本文關(guān)鍵詞：MIF基因啟動(dòng)子多態(tài)性與肺結(jié)核病遺傳易感性關(guān)系的研究

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【摘要】：研究目的： 巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor, MIF)是一種促炎性細(xì)胞因子,主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞也可以表達(dá)MIF,在炎性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)理中起著重要作用。體外研究表明,人的MIF可以抑制致病性結(jié)核分枝桿菌的生長(zhǎng)繁殖。人體感染結(jié)核分枝桿菌后,主要由巨噬細(xì)胞聚集到感染部位,吞噬結(jié)核菌,提呈抗原,引起免疫反應(yīng),導(dǎo)致不同程度肺結(jié)核病的發(fā)生,而MIF又能抑制巨噬細(xì)胞的游走。因此,MIF在肺結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展中起著不容忽視的作用。本課題通過(guò)檢測(cè)肺結(jié)核病人(初治、復(fù)治)和健康對(duì)照組人群外周血清中MIF蛋白表達(dá)含量差異,mRNA轉(zhuǎn)錄量差異,并對(duì)MIF基因啟動(dòng)子-794區(qū)CATT重復(fù)序列微衛(wèi)星多態(tài)性和-173區(qū)G/C單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行分析,從而討論MIF與肺結(jié)核病遺傳易感性的關(guān)系,為今后研究肺結(jié)核病的發(fā)病機(jī)理和治療提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。 研究方法： 1、試驗(yàn)分組：健康對(duì)照組、初治肺結(jié)核病組、復(fù)治肺結(jié)核病組和肺結(jié)核病組。 2、收集所有研究對(duì)象外周全血EDTA抗凝血樣本及臨床資料,凝固后分離血清；提取外周全血中有核細(xì)胞的總DNA及總RNA,血清做ELISA檢測(cè)。 3、采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)血清中MIF蛋白含量,應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)其表達(dá)量的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 4、設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增-794區(qū)MIF基因啟動(dòng)子片段,擴(kuò)增產(chǎn)物純化后通過(guò)基因測(cè)序技術(shù)分析MIF基因-794區(qū)CATT5-8微衛(wèi)星多態(tài)性,統(tǒng)計(jì)基因型和等位基因的分布頻率,對(duì)其分布情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 5、設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增-173區(qū)MIF基因啟動(dòng)子片段,用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測(cè)MIF基因-173區(qū)G/C單核苷酸多態(tài)性,統(tǒng)計(jì)基因型和等位基因的分布頻率,對(duì)其分布情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 6、設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增目的基因(MIF)和內(nèi)參基因(β-actin),將高品質(zhì)的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (QRT-PCR)法檢測(cè)mRNA轉(zhuǎn)錄量,利用2-△△CT法進(jìn)行相對(duì)定量分析,并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 研究結(jié)果： 1、肺結(jié)核病組血清MIF蛋白表達(dá)量高于健康對(duì)照組(P0.05)。肺結(jié)核病組-794區(qū)CATT位點(diǎn)基因型(5/5+5/6+6/6)和(7/X+8/X)血清MIF蛋白表達(dá)量均高于健康對(duì)照組(P0.05)。肺結(jié)核病組-173區(qū)G/C位點(diǎn)基因型GG和(GC+CC)血清MIF蛋白表達(dá)量均高于健康對(duì)照組(P0.05)。 2、MIF基因啟動(dòng)子-794區(qū)CATT位點(diǎn)基因型(5/X+6/X vs.7/7+7/8)分布在初治肺結(jié)核病組與健康對(duì)照組、肺結(jié)核病組與健康對(duì)照組比較中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；等位基因(5+6vs.7+8)分布在初治肺結(jié)核病組與健康對(duì)照組、肺結(jié)核病組與健康對(duì)照組比較中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3、MIF基因啟動(dòng)子-173區(qū)G/C位點(diǎn)基因型(GGvs. GC+CC)分布在初治肺結(jié)核病組、復(fù)治肺結(jié)核病組、肺結(jié)核病組與健康對(duì)照組比較中差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；而等位基因(Gvs.C)分布在各試驗(yàn)組與健康對(duì)照組比較中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4. MIF mRNA轉(zhuǎn)錄量在各試驗(yàn)組與健康對(duì)照組比較中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；各試驗(yàn)組在對(duì)應(yīng)-794區(qū)CATT位點(diǎn)基因型(5/5+5/6+6/6)和(7/X+8/X)與健康對(duì)照組比較MIF mRNA含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；各試驗(yàn)組在對(duì)應(yīng)-173區(qū)G/C位點(diǎn)基因型GG和(GC+CC)與健康對(duì)照組比較MIF mRNA含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1、肺結(jié)核病組(初治、復(fù)治)外周血清中MIF蛋白表達(dá)量較健康對(duì)照組升高,提示MIF參與肺結(jié)核病的發(fā)生發(fā)展。CATT重復(fù)次數(shù)越高的組中,MIF蛋白表達(dá)量越高。攜帶基因突變C的組中,MIF蛋白表達(dá)量高。 2、MIF基因啟動(dòng)子微衛(wèi)星多態(tài)性位點(diǎn)-794與肺結(jié)核病易感性相關(guān)。等位基因高重復(fù)次數(shù)的CATT7、CATT8易患肺結(jié)核病,而肺結(jié)核病的復(fù)發(fā)與CATT重復(fù)序列次數(shù)不相關(guān)。 3、MIF基因啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)-173與肺結(jié)核病易感性相關(guān)。攜帶基因突變C的易患肺結(jié)核病,而肺結(jié)核病的復(fù)發(fā)與G/C多態(tài)性不相關(guān)。 4、肺結(jié)核病組(初治、復(fù)治)與健康對(duì)照組MIF mRNA轉(zhuǎn)錄量有差異。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R521

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本文編號(hào)：1275166