發(fā)布時(shí)間：2017-12-11 13:32

  本文關(guān)鍵詞：富氧全氟化碳乳劑對(duì)油酸誘導(dǎo)家兔急性呼吸窘迫綜合征的保護(hù)作用研究

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【摘要】：重大自然災(zāi)害、重大礦難、高樓火災(zāi)等災(zāi)難事故以及社會(huì)安全事件等突發(fā)公共事件頻發(fā),均造成大面積的重大人員傷亡。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì),第一死亡高峰約在1h之內(nèi),這段時(shí)間死亡的數(shù)量占死亡的50%,多由于嚴(yán)重創(chuàng)傷直接導(dǎo)致死亡;而第二死亡高峰大約在傷后2-4h之內(nèi),這部分傷者主要是由于休克、低氧血癥而導(dǎo)致死亡。根據(jù)報(bào)道急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)是導(dǎo)致戰(zhàn)傷死亡的主要原因之一,同時(shí)也是和平時(shí)期危重癥患者死亡的主要原因之一。因此,低氧血癥是突發(fā)事件中易導(dǎo)致死亡的主要原因,但現(xiàn)有的急救產(chǎn)品存在攜帶不便、見效慢的缺點(diǎn),最終導(dǎo)致第一時(shí)間內(nèi)現(xiàn)場(chǎng)死亡人數(shù)最多。因此,在研制快速、高效、便攜式急救藥品是突發(fā)事件創(chuàng)傷緊急救治的重要物資基礎(chǔ)與保障,不僅具有廣闊的應(yīng)用前景,而且具有重要的社會(huì)意義。全氟化碳(Perfluorocarbon,PFC)具有良好的溶解非極性氣體的功能,可以作為氧氣和二氧化碳的運(yùn)載體,而二棕櫚酸卵磷脂(Dipalmitoylphosphatidylcholine,DPPC)是肺表面活性物質(zhì)(Pulmonary surfactant,PS)的主要成分,既可修飾PFC制成全氟化碳乳劑(Perfluorocarbon emulsion),又能夠提供肺表面活性物質(zhì)起到改善肺順應(yīng)性的作用。PFC乳劑具有改善低氧血癥的條件:(1)PFC具有易溶解大量氧氣和快速釋放的能力;(2)PFC和人工肺表面活性物質(zhì)都具有改善肺順應(yīng)性的能力。此外,目前已有文獻(xiàn)報(bào)道PFC具有抑制炎癥反應(yīng)作用。所以我們?cè)O(shè)想:(1)霧化吸入PFC乳劑可迅速提供大量的氧氣,起到改善低氧血癥的作用。(2)PFC和人工肺表面活性物質(zhì)改善肺順應(yīng)性,達(dá)到間接改善低氧血癥的目的。第一部分富氧全氟化碳乳劑對(duì)HCT116細(xì)胞的毒性及復(fù)氧研究目的探討富氧全氟化碳乳劑的體外細(xì)胞毒性以及對(duì)缺氧HCT116細(xì)胞的供氧能力。方法通過體外培養(yǎng)HCT116細(xì)胞后加入含不同濃度(0、0.03、0.06、0.12、0.25、0.5mg/ml)全氟化碳乳劑的培養(yǎng)基分別共孵育培養(yǎng)4、8、12小時(shí),采用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖率,進(jìn)而分析細(xì)胞毒性。將HCT116細(xì)胞分為正常對(duì)照組(始終在正常培養(yǎng)基和正常氧濃度下培養(yǎng))、缺氧4h組和缺氧8h組,采用液體石蠟制造缺氧模型,加入含不同濃度(0、0.05、0.1、0.2mg/ml)全氟化碳乳劑的培養(yǎng)基復(fù)氧2h,也采用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖率。HCT116細(xì)胞缺氧處理12小時(shí)后(正常對(duì)照組除外),加入正常培養(yǎng)基及含有不同濃度(0、0.05、0.1、0.2mg/ml)全氟化碳乳劑的培養(yǎng)基復(fù)氧2小時(shí),采用熒光顯微鏡檢測(cè)DCF熒光,從而分析該乳劑的供氧能力。結(jié)果關(guān)于細(xì)胞毒性研究,HCT116細(xì)胞與依次濃度梯度的全氟化碳乳劑共孵育4小時(shí)后,可見細(xì)胞增殖率都有一定提高(104%、105%、102%、104%、101%);與依次濃度梯度的全氟化碳乳劑共孵育8小時(shí)后,可見0.25、0.5mg/ml的濃度下細(xì)胞增殖率有稍下降(98%、97%),其余都有一定提高;與依次濃度梯度的全氟化碳乳劑共孵育12小時(shí)后,可見0.5mg/ml的濃度下細(xì)胞增殖率有一定下降(91%),但仍高于90%。關(guān)于細(xì)胞復(fù)氧研究,在HCT116細(xì)胞缺氧處理后,相比正常對(duì)照組,細(xì)胞增殖率明顯下降(88%、76%),并且缺氧8小時(shí)組較缺氧4小時(shí)組下降更明顯。當(dāng)采用含全氟化碳乳劑的培養(yǎng)基復(fù)氧處理后,相比正常培養(yǎng)基復(fù)氧的對(duì)照組,細(xì)胞增殖率有明顯提高,都是隨著全氟化碳乳劑濃度的升高,細(xì)胞增殖率也逐漸升高。其中,缺氧4小時(shí)處理的細(xì)胞,其細(xì)胞增殖率從88%上升到99%,并且0.1mg/ml濃度較0mg/ml濃度的細(xì)胞增殖率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;缺氧8小時(shí)的細(xì)胞,其細(xì)胞增殖率從76%上升至92%,并且0.2mg/ml濃度較0mg/ml濃度的細(xì)胞增殖率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用DCFH-DA探針檢測(cè)HCT116細(xì)胞缺氧復(fù)氧后產(chǎn)生的活性氧的含量。正常培養(yǎng)組未見明顯DCF熒光,經(jīng)過缺氧處理12小時(shí)可見一定的DCF綠色熒光。同時(shí),在缺氧處理12小時(shí)后給予全氟化碳乳劑復(fù)氧處理后,可見DCF熒光較前進(jìn)一步增強(qiáng),并且隨全氟化碳乳劑濃度的增加,DCF熒光強(qiáng)度也逐漸提高,提示細(xì)胞內(nèi)的活性氧含量逐漸升高。結(jié)論富氧全氟化碳乳劑對(duì)HCT116細(xì)胞無明顯細(xì)胞毒性,并且該乳劑中所攜帶的氧氣能夠釋放供缺氧HCT116細(xì)胞攝取利用。第二部分富氧全氟化碳乳劑對(duì)油酸誘導(dǎo)家兔急性呼吸窘迫綜合征的保護(hù)作用目的探討富氧全氟化碳乳劑對(duì)油酸誘導(dǎo)家兔急性呼吸窘迫綜合征的供氧情況。方法18只家兔麻醉后,隨機(jī)分為3組,每組6只,BC組為對(duì)照組,只行PE-50聚乙烯導(dǎo)管插入右股動(dòng)靜脈操作,不行其余任何干預(yù);OA組為油酸組,在造模成功后霧化吸入生理鹽水15min;OE組為油酸+乳劑組,在造模成功后霧化吸入富氧全氟化碳乳劑15min。OA組和OE組均從耳緣靜脈注入油酸0.1ml/kg建立ARDS模型,BC組注入等量生理鹽水。觀察和記錄基線、成模、霧化吸入后0、5、15、30、60、120、240、360min時(shí)的一般情況、呼吸頻率、血氧分壓、血清和肺灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-10濃度,同時(shí),計(jì)算Smith肺損傷評(píng)分、肺系數(shù)、肺通透指數(shù)、并觀察肺組織光鏡。結(jié)果觀察一般情況,家兔注射油酸后出現(xiàn)RR加快、嘴唇發(fā)紺、躁動(dòng)等缺氧癥狀,油酸組肺大體標(biāo)可見肺表面片狀出血和壞死,且伴有明顯的水腫,同時(shí)切面和氣管內(nèi)可見粉紅色泡沫狀液體流出;油酸+乳劑組肺表面可見點(diǎn)狀出血和壞死灶,橫切面和氣管內(nèi)可見少量粉紅色泡沫狀液體流出。當(dāng)ARDS造模成功時(shí),與對(duì)照組(53.0±11.2次/分)比較,油酸組和油酸+乳劑組呼吸頻率(108.7±24.1次/分、106.3±30.1次/分)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。當(dāng)ARDS造模成功時(shí),與對(duì)照組(113.5±7.4mm Hg)比較,油酸組和油酸+乳劑組PO2(58.2±3.2mm Hg、60.2±2.5mm Hg)明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在霧化吸入全氟化碳乳劑后0min,油酸+乳劑組PO2較前上升(67.2±11.8mm Hg),但油酸組較前下降(53.3±6.0mm Hg),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.035)。在霧化吸入全氟化碳乳劑后360min,與油酸組(66.2±15.2mm Hg)比較,油酸+乳劑組PO2(92.2±23.1mm Hg)明顯較高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.044)。與對(duì)照組(0.6±0.4)比較,油酸組和油酸+乳劑組Smith評(píng)分(10.7±0.8、9.3±1.0)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與油酸組(10.7±0.8)比較,油酸+乳劑組Simth評(píng)分(9.3±1.0)較低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026)。與對(duì)照組(0.5±0.1)比較,油酸組和油酸+乳劑組的肺系數(shù)(1.2±0.2、1.0±0.1)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);油酸組肺系數(shù)(1.2±0.2)比油酸+乳劑組(1.0±0.1)高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.033)。與對(duì)照組(2.9±0.3)比較,油酸組和油酸+乳劑組的肺通透系數(shù)(3.5±0.4、3.9±0.5)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。給藥后360min時(shí),與對(duì)照組(32.7±7.4 pg/ml)比較,油酸組、油酸+乳劑組血清TNF-α濃度(48.5±13.9 pg/ml、54.9±10.1 pg/ml)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與對(duì)照組比較,油酸組、油酸+乳劑組肺灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-10濃度明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。肺光鏡可見,對(duì)照組為正常肺組織表現(xiàn),油酸組與之比較肺泡內(nèi)可見大量淡粉色水腫液,肺泡中可見大量炎癥細(xì)胞,血管及肺泡中可見大量淤血,部分肺泡萎縮或消失。經(jīng)全氟化碳乳劑處理后與之比較,油酸+乳劑組可見各方面肺損傷較油酸組明顯減輕。結(jié)論富氧全氟化碳乳劑能夠提高油酸致家兔ARDS模型的血氧分壓和減輕肺組織的損傷程度,但不能抑制炎性因子的釋放,有待進(jìn)一步研究富氧全氟化碳乳劑的作用機(jī)制和有效成分。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R563.8

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本文編號(hào)：1278662