.05）。 3．COPD患者BALF中幾種微粒數(shù)目變化的相關性分析 對三組中各種微粒之間的數(shù)目變化關系進行相關性分析發(fā)現(xiàn)：在AECOPD組中，BLMPs數(shù)目變化與CD4+TLMPs數(shù)目變化呈低度負相關（rs=-0.344, P＜0.05），其余幾種微粒數(shù)目的變化之間無明確相關性（P0.05）。在COPD穩(wěn)定期組中，PMPs數(shù)目變化與BLMPs數(shù)目變化呈顯著正相關（rs=0.755, P＜0.05），其余幾種微粒之間數(shù)目變化無明確相關性（P0.05）。而對照組中，幾種微粒兩兩之間其數(shù)目變化均無相關性（P0.05）。 4．COPD患者BALF中微粒數(shù)目變化與年齡、性別、體表面積及吸煙狀況的關系：AECOPD組及COPD穩(wěn)定期組患者BALF中6種微粒數(shù)目變化與年齡、性別、體表面積及吸煙與否均無關（P0.05）。 結論： 1．COPD患者BALF中BLMPs、EMPs、PMPs數(shù)目明顯減少，而MMPs、CD8+TLMPs數(shù)目明顯增多，且這種變化在AECOPD患者中更為明顯。提示這幾種微粒數(shù)目的變化可能與COPD疾病分期有關。 2．COPD患者BALF中CD4+TLMPs數(shù)目與對照人群相比無明顯變化。 3．AECOPD患者BALF中BLMPs數(shù)目減少與CD4+TLMPs數(shù)目呈負相關；而在COPD穩(wěn)定期患者BALF中，，PMPs數(shù)目減少與BLMPs數(shù)目的變化呈顯著正相關。 4．COPD患者BALF中各種微粒數(shù)目變化與年齡、性別、體表面積及吸煙與否無關。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563.9

【引證文獻】

相關博士學位論文 前1條

1 邱倩;淋巴細胞微粒對氣道上皮細胞的作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

本文編號：1331393